TRPC4/TRPC5
ML204 hydrochloride shows 19-fold selectivity against muscarinic receptor-coupled TRPC6 channel activation and inhibits TRPC4β-mediated intracellular Ca2+ increase with an IC50 value of 0.96 μM (HEK293 cells)[1]. ML204 hydrochloride inhibits TRPC4β activity that is triggered by endogenous M3-like muscarinic receptors stimulating Gq/11 or Gi/o activation by μ-opioid, 5HT1A serotonin, and M2 muscarinic receptors[1]. LPS-induced TRPC5 channel activity is inhibited by ML204 hydrochloride[3].

ML204 盐酸盐对毒蕈碱受体偶联的 TRPC6 通道激活具有 19 倍的选择性，并抑制 TRPC4β 介导的细胞内 Ca2+ 增加，IC50 值为 0.96 μM（HEK293 细胞）[1]。 ML204 盐酸盐抑制 TRPC4β 活性，该活性由内源性 M3 样毒蕈碱受体触发，通过 μ-阿片类药物、5HT1A 血清素和 M2 毒蕈碱受体刺激 Gq/11 或 Gi/o 激活[1]。 LPS 诱导的 TRPC5 通道活性被 ML204 盐酸盐抑制[3]。
ML204 与毒蕈碱受体偶联 TRPC6 通道激活有 19 倍耦合，并抑制 TRPC4β 介导的细胞内 Ca2+ 升高，IC50 值为 0.96 μM（HEK293 细胞）[1]。 M2 毒蕈碱受体或内源性 M3 样毒蕈碱受体、u-阿片类药物、5HT1A 血红素、Gi/o 和 TRPC4β 对 Gq/11 的激活被 ML204 阻断[1]。 ML204 抑制由 LPS 触发的 TRPC5 通道活动 [3]。

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在MLSMR文库的高通量荧光筛选和活性化合物的SAR分析后，ML204被鉴定为一种新型TRPC4通道抑制剂。ML204抑制了μ阿片受体刺激激活的TRPC4通道的钙内流，IC50值为0.96μM，在类似的荧光检测中对TRPC6通道表现出19倍的选择性。ML204在电生理学检测中阻断了TRPC4通道，IC值为2.6μM，在荧光和电生理检测中也表现活跃，其中TRPC4信道由不同机制激活，表明直接阻断了TRPCV4信道。在荧光和电生理实验中，针对密切相关的TRPC通道和较远相关的TRPV、TRPA和TRPM通道，以及非TRP离子通道，检查了TRPC4通道阻断的选择性。ML204对TRPC6通道具有良好的选择性（19倍），对TRPC3和TRPC5通道具有更温和的选择性（9倍）。很少或没有观察到TRPV、TRPA、TRPM或电压门控离子通道的阻断。ML204表现出可用于各种体外研究的特性[2]。

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在使用共表达小鼠 TRPC4β 和 μ-阿片受体的 HEK293 细胞进行的荧光钙检测中，ML204 抑制 DAMGO 诱导的细胞内钙升高，IC₅₀ 为 0.96 ± 0.26 µM。20 µM 时可完全抑制。[1]
在自动化全细胞膜片钳（QPatch16）记录中，ML204 阻断由 50 nM DAMGO 激活的 TRPC4β 电流，IC₅₀ 约为 2.9–3.55 µM。[1]
ML204 (3.33 µM) 也能阻断由细胞内透析 GTPγS 激活的 TRPC4β 电流（IC₅₀ ≈ 2.85 µM），表明其对通道有直接作用，不依赖于 GPCR 信号传导。[1]
在手动膜片钳记录中，10 µM ML204 几乎完全阻断了由 10 µM 卡巴胆碱激活的豚鼠 TRPC4β 通道电流。[1]
ML204 (10 µM) 对通过 M₅ 毒蕈碱受体激活的 TRPC6 电流有中等程度的抑制（≈38%），但对直接由 10 µM OAG 激活的 TRPC6 电流无明显阻断作用。[1]
在膜电位检测中，ML204 阻断乙酰胆碱诱导的 TRPC6 介导的去极化，IC₅₀ 为 18.4 µM。[1]
ML204 (10 µM) 显著阻断了新分离的豚鼠回肠平滑肌细胞中的天然毒蕈碱受体激活的阳离子电流（mIₐₐₜ），抑制卡巴胆碱（100 µM）诱发的电流达 86 ± 2%，抑制 GTPγS（200 µM）诱导的电流达 65 ± 4%。[1]
在广泛的谱学分析研究中（Ricerca 先导化合物谱学分析，在 10 µM 下测试 68 个靶点），ML204 仅在 68 个结合试验中的 7 个显示出 >50% 的抑制。[1]

在注射 LPS 的小鼠中，ML204 盐酸盐（1 mg/kg；皮下注射；每天两次；持续 5 天）会减少腹膜白细胞计数和细胞因子，并导致与体温过低恶化相关的死亡[4]。 ML204对TRPC4/TRPC5的双重阻断增加了硫氧还蛋白处理的LPS小鼠的死亡率和低温，但保留了巨噬细胞的吞噬能力。TRPC5缺失不会改变体温，但会促进硫氧还蛋白给药LPS小鼠腹膜白细胞的额外积聚和炎症介质的释放。硫氧还蛋白减少了野生型巨噬细胞介导的吞噬作用，但没有减少TRPC5敲除动物的吞噬作用。TRPC5消融不影响LPS诱导的反应。然而，在注射LPS的小鼠中，ML204导致了与低温加剧和腹膜白细胞数量和细胞因子减少相关的死亡率。这些结果表明，LPS刺激下的细菌硫氧还蛋白效应是由TRPC4和TRPC5介导的，从而揭示了细菌毒力的其他机制以及这些受体的病理生理作用。 [4]

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值得注意的是，ML204灌注的小鼠免受PS诱导的FPE的影响（图7A）。通过计算TEM图像中GBM测量长度上的FP数量（每组n=90-105张图像），以盲法量化这些结果。通过这一分析，ML204灌注小鼠对PS的影响显示出显著的保护作用（图7B）。这些结果与我们在Trpc5 KO小鼠中的观察结果一致。[3]
接下来，我们测试了ML204在LPS模型中的作用。在注射LPS后，每隔12小时注射两次ML204（20mg/kg/d i.p.）。对照组注射PBS的小鼠没有可观察到的结构变化，也没有蛋白尿（图7，C-E）。LPS注射导致FPE（图7D），尽管这比PS诱导的FPE更温和。重要的是，经ML204处理的小鼠免受LPS诱导的FPE和蛋白尿的影响[3]。

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在血管灌注模型中，将 ML204 (10 µM) 与硫酸鱼精蛋白（PS）共同灌注到野生型小鼠体内，保留了足突（FPs），并防止了PS诱导的足突融合（FPE），效果与HBSS对照组相似。[3]
在LPS诱导的白蛋白尿模型中，用 ML204 (20 mg/kg/天，腹腔注射) 治疗野生型小鼠，减轻了LPS诱导的足突融合（FPE）。[3]
用 ML204 (20 mg/kg/天，腹腔注射) 治疗显著降低了野生型小鼠中LPS诱导的白蛋白尿。[3]

Rac1激活试验。[3]
Rac1活化试验如前所述进行，但有一些修改。足细胞用300μg/ml PS处理1小时，然后进行收获和Rac1下拉实验。在ML204实验中，在施加PS之前，用30μMML204预处理细胞20分钟。根据制造商的说明，使用与人PAK-1的p21结合结构域（PBD；残基67-150）相对应的GST标记的融合蛋白，用商业Rac1活化测定试剂盒 分析活化的Rac1。下拉后，使用小鼠单克隆Rac1抗体通过免疫印迹检测洗脱的活性Rac1。在用于下拉研究的细胞裂解物中测量总Rac1和GADPH，并作为负载对照。

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电生理学。[3]
膜片钳电生理学是在全细胞结构或外向贴片上进行的。用P-97拉拔器从硼硅酸盐玻璃中拉出电阻为3-4MΩ的贴片移液管，并填充含有135 mM CH3SO3Cs、10 mM CsCl、3 mM MgATP、0.2 mM NaGTP、0.2 mM EGTA、0.13 mM CaCl2和10 mM HEPES（pH 7.3）的CsOH溶液。浴液含有135 mM CH3SO3Na、5 mM CsCl、2 mM CaCl2、1 mM MgCl2、10 mM HEPES和10 mM葡萄糖（pH 7.4）以及NaOH。将血管紧张素II（500 nM）、LPS（100μg/ml）和ML204（10μM）应用于浴液。在400毫秒内记录了从-100 mV到+100 mV的全细胞电流，电压斜坡为-60 mV。对于外向配置的单通道记录，我们使用了以20 mV的间隔和0 mV的保持电位进行的-100 mV到+100 mV的电压阶跃协议。填充有移液管溶液的平均移液管电阻为3-5 MΩ。数据以10kHz采样，以5kHz滤波。在分析之前，单通道数据在500Hz下进一步离线滤波。在单通道迹线中，使用手动定义的振幅标准对电流进行理想化，以分配离子通道的打开和关闭过渡。集合平均值表示为Po（平均电流除以单位电流振幅和每个斑块的通道数），并绘制为直方图。所有数据均在室温下采集，并使用pClamp 10进行分析。

PS、LPS和Cch处理培养的足细胞。[3] 以>90%融合生长的分化培养足细胞与1-30μM ML204一起孵育20分钟，然后根据需要暴露于300μg/ml PS、100μg/ml LPS或100μM Cch。对于PS实验，一旦通过光学显微镜观察到细胞形态的变化（70-90分钟），就用PBS中的4%多聚甲醛固定细胞15分钟，然后用0.1%Triton X-100透化10分钟。对于LPS和Cch实验，在处理后24小时如上所述固定细胞。为了进行免疫染色，足细胞与突触蛋白“NT”抗体一起孵育，并用Alexa Fluor 488偶联的二抗进行检测。如前所述，肌动蛋白结构用Alexa Fluor 594偶联的鬼笔环肽标记。分析了3项独立试验，每项试验中每种条件3个培养皿，每皿10张图像，细胞密度相当。PS/ML204实验共分析1600-2000个细胞，PS/KD实验共分析1400-1600个细胞。共分析了1000个细胞用于LPS实验，1400个细胞用于Cch实验。通过DAPI染色和ImageJ中的自动脚本分析细胞数量，随后手动校正。如前所述，受影响的细胞被定义为具有非常明亮、凝聚的肌动蛋白染色的塌陷细胞（用于PS实验），或没有明显可见应力纤维的细胞（用于LPS和Cch实验）。图像是用蔡司LSM510立式共聚焦显微镜采集的。使用蔡司Pascal软件采集3-4μm光学切片的图像。通过方差分析和Dunnett多重比较检验评估统计显著性。

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初级高通量荧光钙检测筛选： 使用共表达小鼠 TRPC4β 和 μ-阿片受体的稳定 HEK293 细胞系。将细胞接种于 384 孔板，用 Fluo4-AM 负载，并用 DAMGO 刺激。在加入激动剂前添加测试化合物。使用荧光酶标仪监测细胞内钙离子变化。[1]
通过荧光钙检测进行选择性筛选： 将稳定表达各种 TRP 通道（TRPV1、TRPV3、TRPM8、TRPA1）的 HEK293 细胞接种于 96 孔板，用 Fluo4-AM 负载，并暴露于相应的通道激动剂。测量钙内流以评估化合物效应。[1]
TRPC6 膜电位检测： 用膜电位敏感染料负载稳定表达 TRPC6（具有内源性毒蕈碱受体）的 HEK293 细胞。用乙酰胆碱刺激细胞，并在存在或不存在测试化合物的情况下测量膜去极化。[1]
自动化膜片钳（QPatch16）： 将稳定表达 TRPC4β 和 μ-OR 的 HEK293 细胞制备成单细胞悬液。使用电压斜坡协议记录全细胞电流。通过灌注系统施加激动剂（DAMGO）和化合物。[1]
TRPC 通道的手动全细胞膜片钳： 对异源表达特定 TRPC 通道（含或不含共表达的 GPCR）的 HEK293 细胞进行电压钳制。通过电压斜坡引发电流。通过重力驱动灌注系统施加药物。[1]
天然神经元电生理学： 培养小鼠背根神经节神经元。在存在或不存在 ML204 的情况下，使用特定的电压阶跃协议记录电压门控 Na⁺、K⁺ 和 Ca²⁺ 通道电流。[1]
天然平滑肌细胞电生理学： 从豚鼠新鲜分离回肠平滑肌肌细胞。进行全细胞记录以测量由浴液施加卡巴胆碱或细胞内灌注 GTPγS 诱导的 mIₐₐₜ。通过灌注系统施加 ML204。[1]

动物/疾病模型： 非禁食雄性 C57BL/6 小鼠（2-3 个月龄）[4]
剂量： 1 mg/kg
给药途径： 皮下注射，每日两次，连续 5 天（LPS 注射前）
实验结果： 可导致 LPS 诱导的全身炎症反应小鼠出现与体温过低相关的死亡。

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LPS 诱导的蛋白尿。[3]
按照先前描述的方法，并进行了一些修改，通过注射 LPS 诱导雄性 WT 和 Trpc5-KO 小鼠（体重 20-25 g）出现蛋白尿。在注射前 48 小时，在代谢笼中收集 24 小时的基础尿液。 LPS（15 μg/g，腹腔注射，1 mg/ml）分别在0小时和24小时时间点腹腔注射两次。PBS（磷酸盐缓冲液）分别在12小时和36小时腹腔注射两次，以防止脱水。ML204（20 mg/kg/d，腹腔注射）分别在12小时和24小时时间点腹腔注射。使用代谢笼收集LPS注射后24小时开始的24小时尿液。为了定量尿白蛋白水平，取10 μl尿液进行SDS-PAGE分析。牛血清白蛋白标准品（0.25、0.5、1.0、2.5和5.0 μg）在同一凝胶上进行电泳，用于鉴定和定量尿白蛋白条带。考马斯亮蓝染色信号使用ImageJ软件进行定量。所得数值（各白蛋白标准条带的面积大小与其平均灰度值的乘积）用于构建标准曲线及其相关的数学函数。随后，将样本条带的数值转换为白蛋白浓度，并外推至24小时总尿量。结果采用方差分析（ANOVA）和Bonferroni多重比较检验进行评估。
为制备用于Western blotting的肾小球裂解液，小鼠按上述方法处理，并在首次注射LPS后36小时处死。通过肾动脉灌注Dynabeads磁珠，以磁性分离高纯度肾小球。从分离的肾小球中提取蛋白质，进行SDS-PAGE和Western blotting分析，方法如前所述，并使用适当的一抗和二抗检测蛋白质。

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PS模型。[3]
成年野生型（WT，n = 15）和Trpc5-KO（n = 7）同窝小鼠用戊巴比妥麻醉，置于37°C的加热垫上，并通过肾动脉以约240 mmHg的压力和9 ml/min的灌注速率对肾脏进行原位灌注，方法如前所述(58)，并进行了一些修改。首先，用HBSS或HBSS加10 μM ML204在37°C下冲洗肾脏2分钟，然后用2 mg/ml PS的HBSS溶液或PS加ML204在37°C下灌注15分钟。在整个实验过程中，所有血管灌注液均保持在 37°C。

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药物治疗[4]
在诱导 SIRS 前 3 天，C57BL/6、TRPC5+/+ 和 TRPC5−/− 小鼠接受皮下注射含有细菌 Trx（20 μg/150 μl/只，每日两次；来自大肠杆菌）的磷酸盐缓冲液 (PBS)。为了评估 TRPC4 和 TRPC5 复合物在 LPS 诱导反应中的作用，C57BL/6 小鼠接受 ML204 [16, 21]（1 mg/kg，150 μl/只，每日两次）治疗 5 天，然后注射 LPS。在另一组实验中，C57BL/6小鼠单独接受ML204（1 mg/kg，每日两次；溶于6%二甲基亚砜（DMSO）的PBS溶液中）治疗2天，然后在LPS攻击前3天，将该药物与细菌Trx（20 μg/只，每日两次）共同注射。载体处理的小鼠作为对照。在硫酸鱼精蛋白（PS）灌注模型中，成年野生型小鼠被麻醉，并通过肾动脉进行原位肾脏灌注。首先用HBSS或含10 µM ML204的HBSS溶液冲洗肾脏2分钟，然后用2 mg/ml PS的HBSS溶液或PS加ML204的溶液灌注15分钟。所有溶液均保持在37°C。随后将肾脏固定用于透射电镜（TEM）分析。[3]
在LPS诱导的蛋白尿模型中，雄性野生型小鼠腹腔注射LPS（15 µg/g），分别于0小时和24小时注射两次。在首次LPS注射后12小时和24小时，腹腔注射ML204（20 mg/kg/天）。对照组注射PBS。从LPS注射后24小时开始，在代谢笼中收集尿液进行白蛋白定量。在LPS注射后36小时取出肾脏，进行肾小球分离和分析。[3]

[1]. Identification of ML204, a novel potent antagonist that selectively modulates native TRPC4/C5 ion channels. J Biol Chem. 2011 Sep 23;286(38):33436-46.

[2]. Novel Chemical Inhibitor of TRPC4 Channels. Probe Reports from the NIH Molecular Libraries Program.

[3]. Inhibition of the TRPC5 ion channel protects the kidney filter. J Clin Invest. 2013 Dec 2; 123(12): 5298–5309.

[4]. Transient Receptor Potential Canonical Channels 4 and 5 Mediate Escherichia coli-Derived Thioredoxin Effects in Lipopolysaccharide-Injected Mice. Oxid Med Cell Longev. 2018 Jun 10;2018:4904696.

瞬时受体电位经典（TRPC）通道是钙离子（Ca²⁺）通透性非选择性阳离子通道，参与多种生理功能，包括平滑肌收缩和突触传递。然而，由于缺乏高效的选择性TRPC通道药理抑制剂，限制了对这些通道在生理系统中作用的深入研究。本文报道了一种新型高效选择性TRPC4通道抑制剂ML204的鉴定和表征。我们对分子库小分子库（Molecular Libraries Small Molecule Repository）中的305,000个化合物进行了高通量荧光筛选，以寻找能够阻断小鼠TRPC4β通道被μ-阿片受体刺激后细胞内Ca²⁺升高的抑制剂。ML204以0.96 μM的IC₅₀值抑制TRPC4β介导的细胞内Ca²⁺升高，并且对毒蕈碱受体偶联的TRPC6通道激活具有19倍的选择性。在全细胞膜片钳记录中，ML204阻断了由μ-阿片受体刺激或胞内透析鸟苷5'-3-O-(硫代)三磷酸(GTPγS)激活的TRPC4β电流，表明ML204与TRPC4通道直接相互作用，而非干扰信号转导通路。选择性研究表明，10-20 μM ML204对小鼠背根神经节神经元中的TRPV1、TRPV3、TRPA1和TRPM8，以及KCNQ2和天然电压门控钠、钾、钙通道均无明显阻断作用。在分离的豚鼠回肠肌细胞中，ML204阻断了由灌注卡巴胆碱或胞内灌注GTPγS激活的毒蕈碱阳离子电流，证明其对天然TRPC4电流有效。因此，ML204 是一种研究 TRPC4 通道功能的优秀新型工具，并可能促进靶向 TRPC4 的治疗药物的开发。[1]

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ML204 是通过对 MLSMR 化合物库进行高通量荧光筛选和活性化合物的构效关系分析而鉴定出的新型 TRPC4 通道抑制剂。ML204 能抑制 μ-阿片受体激活的 TRPC4 通道的钙离子内流，IC50 值为 0.96 μM，并且在类似的荧光检测中对 TRPC6 通道表现出 19 倍的选择性。ML204 在电生理检测中能阻断 TRPC4 通道，IC50 值为 2.6 μM，并且在 TRPC4 通道被不同机制激活的荧光和电生理检测中也具有活性，表明其能直接阻断 TRPC4 通道。通过荧光和电生理实验，我们检测了 ML204 对 TRPC4 通道阻断的选择性，并将其与密切相关的 TRPC 通道、亲缘关系较远的 TRPV、TRPA 和 TRPM 通道以及非 TRP 离子通道进行了比较。 ML204 对 TRPC6 通道具有良好的选择性（19 倍），对 TRPC3 和 TRPC5 通道的选择性稍低（9 倍）。未观察到对 TRPV、TRPA、TRPM 或电压门控离子通道的阻断作用。ML204 具有适用于多种体外研究的特性。[2]

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完整的肾脏滤过功能对于血液中必需蛋白质的保留和体内废物的清除至关重要。滤过屏障的损伤会导致尿液中白蛋白的丢失，这是心血管疾病和肾衰竭的标志。我们发现离子通道 TRPC5 介导了滤过屏障的损伤。利用 Trpc5 敲除小鼠、TRPC5 小分子抑制剂、分离肾小球中的 Ca2+ 成像以及足细胞肌动蛋白动态的活体成像，我们确定 TRPC5 的缺失或其抑制会阻断足细胞骨架的重塑。抑制或缺失TRPC5可阻止小GTP结合蛋白Rac1的激活并稳定突触蛋白。重要的是，TRPC5的基因缺失或药理学抑制可保护小鼠免受蛋白尿的侵害。这些数据表明，钙离子通透性通道TRPC5是蛋白尿的重要决定因素，并确定TRPC5抑制可作为预防或治疗蛋白尿性肾病的一种治疗策略。[3]硫氧还蛋白在细菌抗氧化机制和毒力中发挥着至关重要的作用；然而，其在宿主中的调节作用尚不完全清楚。人硫氧还蛋白（Trx）的减少可激活炎症中的瞬时受体电位经典5（TRPC5），但尚无证据表明这些受体是否介导细菌硫氧还蛋白在宿主中的作用。重要的是，TRPC5可以与其他亚基（例如TRPC4）形成功能性复合物。本文中，大肠杆菌来源的硫氧还蛋白可诱导脂多糖（LPS）注射小鼠死亡，并伴有白细胞聚集减少、细胞因子释放入腹膜的调节以及腹膜巨噬细胞介导的吞噬作用受损。[4]

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ML204是从分子库小分子库（MLSMR）中305,000种化合物的高通量筛选中发现的。[1]
据报道，它是首个高效且选择性的TRPC4通道小分子阻滞剂。[1]
该化合物作为直接通道阻滞剂发挥作用，而非干扰上游GPCR信号通路。 [1] 结构-活性关系 (SAR) 研究表明，左侧的小环烷基胺取代基（例如哌啶、吡咯烷）以及右侧喹啉环上的有限修饰对活性至关重要。[1] ML204 被认为是一种优秀的药理学工具，可用于研究天然组织中 TRPC4/C5 通道的功能，并可能促进针对这些通道的治疗药物的开发。[1]

C15H19CLN2

262.777762651443

262.123

2070015-10-8

5465-86-1;2070015-10-8 (HCl);

49786978

White to off-white solid powder

16.1

1

2

1

18

247

0

Cl.N1(C2C=C(C)C3C=CC=CC=3N=2)CCCCC1

QCABWRXQHZUBPW-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C15H18N2.ClH/c1-12-11-15(17-9-5-2-6-10-17)16-14-8-4-3-7-13(12)14;/h3-4,7-8,11H,2,5-6,9-10H2,1H3;1H

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。