Methyl-β-cyclodextrin   中文名称: 甲基倍他环糊精

IC50: 3.33-4.23 mM (PEL cell growth)[1]; Solubility enhancer;
Deodorizer
Actin cytoskeleton. Treatment with 1 mM Methyl-β-cyclodextrin (MCD) for 4 hours significantly depolymerized the actin network in HeLa cells, reducing the fluorescence intensity of phalloidin-stained actin filaments by 49 ± 3% (p < 0.01). MCD did not perturb the microtubule network [1]
Plasma membrane cholesterol. Methyl-β-cyclodextrin (MβCD) selectively extracts cholesterol from the plasma membrane of mammalian cells [2]

为了增加葡萄糖和纳米颗粒等小分子的摄入，甲基-β-环糊精被广泛用于提高细胞的通透性[4]。环糊精是一种具有亲脂性核心室和亲水性外部的环状寡糖。一般来说，环糊精分子不会穿透亲脂膜，因为它们是相当大的分子，具有许多氢源和受体。环糊精在制药工业中的主要应用是作为络合剂来提高难溶性药物的水溶性、生物利用度和稳定性。药物的生物利用度是环糊精在医学应用中的众多用途之一[4]。通过快速去除质膜上的胆固醇，甲基-β-环糊精导致 PEL 细胞发生半胱天冬酶依赖性死亡。所有 PEL 细胞系的发育均受到甲基-β-环糊精的抑制，且呈剂量依赖性。每个细胞系的 IC50 为 3.33–4.23 mM[5]。在几种消除细胞胆固醇的药物中，甲基-β-环糊精（一种具有 β 吡喃葡萄糖单元的高度可溶性环状七糖）被发现是最有效的[5]。

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Methyl-β-cyclodextrin (MCD) (1 mM, 4小时) 解聚 HeLa 细胞中的肌动蛋白细胞骨架，使 F-肌动蛋白荧光强度降低 49%。这导致桩蛋白黏着斑面积减少 56%，磷酸化黏着斑激酶 (pFAK) 面积减少 66%。原子力显微镜显示细胞硬度降低 50% (从 4.3 ± 0.3 kPa 降至 2.1 ± 0.2 kPa)。牵引力显微镜显示细胞牵引力降低 65% (从 367 ± 15 Pa 降至 128 ± 11 Pa)。MCD 处理使微管靶向药物 (MTAs) 如 BODIPY-长春碱、藏红花素和姜黄素的细胞内积累量相对于未处理细胞增加约 50%。用 1 mM MCD 预处理 4 小时可增强长春碱、紫杉醇和藏红花素在 HeLa 细胞中的抗增殖作用，降低其 IC50 值。例如，长春碱的 IC50 从单用时的 4.2 ± 0.1 nM 降至 MCD 预处理后的 1.9 ± 0.2 nM。MCD 预处理还增强了长春碱对细胞周期 G2/M 期阻滞的效应，并增强了长春碱、紫杉醇和藏红花素对间期和有丝分裂微管的破坏作用。此外，低剂量 MCD (0.25 或 1 mM) 与长春碱联用可协同抑制 HeLa 细胞增殖，联合指数 (CI) 值分别为 0.55 和 0.43。在乳腺癌 (MCF-7)、肝癌 (Huh7)、前列腺癌 (PC3) 细胞以及多药耐药乳腺癌细胞系 (EMT6/AR1) 中也观察到 MCD 预处理的类似增敏效应 [1]
单独用 1 mM MCD 预处理 4 小时，在 24 小时内不影响 HeLa 细胞增殖，但更高浓度则显示出抑制效应 [1]
用 10 mM 的 Methyl-β-cyclodextrin (MβCD) 在 37°C 下预处理多种细胞系 (HEp-2, NIH/3T3, MDCK II, A431) 15 分钟，可强烈抑制网格蛋白依赖的内吞作用。在所有测试的细胞系中，转铁蛋白的内吞减少了约 50%。表皮生长因子 (EGF) 的内吞作用也受到强烈抑制 (减少约 40%)。相比之下，蓖麻毒素 (一种通过网格蛋白依赖和非依赖途径进入的通用膜标记物) 的内吞受影响较小，仅显示约 20% 的抑制。这种差异效应表明 MβCD 特异性地扰乱网格蛋白依赖的内吞途径，而非网格蛋白非依赖途径。转铁蛋白内吞的抑制具有浓度依赖性 (在约 10 mM MβCD 时减少 50%)，并且在移除 MβCD 后完全可逆。内吞作用的恢复随时间发生 (3小时后完全恢复)，即使在无血清培养基中也能恢复，并且依赖于胆固醇的合成，因为洛伐他汀 (一种胆固醇合成抑制剂) 会抑制这种恢复，除非同时添加水溶性胆固醇。电子显微镜显示，MβCD 处理导致典型的内陷小窝消失，并强烈抑制网格蛋白包被小窝的内陷，导致浅的、扁平的小窝积累。然而，定量免疫金标记显示，转铁蛋白受体 (TfR) 在这些浅的包被小窝中仍然与对照细胞一样被浓缩 (~7倍)。MβCD 处理后，转铁蛋白的表面结合增加了近两倍，这与内化被抑制的结果一致。10 mM MβCD 处理并未显著影响细胞蛋白质合成或细胞内钾含量，表明在这些条件下没有大规模的质膜通透性改变 [2]
对转铁蛋白内吞的抑制作用对于能够结合胆固醇的环糊精 (MβCD 和 β-环糊精) 是特异的，而 α-环糊精和 γ-环糊精没有显著影响 [2]
使用Methyl-β-cyclodextrin处理细胞可阻断迁移体的形成，表明胆固醇是迁移体生物发生所必需的[3]

甲基-β-环糊精可有效抑制 PEL 异种移植小鼠模型中 PEL 细胞的生长和侵袭，且不会引起任何明显的副作用。用甲基-β-环糊精治疗的小鼠看起来很健康，而未治疗的小鼠则腹部增大。用甲基-β-环糊精治疗的小鼠体重明显低于对照组。用甲基-β-环糊精治疗的小鼠的腹水量比未治疗的小鼠小得多[4]。在对人类和动物的研究中发现环糊精可用于增强几乎所有药物制剂的分布。目前全球市场上有大约 30 种含有药物/环糊精复合物的不同药品[6]。

PEL 细胞在 96 孔微量培养板中，在不同浓度的甲基-β-环糊精 (0-10 mM) 存在下，以 0.1 mL 的终体积在 37°C 下孵育 24 小时，一式三份。随后，将 MTT（0.5 mg/mL 最终浓度）添加到每个孔中。再孵育 3 小时后，加入 100 μL 0.04 N HCl 以溶解晶体。测定 570 nm 处的吸收值[1]。

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四唑染料甲硫基四唑（MTT）试验[5]
采用MTT法测定M-β-CyD对PEL细胞系的抗增殖活性。简而言之，在37°C下，在终体积为0.1 ml的不同浓度的M-β-CyD（0-10 mM）存在下，将2×104个细胞在96孔微培养板中孵育24小时。随后，向每个孔中加入MTT（终浓度0.5mg/ml）。在额外孵育3小时后，加入100μl 0.04 N HCl以溶解晶体。用自动酶联免疫吸附试验（ELISA）平板读数器测定570nm处的吸收值。将值归一化为未处理（对照）样本。

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细胞活力测定[5]
如前所述，通过碘化丙啶（PI）排除法检查细胞存活率。简而言之，BCBL-1细胞（2×105个细胞/ml）在有或没有M-β-CyD的情况下在6孔培养板中培养1-6小时。孵育后，用PI（终浓度；2μg/ml）对细胞进行染色，并通过LSR II流式细胞术分析细胞存活率。

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1) 细胞骨架和黏着斑的免疫荧光染色: 将细胞接种在盖玻片上，用 1 mM Methyl-β-cyclodextrin (MCD) 处理 4 小时，随后按指定方法用其他药物处理。孵育后，固定、透化并封闭细胞。在 4°C 下用一抗 (如抗 β-微管蛋白、抗桩蛋白、抗 pFAK) 孵育过夜，然后使用相应的荧光二抗。用荧光鬼笔环肽染色肌动蛋白，用 Hoechst 染色细胞核。使用共聚焦显微镜采集图像，并使用图像分析软件定量荧光强度或黏着斑面积 [1]
2) 药物积累实验: 用 1 mM MCD 处理细胞 4 小时。更换为含有荧光药物 (例如，5 nM BODIPY-长春碱处理 6 小时；1 µM 藏红花素或 5 µM 姜黄素处理 24 小时) 的新鲜培养基。然后胰蛋白酶消化细胞，洗涤，计数并裂解。测量上清液 (胞质提取物) 的荧光 (BODIPY-长春碱) 或吸光度 (藏红花素和姜黄素)，以确定相对于未处理对照的细胞内药物浓度 [1]
3) 细胞增殖实验 (磺基罗丹明B法): 将细胞接种到培养板中，贴壁后，用 1 mM MCD (或 200 nM Latrunculin B 作为阳性对照) 孵育 4 小时。更换为含有不同浓度测试药物 (如长春碱、紫杉醇、藏红花素) 的新鲜培养基。孵育一个细胞周期后，固定细胞，用磺基罗丹明 B 染色，测量 520 nm 处的吸光度，以确定增殖抑制情况并计算 IC50 值 [1]
4) 流式细胞术细胞周期分析: 用 1 mM MCD 处理细胞 4 小时，随后用药物 (如 5 nM 长春碱) 孵育 24 小时。然后固定细胞，用 RNase A 和碘化丙啶 (PI) 处理，并通过流式细胞术分析 DNA 含量和细胞周期分布 [1]
5) BrdU 实验: 将盖玻片上的细胞用 1 mM MCD 处理 4 小时 (或不做处理)，随后用 5 nM 长春碱处理 8 小时。在孵育的最后 4 小时加入 BrdU 试剂。然后对细胞进行免疫荧光处理，使用抗 BrdU 抗体和荧光二抗标记 S 期细胞。用 Hoechst 复染细胞核。手动计数 BrdU 阳性细胞的百分比 [1]
6) 胰蛋白酶脱粘附动力学实验: 将细胞接种在盖玻片上并进行药物处理。处理后，加入胰蛋白酶，并间隔一定时间拍摄延时图像，直到细胞完全脱附。量化细胞面积随时间的变化，并使用曲线拟合软件计算描述脱附动力学的时间常数 (τ1 和 τ2) [1]
7) 牵引力显微镜: 将细胞接种在包埋有荧光微球并涂有胶原蛋白的软聚丙烯酰胺凝胶上。用 MCD 和/或其他药物处理后，拍摄细胞的相差图像和微球的荧光图像。然后裂解细胞，再次拍摄微球图像。计算微球位移场，并使用专门的分析代码计算细胞施加的牵引力 [1]
8) 原子力显微镜: 用 1 mM MCD 处理盖玻片上的细胞 4 小时。使用金字塔形探针在接触模式下获取细胞表面的力曲线。通过将力曲线与 Hertz 模型拟合来计算细胞的刚度 (杨氏模量) [1]
9) 联合指数测定: 将细胞与不同浓度的长春碱及 0.25 mM 或 1 mM MCD 组合孵育 24 小时。评估细胞增殖情况。从剂量反应曲线确定每种药物单用的中位剂量 (Dm)。使用 Chou 和 Talalay 方法计算联合指数 (CI)，CI < 1 表示协同作用 [1]
1) 内吞实验 (转铁蛋白、EGF、蓖麻毒素): 清洗细胞，并在 HEPES 缓冲的培养基中，于 37°C 下用或不用 Methyl-β-cyclodextrin (MβCD) (例如，10 mM) 预处理 15 分钟。然后向细胞中加入放射性标记的配体 (¹²⁵I-转铁蛋白、¹²⁵I-EGF 或 ¹²⁵I-蓖麻毒素)。对于转铁蛋白和 EGF，在 37°C 下短时间孵育 (5 或 10 分钟) 后，去除表面结合的配体 (对转铁蛋白使用蛋白酶处理，对 EGF 使用低 pH 缓冲液洗涤)。使用 γ 计数器测量剩余的细胞相关放射性 (代表内吞的配体)。对于蓖麻毒素，在孵育 15 分钟后，用含有乳糖的培养基洗涤细胞以去除表面结合的毒素，并测量内化的放射性 [2]
2) 胆固醇提取实验: 用 [³H]胆固醇标记细胞，标记时间短 (15 分钟) 以标记细胞表面，或标记 20 小时以与细胞内库平衡。洗涤后，将细胞在含有或不含 10 mM MβCD 的培养基中于 37°C 下孵育不同时间 (15, 30, 60 分钟)。然后裂解细胞，通过闪烁计数测量裂解物中剩余的放射性，以确定胆固醇被提取的百分比 [2]
3) 电子显微镜和形态计量分析: 用或不用 MβCD 处理的细胞用甲醛/戊二醛固定，用四氧化锇后固定，并处理包埋于树脂中。超薄切片染色后，用电子显微镜观察。对内陷小窝的频率和网格蛋白包被小窝的形态 (分类为浅的、内陷的或几乎脱落的) 进行定量 [2]
4) 转铁蛋白受体的免疫金标记: 固定细胞，与一抗 (抗转铁蛋白受体抗体) 孵育，然后与胶体金颗粒偶联的二抗孵育。经电子显微镜处理后，量化细胞表面金颗粒的分布 (在包被小窝内与外部)，以计算受体在包被小窝内的浓缩效率 [2]
5) 蛋白质合成实验: 用或不用 MβCD 处理细胞，然后用 [³H]亮氨酸孵育 10 分钟。洗涤细胞，用三氯乙酸沉淀，并使用 β 计数器测量沉淀蛋白质中掺入的放射性 [2]
6) 细胞内钾含量测量: 用或不用 MβCD 处理的细胞用氯化镁洗涤，风干，并溶解于氢氧化钠中。使用离子选择性电极测定溶液中的钾含量 [2]
7) 可逆性和胆固醇依赖性实验: 用 MβCD 处理细胞以抑制内吞作用，然后更换为不含 MβCD 的新鲜培养基。细胞在存在或不存在胎牛血清、水溶性胆固醇和/或洛伐他汀的情况下，进一步孵育不同时间 (15分钟至3小时)。在此恢复期后，按上述方法测量转铁蛋白内吞作用，以评估恢复情况 [2]
用Methyl-β-cyclodextrin处理细胞以消耗胆固醇。处理后，通过共聚焦显微镜评估迁移体的形成。该处理抑制了迁移体的形成，支持胆固醇在迁移体组装中的作用[3]

NOD/Rag-2/Jak3双缺陷（NRJ）小鼠饲养于我院动物实验设施内，并按照机构指南进行监测。所有实验程序和方案均已获得熊本大学机构动物护理和使用委员会的批准。将7 × 10⁶个BCBL-1细胞悬浮于200 μl PBS中，腹腔注射至8至10周龄的雌性NRJ小鼠体内。随后，小鼠接受腹腔注射PBS或M-β-CyD（500 mg/kg/天）治疗。通过测量体重和腹水量评估肿瘤负荷。[5]

用 10 mM 甲基-β-环糊精 (MβCD) 处理细胞 15 分钟后，未观察到明显的膜渗漏，这表现为多种细胞系（HEp-2、MDCK II、A431、NIH/3T3）中蛋白质合成未减少，细胞内钾含量也未发生变化 [2]

[1]. Methyl-β-cyclodextrin, an actin depolymerizer augments the antiproliferative potential of microtubule-targeting agents. Sci Rep. 2019 May 21;9(1):7638.

[2]. Extraction of cholesterol with methyl-beta-cyclodextrin perturbs formation of clathrin-coated endocytic vesicles. Mol Biol Cell. 1999;10(4):961-974.

[3]. Migrasome formation is mediated by assembly of micron-scale tetraspanin macrodomains. Nat Cell Biol. 2019 Aug;21(8):991-1002.

[4]. Cholesterol depletion from the plasma membrane triggers ligand-independent activation of the epidermal growth factor receptor. J Biol Chem. 2002 Dec 20;277(51):49631-7.

[5]. The antitumor effects of methyl-β-cyclodextrin against primary effusion lymphoma via the depletion of cholesterol from lipid rafts. Biochem Biophys Res Commun. 2014 Dec 12;455(3-4):285-9.

[6]. Cyclodextrins in delivery systems: Applications. J Pharm Bioallied Sci. 2010 Apr;2(2):72-9.

环糊精（CDs）是一类具有亲水性外表面和亲脂性中心空腔的环状低聚糖。CD分子相对较大，含有多个氢供体和受体，因此通常难以穿透亲脂性膜。在制药工业中，CDs主要用作络合剂，以提高难溶性药物的水溶性，并增强其生物利用度和稳定性。CDs在药物应用中用途广泛，包括提高药物的生物利用度。本文介绍了目前基于CD的治疗药物，并探讨了其未来可能的应用。此外，本文还综述了含CD的聚合物及其在药物递送中的应用。尤其值得关注的是，含CD的聚合物在核酸递送方面具有独特的优势。人体和动物研究表明，CDs几乎可以用于改善任何类型药物制剂的递送效果。目前，全球市场上约有30种含有药物/环糊精复合物的药品。[6]

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原发性渗出性淋巴瘤（PEL）是一种侵袭性强且对化疗耐药的非霍奇金淋巴瘤亚型，主要发生于晚期艾滋病患者。本研究在体外和体内检测了甲基-β-环糊精（M-β-CyD）的抗肿瘤活性。M-β-CyD通过耗竭细胞膜上的胆固醇，快速诱导PEL细胞发生caspase依赖性凋亡。在PEL异种移植小鼠模型中，M-β-CyD显著抑制了PEL细胞的生长和侵袭，且未观察到明显的不良反应。这些结果强烈提示M-β-CyD具有成为PEL有效抗肿瘤药物的潜力。[5]

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甲基-β-环糊精（MCD）是一种已知的药理辅料，可使肌动蛋白细胞骨架解聚。本研究探讨了MCD介导的肌动蛋白解聚对多种细胞表型的影响，包括牵引力、细胞刚度、黏着斑和细胞内药物积累。除降低细胞收缩牵引力外，MCD还能显著抑制黏着斑的成熟。收缩力和黏着斑的改变会影响胰蛋白酶介导的细胞脱离动力学。此外，MCD介导的肌动蛋白解聚使微管靶向药物（MTAs）的细胞内积累量较未处理细胞增加约50%。由于MCD处理可提高药物的细胞内浓度，我们假设低剂量MTAs可以有效杀伤MCD敏感的癌细胞。我们在宫颈癌、乳腺癌、肝细胞癌、前列腺癌和多药耐药乳腺癌细胞中的实验结果证实了上述假设。此外，MCD与MTAs联合使用可协同抑制肿瘤细胞增殖。这些结果表明，MCD 与微管靶向药物 (MTAs) 联合用于癌症化疗具有潜在应用价值，并提示同时靶向肌动蛋白和微管可能对癌症治疗有益。重要的是，这些结果为肌动蛋白和微管在调节细胞黏附力和动力学方面的相互作用提供了重要的见解。[1]

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研究人员利用甲基-β-环糊精 (MβCD) 从质膜中选择性提取胆固醇，在 HEp-2 和其他细胞系中研究了胆固醇对内吞作用的重要性。MβCD 处理显著抑制了转铁蛋白和 EGF 的内吞作用，而对蓖麻毒素的内吞作用影响较小。转铁蛋白内吞作用的抑制是完全可逆的。去除 MβCD 后，即使在无血清培养基中继续培养细胞，转铁蛋白内吞作用也能恢复。在无血清培养基中，加入洛伐他汀（一种胆固醇合成抑制剂）可抑制细胞内吞作用的恢复，但当同时加入水溶性胆固醇和洛伐他汀时，内吞作用得以恢复。电镜观察显示，经MβCD处理的HEp-2细胞中典型的内陷小窝消失。此外，网格蛋白包被小窝的内陷也受到显著抑制，导致浅层网格蛋白包被小窝的积累。定量免疫金标记实验表明，经MβCD处理后，网格蛋白包被小窝中转铁蛋白受体的浓度与对照组细胞相同（约7倍）。因此，我们的结果表明，尽管去除胆固醇后，不依赖于网格蛋白（和不依赖于小窝）的内吞作用仍然存在，但胆固醇对于网格蛋白包被的内吞囊泡的形成至关重要。[2]甲基-β-环糊精 (MCD) 是一种常用的药理辅料，用于提高药物的溶解度、稳定性和生物利用度。它具有良好的生物相容性，一些衍生物已获得 FDA 批准。本研究表明，MCD 可使肌动蛋白细胞骨架解聚，从而增加质膜的通透性。这一特性使其能够增强与长春碱和紫杉醇等微管靶向药物 (MTA) 联合给药时的细胞内积累和疗效。该研究表明，将肌动蛋白细胞骨架扰动（通过MCD）与微管扰动（通过MTAs）相结合，是一种克服耐药性并改善癌症化疗的潜在策略[1]。本研究使用甲基-β-环糊精（MβCD）作为选择性去除质膜胆固醇的工具。结果表明，胆固醇对于网格蛋白依赖性内吞作用的内陷和囊泡形成阶段至关重要，但对于网格蛋白外壳的初始组装或特定受体（如转铁蛋白受体）在这些包被小窝内的浓度并非必需。该研究还表明，非网格蛋白依赖性（且非小窝依赖性）内吞途径对胆固醇去除的敏感性较低[2]。甲基-β-环糊精被用作胆固醇去除试剂，以研究胆固醇在迁移体形成中的作用。研究表明，胆固醇耗竭会损害迁移体的形成，这表明胆固醇是迁移体膜结构域的重要组成部分[3]

C54H94O35

1303.3032

1302.557

128446-36-6

51051622

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1206.9±65.0 °C at 760 mmHg

180-182ºC

683.7±34.3 °C

0.0±0.6 mmHg at 25°C

1.567

6.95

422.05

9

35

19

89

2050

35

CO[C@H]1[C@@H]([C@H]2[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]3[C@H](O[C@@H]([C@H]([C@@H]3OC)OC)O[C@@H]4[C@H](O[C@@H]([C@H]([C@@H]4OC)OC)O[C@@H]5[C@H](O[C@@H]([C@H]([C@@H]5OC)OC)O[C@@H]6[C@H](O[C@@H]([C@H]([C@@H]6OC)OC)O[C@@H]7[C@H](O[C@@H]([C@H]([C@@H]7OC)OC)O[C@@H]8[C@H](O[C@H](O2)[C@H]([C@@H]8O)OC)CO)CO)CO)CO)CO)CO)CO)O

YZOUYRAONFXZSI-SBHWVFSVSA-N

InChI=1S/C54H94O35/c1-64-36-28(63)30-21(14-56)76-48(36)83-29-20(13-55)77-49(37(65-2)27(29)62)85-31-22(15-57)79-51(44(72-9)38(31)66-3)87-33-24(17-59)81-53(46(74-11)40(33)68-5)89-35-26(19-61)82-54(47(75-12)42(35)70-7)88-34-25(18-60)80-52(45(73-10)41(34)69-6)86-32-23(16-58)78-50(84-30)43(71-8)39(32)67-4/h20-63H,13-19H2,1-12H3/t20-,21-,22-,23-,24-,25-,26-,27-,28-,29-,30-,31-,32-,33-,34-,35-,36+,37+,38-,39-,40-,41-,42-,43+,44+,45+,46+,47+,48-,49-,50-,51-,52-,53-,54-/m1/s1

(1S,3R,5R,6R,8R,10R,11R,13R,15R,16R,18R,20R,21R,23R,25R,26R,28R,30R,31S,33R,35R,36R,37S,38R,39S,40R,41S,42R,43S,44R,45S,46R,47S,48R,49S)-5,10,15,20,25,30,35-heptakis(hydroxymethyl)-37,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49-dodecamethoxy-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29,32,34-tetradecaoxaoctacyclo[31.2.2.23,6.28,11.213,16.218,21.223,26.228,31]nonatetracontane-36,38-diol

128446-36-6; Methyl-b-cyclodextrin; Methyl-; A-cyclodextrin; MFCD00074980;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 100 mg/mL
H2O : ≥ 50 mg/mL

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。