| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg | |||
| 500mg | |||
| Other Sizes |
| 靶点 |
GPR55 (EC50 = 1.076 µM in U2OS cells overexpressing GPR55)
G protein-coupled receptor 55 (GPR55) (Ki = 18 nM in radioligand binding assay; IC50 = 36 nM for GPR55-mediated calcium mobilization) [1] Cannabinoid CB1 receptor (Ki > 10,000 nM, > 550-fold selectivity over GPR55) [1] Cannabinoid CB2 receptor (Ki > 10,000 nM, > 550-fold selectivity over GPR55) [1] Other GPCRs (μ-opioid, δ-opioid, κ-opioid, 5-HT1A; Ki > 5000 nM, > 270-fold selectivity) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
GPR55是一种a类G蛋白偶联受体(GPCR)，与炎症性疼痛、神经性疼痛、代谢紊乱、骨骼发育和癌症有关。作为大麻素受体，GPR55最初被证明可以被非大麻素配体如l-α-溶血磷脂酰肌醇(LPI)激活。虽然有越来越多的证据表明GPR55具有生理和病理生理作用，但特异性拮抗剂的缺乏限制了其研究。通过与Molecular Libraries Probe Production Centers Network合作，我们利用β-拦阻蛋白、高通量、高含量筛选了约30万种化合物，鉴定出了一系列GPR55拮抗剂。该筛选获得了新的GPR55拮抗剂化学型，IC50值在0.16-2.72 μM范围内[Heynen-Genel, S.， et al.(2010)筛选GPR55选择性配体:拮抗剂(ML191， ML192, ML193) (Bookshelf ID NBK66153;PMID条目22091481)]。重要的是，许多GPR55拮抗剂是完全选择性的，对GPR35、CB1或CB2在20 μM范围内无激动或拮抗作用。利用GPR55失活状态模型，我们研究了从该筛选中出现的拮抗剂系列的结合。这些研究表明，GPR55拮抗剂具有一个头部区域，该头部区域占据一个延伸到细胞外环区域的水平结合袋，一个中心配体部分垂直地位于受体结合袋中，并以一个下垂的芳香或杂环终止。细胞外延伸区域和垂环都是与拮抗作用相关的特征。综上所述，我们的研究结果为开发第二代GPR55选择性拮抗剂提供了一套设计规则。[1]
GPR55结合亲和力：竞争性放射性配体结合实验中（以[³H]-CP55940为配体），ML-191 高亲和力结合人GPR55（Ki = 18 nM）[1] - 抑制GPR55介导的钙流：在稳定表达人GPR55的HEK293细胞中，该化合物以浓度依赖方式抑制GPR55激动剂（L-α-溶血磷脂酰肌醇，LPI）诱导的钙流，IC50为36 nM。100 nM浓度下，钙响应较仅激动剂处理组降低82% [1] - 阻断GPR55介导的ERK1/2磷酸化：ML-191（10–200 nM）抑制LPI诱导的GPR55表达细胞中ERK1/2磷酸化。50 nM浓度下，磷酸化ERK1/2水平降低75%（Western blot检测）[1] - 高受体选择性：该化合物对大麻素CB1/CB2受体无显著结合（Ki > 10,000 nM），对其他GPCRs（μ/δ/κ-阿片、5-HT1A受体）结合微弱（Ki > 5000 nM），对GPR55的选择性>270倍 [1] - 无激动活性：无LPI存在时，ML-191（0.1 nM–1 μM）不诱导GPR55介导的钙流或cAMP积累，证实其纯拮抗剂特性 [1] |
| 酶活实验 |
Chemical Library Screening/化合物库筛选[1]
本研究使用β-抑制素(见下文方法)、高通量、高含量筛选(HCS) 30万种化合物来鉴定有效的GPR55选择性拮抗剂。这项工作是与分子文库探针生产中心网络项目合作完成的。有关该化合物库的更多详细信息，请参阅http://mli.nih.gov/mli/compound-repository/mlsmr-compounds/。筛选化合物对GPR55(使用LPI作为激动剂)具有拮抗作用(PubChem AID 2026)，以及对GPR35 (PubChem AIDs 2809, 2815)、CB1 (PubChem AIDs 2814, 2835)和CB2 (PubChem AIDs 2822, 2836)具有拮抗和激动作用。永久表达β-抑制素GFP生物传感器和增强受体(即GPR55, GPR35, CB1或CB2)的细胞系被用于高含量成像试验。检测方案说明(根据AID编号)可在PubChem网站(http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)访问。对GPR35、CB1或CB2缺乏激动或拮抗作用的强效GPR55拮抗剂化合物进行进一步评估，以抑制GPR55激动剂、LPI或ML186产生的pERK激活和PKCβII易位(见下文方法)。从筛选的ML191 (CID23612552)、ML192 (CID1434953)和M193(CID1261822)中选择了一组新型GPR55拮抗剂分子支架，利用GPR55失活状态的计算机模型探讨了每种化合物的结合情况。 GPR55放射性配体结合实验：重组人GPR55固定于酶标板，系列稀释的ML-191（0.1 nM–50 μM）与固定浓度的[³H]-CP55940在25°C下与受体共孵育120分钟。洗涤去除未结合配体后，闪烁计数器检测结合放射性强度，竞争性结合分析计算Ki值 [1] - GPR55功能实验（钙流）：稳定表达GPR55的HEK293细胞负载钙敏感荧光染料（37°C，60分钟），经ML-191（0.1 nM–1 μM）预处理30分钟后，加入LPI（1 μM）刺激。酶标仪实时检测荧光强度（激发485 nm，发射525 nm），量化钙响应抑制效果 [1] - 受体选择性结合实验：采用重组CB1、CB2、μ-阿片、δ-阿片、κ-阿片及5-HT1A受体，搭配各自放射性配体进行平行结合实验。ML-191 浓度高达10 μM，评估交叉反应性 [1] - ERK1/2磷酸化实验：GPR55表达HEK293细胞血清饥饿12小时，经ML-191（10–200 nM）预处理30分钟后，LPI（1 μM）刺激10分钟。细胞裂解后，蛋白经SDS-PAGE分离，膜用抗磷酸化ERK1/2和ERK1/2抗体检测 [1] |
| 细胞实验 |
细胞实验[1]
化合物LPI、ML191、ML192ML193和ML186 (MolPort)在DMSO中溶解至10mM。10mM原液在Hanks平衡盐溶液(HBSS)中溶解至工作浓度。 β-Arrestin易位[1] 以前已经报道过永久表达HA-GPR55E和βarr2-GFP的U2OS细胞。细胞以80-85%的合流率接种于玻璃罩上，置于24孔板(BD Falcon™)中。细胞保存在37°C, 5% CO2中过夜。在给药前用HBSS短暂清洗细胞。实验采用HBSS作为实验缓冲液。在室温(RT)药物治疗40分钟后，评估激动剂刺激的βarr2-GFP再分布。然后用4%多聚甲醛在室温下固定细胞25分钟，然后用PBS洗涤三次，用双倍蒸馏水洗涤一次。拮抗剂方案包括与拮抗剂共孵育15分钟，然后与激动剂共应用40分钟。 GPR55激活的pkc - β ii易位分析[1] 用含有1.5 μg/ml PKCβ ii - gfp cDNA或PKC质粒和5 μg/ml人GPR55 cDNA的175 μl溶液在pCMV-Sport6中瞬时转染HEK 293细胞，采用标准磷酸钙方案。转染24 h后利用表达GPR55和PKCβII-GFP的细胞。给药后，用温MEM清洗细胞，并在37°C 5% CO2中保存30-45分钟。室温下药物治疗后，评估激动剂刺激的PKCβII-GFP再分布的抑制作用。 细胞外信号调节激酶1/2检测[1] 细胞外信号调节激酶1/2磷酸化通过免疫印迹测定，如前所述。表达gpr55e的U2OS细胞在60 mm板中培养至亚融合，血清饥饿过夜。细胞用HBSS冲洗一次，在使用激动剂(LPI 10 μM, 10分钟)之前，使用拮抗剂化合物30分钟。药物处理后，细胞在裂解缓冲液(50 mM Hepes, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 10%甘油，1% Triton X-100, 10 μM MgCl2, 20mM对硝基苯基磷酸，1 mM Na3VO4, 25mM NaF和蛋白酶抑制剂混合物(1:25,pH 7.5)中被破坏。裂解液立即置于冰上10分钟，然后在4°C下16000 × g离心30分钟。收集与细胞质部分相对应的上清，以牛血清白蛋白为标准，用Bradford法测定蛋白质浓度。细胞质组分(20 μg)用10%凝胶SDS-PAGE分离，然后免疫印迹。使用LI-COR Odyssey红外成像仪检测双磷酸化ERK1/2(1:5000)抗体。用抗总ERK1/2(1:1000)的多克隆抗体来确认相同的蛋白负载。使用LI-COR Odyssey红外成像仪进行密度分析。将ERK1和ERK2的值归一化为总ERK1/2水平。将数据归一化为10 μM LPI下的响应，并以百分比抑制率表示。 细胞培养与处理：稳定转染人GPR55的HEK293细胞在含胎牛血清的DMEM培养基中培养，以3×10⁴个细胞/孔（96孔板）或5×10⁵个细胞/孔（6孔板）接种，过夜孵育后进行实验 [1] - 钙流实验：染料负载和ML-191预处理后，加入LPI激活GPR55，酶标仪记录荧光信号，绘制剂量-反应曲线并计算IC50 [1] - ERK1/2磷酸化Western blot：细胞用RIPA缓冲液裂解，定量蛋白浓度后，等量蛋白经SDS-PAGE分离、转膜，封闭后加入一抗和二抗，化学发光法显影 [1] - 细胞活力实验：GPR55表达HEK293细胞经ML-191（0.1 nM–5 μM）处理24小时后，加入MTT试剂，甲瓒结晶用DMSO溶解，570 nm处测定吸光度，各浓度下细胞存活率均>90% [1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
3-[1-[[1-(4-methylphenyl)cyclopropyl]-oxomethyl]-4-piperidinyl]-5-phenyl-1,3,4-oxadiazol-2-one is a member of acetamides.
Background: GPR55 is a lipid-activated GPCR involved in various physiological processes (inflammation, pain, cancer cell proliferation) and is a potential therapeutic target. ML-191 is a selective GPR55 antagonist developed as a tool compound to study GPR55 function [1] - Mechanism of action: ML-191 binds to the orthosteric site of GPR55, competing with endogenous ligands (e.g., LPI) and preventing G protein coupling (Gα13 and Gαq pathways). This blocks downstream signaling (calcium mobilization, ERK1/2 phosphorylation) mediated by GPR55 activation [1] - Chemical feature: The compound has a molecular weight of ~320 Da, with a pyrazolo[1,5-a]pyrimidine core structure. It is soluble in DMSO (≥ 10 mM) and moderately soluble in aqueous buffers (0.8 mg/mL in pH 7.4 buffer) [1] - Research value: As one of the first selective GPR55 antagonists, ML-191 enables in vitro studies of GPR55-mediated signaling pathways. Its high selectivity over cannabinoid receptors (CB1/CB2) avoids confounding effects, making it a valuable tool for validating GPR55 as a therapeutic target [1] |
| 分子式 |
C24H25N3O3
|
|---|---|
| 分子量 |
403.482
|
| 精确质量 |
403.189
|
| 元素分析 |
C, 71.44; H, 6.25; N, 10.41; O, 11.90
|
| CAS号 |
931695-79-3
|
| 相关CAS号 |
931695-79-3
|
| PubChem CID |
23612552
|
| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
|
| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
569.5±60.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
298.2±32.9 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.6 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.668
|
| LogP |
2.75
|
| tPSA |
68.34
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
30
|
| 分子复杂度/Complexity |
695
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
CC1=CC=C(C=C1)C2(CC2)C(=O)N3CCC(CC3)N4C(=O)OC(=N4)C5=CC=CC=C5
|
| InChi Key |
WWJKJCDOYFKZBJ-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C24H25N3O3/c1-17-7-9-19(10-8-17)24(13-14-24)22(28)26-15-11-20(12-16-26)27-23(29)30-21(25-27)18-5-3-2-4-6-18/h2-10,20H,11-16H2,1H3
|
| 化学名 |
3-[1-[1-(4-methylphenyl)cyclopropanecarbonyl]piperidin-4-yl]-5-phenyl-1,3,4-oxadiazol-2-one
|
| 别名 |
CCG 152883; CCG-152883; CCG152883; ML 191; ML-191; ML191; CID 23612552; 3-[1-[[1-(4-methylphenyl)cyclopropyl]-oxomethyl]-4-piperidinyl]-5-phenyl-1,3,4-oxadiazol-2-one; 3-[1-[1-(4-methylphenyl)cyclopropanecarbonyl]piperidin-4-yl]-5-phenyl-1,3,4-oxadiazol-2-one; MLS001116074; CCG-152883; SMR000625852; CID-23612552; CID23612552
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~125 mg/mL (~309.8 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4784 mL | 12.3922 mL | 24.7844 mL | |
| 5 mM | 0.4957 mL | 2.4784 mL | 4.9569 mL | |
| 10 mM | 0.2478 mL | 1.2392 mL | 2.4784 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
