MELITTIN acetate   中文名称: 蜂毒肽素

PLA2

蜂毒含有一种称为蜂毒肽的肽，它通过增加高分子量酶的活性来刺激免疫系统[1]。从蜂毒中提取一种称为蜂毒素的细胞毒性肽。 Melittin 对 A2780CR 和 A2780 细胞的 IC50 值分别为 4.5 和 6.8 μg/mL，表明其毒性。蜂毒肽具有天然的抗病毒、抗菌和抗炎特性。此外，它还表现出对多种癌细胞系的不同抗癌作用，包括来自胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌、前列腺癌、宫颈癌和肺癌的细胞系。蜂毒肽是一种两亲性溶血肽，可能通过阻止细胞生长、引发细胞凋亡和导致立即坏死而具有抗癌特性。通过阻断 PI3K/Akt/mTOR 信号通路，蜂毒肽还可以阻止 EGF 诱导的细胞侵袭，尽管这种作用主要表现在乳腺癌细胞中 [2]。

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通过测定磷脂酶A2 （PLA2）刺激蛋白PLAP对两个纯化PLA2s的影响来评估PLAP在PLA2活性调控中的作用。一个约。采用阳离子交换高效液相色谱法和免疫亲和高效液相色谱法（含抗血清）从小鼠胸腺瘤细胞EL-4细胞中纯化出14kda酶。一个约。采用疏水、阴离子交换、羟基磷灰石、凝胶过滤等高效液相色谱法从小鼠乳腺癌源性细胞中纯化110 kDa酶。PLAP和蜂毒蛋白（一种来自蜂毒的免疫相关的PLA2刺激肽）都没有增加高分子量酶的活性。相比之下，PLAP对低分子量PLA2的刺激超过20倍。蜂毒素的5倍刺激。在蛋白与磷脂的比例为1:10(6)，蜂毒蛋白与磷脂的比例为1:3时，PLAP对酶活性的刺激作用。因此，PLAP介导的PLA2活性刺激可能包括PLAP和酶之间的相互作用，而蜂毒素刺激则涉及蜂毒素和磷脂之间的相互作用。[1]

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在本研究中，采用液相色谱-质谱法（LC-MS）表征了两种人卵巢癌细胞系A2780（顺铂敏感）和A2780CR（顺铂耐药）暴露于蜂毒肽（一种来自蜂毒的细胞毒性肽）后的代谢谱。此外，利用Biolog微阵列技术检测两种细胞系对碳源的利用，支持代谢组学数据。利用MZmine 2.14软件进行数据提取和数据库检索，提供代谢物列表。主成分分析（PCA）明确了顺铂敏感株和耐药株与各自对照的分离。顺铂耐药细胞对蜂毒素的敏感性略高于敏感细胞，IC50值分别为4.5和6.8 μg/mL，但后者在处理后的代谢扰动最大。蜂毒素在顺铂敏感细胞中引起的变化主要是脯氨酸/谷氨酰胺/精氨酸通路氨基酸水平的降低，以及肉毒碱、多胺、三磷酸腺苷（ATP）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）水平的降低。对能量代谢的影响得到了生物学分析数据的支持。两种细胞系的脂质组成有很大差异，A2780细胞的几种醚类脂质含量高于A2780CR细胞。蜂毒素对细胞的脂质组成也有一定的影响。总之，本研究提示蜂毒素可能在癌症治疗中有一定的辅助治疗潜力。[2]

LDH测定[2]
采用乳酸脱氢酶（LDH）释放法测定Melittin对A2780和A2780CR细胞的细胞毒性。乳酸脱氢酶释放到培养基中是由于细胞凋亡或坏死引起的膜完整性丧失。短暂,A2780和A2780CR细胞被播种在1×10~4个细胞/ 96 -孔板和孵化37°C和5%二氧化碳在湿润的气氛中24 h。细胞治疗与不同浓度的Melittin24 h。然后,上层(50μL)治疗的细胞转移到96 -平底的盘子,和50μL LDH的反应混合(乳酸脱氢酶活力测定装备,MAK066)增加了30分钟。最后,在490 nm处测定样品中LDH活性的橙色强度。与未处理的细胞相比，Melittin处理的A2780和A2780CR细胞中LDH释放呈剂量依赖性增加。数值用三个独立实验的平均值±SD表示。

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Caspase活性测定[2]
采用底物Ac-DEVD-AMC对caspase-3进行了caspase活性荧光测定。A2780和A2780CR细胞以1 × 10~4个/孔接种于costar 96孔黑板中，37℃和5% CO2在湿化气氛中孵育24 h，然后用不同浓度Melittin处理6和24 h，测定caspase-3活性。Staurosporine以10 μM的浓度诱导细胞凋亡。对照细胞单独用培养基处理。caspase-3实验缓冲液的制备方法如上所述。在每个孔中加入caspase-3缓冲液（3倍），在37°C、5% CO2中孵育1小时。使用Spectramax M3酶标仪在360 nm（激发）和460 nm（发射）处测量荧光。从实验井的荧光值中减去背景的平均荧光值。统计分析采用单因素方差分析和Bonferroni多重比较检验。

Melittin [2]
细胞活力测定 用反相液相色谱法从蜂毒中纯化蜂毒素，在无菌水中重组，形成1 mg/mL的原液，然后在- 20°C下保存，直到需要分析。采用Alamar®Blue （AB）细胞活力试剂测定细胞活力。A2780和A2780CR细胞被播种在1×10~4细胞/ 96 -孔板和孵化37°C和5%的二氧化碳在湿润的气氛中后24 h。这个潜伏期,细胞治疗与不同浓度的<强> < /强>从0.5到14肽µg / mL 100μL的媒介,和re-incubated 37°C和5%的二氧化碳进一步24 h。特里同X 1% (v / v)和细胞培养基作为积极的和消极的控制,分别。在此之后，加入终浓度为10% （v/v）的AB，所得混合物在37℃和5% CO2下再孵育4小时。然后，在560nm的激发波长下读取板，在SpectraMax M3微孔板读取仪上记录590nm的发射。背景校正后的荧光读数通过相对于平均阴性控制值的百分比表示，转换为每个测试孔的细胞活力数据。 <人力资源> Melittin对细胞代谢组[2]
影响的测定 将A2780和A2780CR细胞株分别以6.8 μg/mL和4.5 μg/mL浓度<强>蜂毒素处理24 h (n = 5)，以75 × 104个/mL的剂量在T-25细胞培养瓶中孵育1倍倍（48 h），再以Melittin处理，再孵育24 h。除去培养基，用3ml磷酸盐缓冲盐水（PBS）在37℃下洗涤细胞两次，然后裂解。细胞裂解物用冰甲醇：乙腈：水（50:30:20）提取（每2 × 106个细胞1 mL）。用异丙醇（4℃）提取脂质。刮取细胞，细胞裂解液在热混合器上以1440转/分钟（转/分）在4°C下混合12分钟，然后在0°C下以13500转/分离心15分钟。收集上清液并转移到HPLC小瓶中进行LC-MS分析。在分析过程中，自动进样器的温度保持在4℃。在每次分析运行中，分别注入如前所述制备的真实标准代谢物混合物和混合质量控制（QC）样品，以促进鉴定，并评估分析方法的稳定性和重复性。通过从所有样品中取等量的样品并将其放入同一HPLC瓶中获得混合QC样品。

Metabolism / Metabolites
Free toxin may be removed by opsonization via the reticuloendothelial system (primarily the liver and kidneys) or it may be degraded through cellular internalization via the lysosomes. Lysosomes are membrane-enclosed organelles that contain an array of digestive enzymes, including several proteases.

Toxicity Summary
Melittin has strong haemolytic activity. It integrates into cell membranes and has multiple effects, probably, as a result of its interaction with negatively charged phospholipids. Melittin inhibits well known transport pumps such as the Na+-K+-ATPase and the H+-K+-ATPase, and increases the permeability of cell membranes to ions, particularly Na+ and indirectly Ca2+, because of the Na+-Ca2+-exchange. (A608)

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Toxicity Data
LD50: 6.00 mg/kg (Intravenous, Mouse) (A686)

[1]. Responses of purified phospholipases A2 to phospholipase A2 activating protein (PLAP) and Melittin. Biochim Biophys Acta. 1993 Feb 10;1166(1):124-30.

[2]. Metabolomic Profiling of the Effects of Melittin on Cisplatin Resistant and Cisplatin Sensitive Ovarian Cancer Cells Using Mass Spectrometry and Biolog Microarray Technology. Metabolites. 2016 Oct 13;6(4). pii: E35.

Melittin is the main component of bee venom. It is a powerful stimulator of phospholipase A2 and also exhibits potent anti-microbial activity. (L1014)
Basic polypeptide from the venom of the honey bee (Apis mellifera). It contains 26 amino acids, has cytolytic properties, causes contracture of muscle, releases histamine, and disrupts surface tension, probably due to lysis of cell and mitochondrial membranes.
See also: Melittin (annotation moved to).

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Melittin is a 26-membered polypeptide consisting of Gly, Ile, Gly, Ala, Val, Leu, Lys, Val, Leu, Thr, Thr, Gly, Leu, Pro, Ala, Leu, Ile, Ser, Trp, Ile, Lys, Arg, Lys, Arg, Gln and Gln-NH2 residues joined in sequence. It is the principal active component of bee venom. It has a role as an animal metabolite, a venom, an EC 2.7.11.13 (protein kinase C) inhibitor, a hepatoprotective agent, an apoptosis inducer, a neuroprotective agent and an antineoplastic agent. It is a polypeptide and a peptidyl amide.
Melittin has been reported in Apis mellifera with data available.
Basic polypeptide from the venom of the honey bee (Apis mellifera). It contains 26 amino acids, has cytolytic properties, causes contracture of muscle, releases histamine, and disrupts surface tension, probably due to lysis of cell and mitochondrial membranes.
See also: Melittin (annotation moved to).

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In conclusion, this study shows that the cisplatin sensitive A2780 cells contain relatively higher levels of ether lipids and polyamines, which might result in increased membrane stability and repair and thus resistance to the lytic action of melittin in comparison with the cisplatin resistant A2780CR cells. After exposure to melittin, the levels of most of the significantly altered metabolites, particularly amino acids and TCA cycle intermediates, were lower in A2780 compared to A2780CR cells, suggesting different metabolic responses in the two cell lines. The large increases in choline and glycerophosphocholine in A2780 cells may be related to increased de novo lipid synthesis and re-direction of cellular metabolism. Thus, analysis of the full lipidome could offer a more valuable insight. Given that melittin interacts with cell membranes, the observed effects might suggest that the membranes are less adaptable in the cisplatin resistant cells compared to the sensitive ones. Over all, this study shows that a LC-MS based metabolomics approach for the assessment of drug effects in vitro provides a powerful tool for obtaining insights into the mechanism of action of potential therapeutic agents, while offering the possibility to identify key metabolite markers for in vivo monitoring of tumour responsiveness to standard chemotherapy. Melittin might serve as a valuable adjuvant in cancer chemotherapy for overcoming chemoresistance. [2]

C131H229N39O31-CH3COOH

2806.51

2845.757

37231-28-0

16129627

White to off-white solid powder

>121 °C (dec.) (lit.)

112 °C

-2.7

1150

41

37

99

201

6300

0

VDXZNPDIRNWWCW-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C131H229N39O31/c1-23-71(16)102(163-97(176)60-135)122(194)146-62-98(177)148-74(19)109(181)164-100(69(12)13)124(196)160-88(55-65(4)5)116(188)155-84(41-30-33-51-134)115(187)165-101(70(14)15)125(197)161-90(57-67(8)9)118(190)168-106(77(22)173)128(200)169-105(76(21)172)123(195)147-63-99(178)150-92(58-68(10)11)129(201)170-54-36-44-94(170)121(193)149-75(20)108(180)158-89(56-66(6)7)117(189)166-104(73(18)25-3)127(199)162-93(64-171)120(192)159-91(59-78-61-145-80-38-27-26-37-79(78)80)119(191)167-103(72(17)24-2)126(198)157-83(40-29-32-50-133)111(183)154-85(42-34-52-143-130(139)140)112(184)152-82(39-28-31-49-132)110(182)153-86(43-35-53-144-131(141)142)113(185)156-87(46-48-96(137)175)114(186)151-81(107(138)179)45-47-95(136)174/h26-27,37-38,61,65-77,81-94,100-106,145,171-173H,23-25,28-36,39-60,62-64,132-135H2,1-22H3,(H2,136,174)(H2,137,175)(H2,138,179)(H,146,194)(H,147,195)(H,148,177)(H,149,193)(H,150,178)(H,151,186)(H,152,184)(H,153,182)(H,154,183)(H,155,188)(H,156,185)(H,157,198)(H,158,180)(H,159,192)(H,160,196)(H,161,197)(H,162,199)(H,163,176)(H,164,181)(H,165,187)(H,166,189)(H,167,191)(H,168,190)(H,169,200)(H4,139,140,143)(H4,141,142,144)

2-[[5-amino-2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[2-[[2-[[2-[2-[[1-[2-[[2-[[2-[[2-[[2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[2-[[2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]-3-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]propanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]acetyl]amino]-4-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]propanoylamino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]hexanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]pentanediamide, acetate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。