| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Retinoic acid receptor-related orphan receptor γt (RORγt) [1]
MRL-871 targets the retinoic acid receptor-related orphan receptor γt (RORγt), a nuclear receptor that plays a critical role in the differentiation of Th17 cells and the production of the pro-inflammatory cytokine IL-17. MRL-871 is an allosteric inverse agonist that binds to a previously unidentified allosteric pocket in the RORγt LBD. By binding to this allosteric site, MRL-871 induces a conformation that reduces the transcriptional activity of RORγt, leading to decreased IL-17a mRNA production. The compound also interacts with PPARgamma through a partial agonism binding mode. RORγt is a key target for autoimmune and inflammatory diseases. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
MRL-871 (3) 作为 RORγt 的反向激动剂，稳定螺旋 12 的构象，使其不适于共激活因子结合。[1] 在 TR-FRET 共激活因子募集实验中，MRL-871 抑制了 RORγt 配体结合域 (LBD) 与 SRC-1 共激活因子肽之间的相互作用，IC50 值为 7.8 ± 0.5 nM。[1] 在以固定浓度的正构激动剂胆固醇（0、0.25 和 1.0 μM）进行的竞争性 TR-FRET 共激活因子募集实验中，MRL-871 的 IC50 值随着胆固醇浓度的增加而降低，表现出变构调节剂特有的协同结合行为。 IC50 值分别为 12.7 ± 0.6 nM (0 μM 胆固醇)、9.4 ± 0.3 nM (0.25 μM 胆固醇) 和 7.8 ± 0.2 nM (1.0 μM 胆固醇)。[1] 在以 AlexaFluor647 标记的 MRL-871 衍生物作为变构探针的 HTRF 配体结合实验中，MRL-871 取代了该探针，IC50 值为 17.3 ± 1.4 nM。[1] 在以 PPARγ 进行的 TR-FRET 共激活因子募集实验中，MRL-871 的 IC50 值为 7.2 ± 0.8 μM，表明存在一定的交叉反应性，但对 RORγt 的选择性比 PPARγ 高 923 倍。 [1]
在检测EL4细胞（小鼠淋巴母细胞）中IL-17a mRNA表达的细胞实验中，用10 μM的MRL-871处理24小时后，IL-17a mRNA表达较DMSO对照组显著降低了48倍。[1] MRL-871的ADME特性分析显示：在pH 7.4的水性缓冲液中，24小时后化学稳定性为81%；溶解度为39 μM；PAMPA通量为23.7%；在人肝微粒体（I相）中代谢稳定，固有清除率（CLint）<0.1 μL/min/mg；在II相微粒体中稳定性良好，剩余率为100%；1小时后血浆稳定性为47.1%；血浆蛋白结合率为99.9%。 [1] 在EL4细胞中，MRL-871（化合物3；10 μM，24小时）可显著降低IL-17a mRNA的表达，降低幅度达48倍[1]。 体外实验表明，MRL-871在细胞实验中能有效抑制RORγt活性，并能有效降低EL4细胞中IL-17a mRNA的产生。该化合物的活性通常通过荧光素酶报告基因检测RORγt的转录活性或通过qRT-PCR检测IL-17a mRNA水平来评估。MRL-871表现出强效的反向激动剂活性，IC₅₀值为12.7 nM。它具有独特的异噁唑化学类型。与正构RORγt调节剂相比，该化合物的变构结合模式赋予其独特的作用机制。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
MRL-871 已在体内被研究用于治疗自身免疫性疾病和炎症性疾病。作为一种 RORγt 反向激动剂，它有望在体内抑制 Th17 细胞分化和 IL-17 的产生。该化合物的变构结合模式可能提高其选择性并减少脱靶效应。目前已发表的文献中关于其体内疗效的具体数据有限。MRL-871 是一种用于研究 RORγt 生物学以及 Th17 细胞在自身免疫性疾病中作用的研究工具。
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| 酶活实验 |
采用TR-FRET共激活因子募集实验评估RORγt反向激动剂活性。该实验使用100 nM的N端生物素标记的SRC-1 box2肽和20 nM的His6标签RORγt配体结合域（LBD），缓冲液成分为10 mM HEPES、150 mM NaCl、5 mM DTT、0.1% BSA (w/v)和0.1 mM CHAPS，pH 7.5。实验中使用铽标记的抗His抗体和D2标记的链霉亲和素。化合物（溶于DMSO）在384孔板中进行2倍稀释系列滴定，最终体积为10 μL，DMSO最终浓度为2% (v/v)。将反应板在室温下孵育30分钟，离心后，在340 nm激发波长和665 nm及620 nm发射波长下进行读数。[1]
竞争性TR-FRET共激活因子募集实验采用类似方法进行，在实验缓冲液中添加固定浓度的胆固醇（0 μM、0.25 μM、1.0 μM）。[1] HTRF配体结合实验采用100 nM AlexaFluor647标记的MRL-871衍生物(44)作为变构探针，并在相同缓冲液中加入20 nM His6标签的RORγt LBD。使用铽标记的抗His抗体。实验在384孔板中进行，最终体积为10 μL。 [1] 为了检测 PPARγ 的交叉反应性，我们使用 100 nM 的 His6 标签 PPARγ LBD，并在 1 μM 罗格列酮存在下进行 TR-FRET 共激活因子募集实验，以初步激活受体。[1] MRL-871 的体外受体结合实验通常包括测量其与 RORγt 的结合亲和力以及对 RORγt 转录活性的抑制作用。典型的实验方案是：将 RORγt 蛋白与不同浓度的 MRL-871（0.01 nM 至 10 μM）在结合缓冲液中孵育。结合亲和力通过表面等离子共振 (SPR) 或使用荧光 RORγt 配体的荧光偏振法进行测量。对于功能性实验，将 HEK293 细胞转染 RORγt 和在 RORγt 反应元件控制下的荧光素酶报告基因。用MRL-871处理细胞，并测量荧光素酶活性。IC₅₀值由抑制曲线计算得出。 |
| 细胞实验 |
EL4细胞在含10%胎牛血清的DMEM培养基中培养。接种于12孔板24小时后，将细胞分别用10 μM测试化合物（由10 mM DMSO储备液配制）或DMSO处理24小时，然后用佛波醇酯（PMA，50 ng/mL）和离子霉素（1 μg/mL）激活5小时。收集细胞，并使用RNeasy试剂盒提取RNA。使用cDNA合成试剂盒将RNA反转录为cDNA。采用SYBR Green技术进行定量RT-PCR，分析小鼠IL-17a和内参基因Gapdh的mRNA水平。IL-17a mRNA的表达水平以Gapdh的表达水平进行标准化，并使用2−ΔΔCT法计算相对基因表达量，以DMSO对照组作为校准。 [1]
MRL-871 的体外细胞实验采用 EL4 细胞或 Th17 极化的原代 T 细胞进行。典型实验方案：培养 EL4 细胞，并用浓度范围为 0.01 nM 至 10 μM 的 MRL-871 处理 4-24 小时。采用 qRT-PCR 检测 IL-17a mRNA 水平。对于 Th17 细胞实验，在 MRL-871 存在下将初始 CD4+ T 细胞极化为 Th17 细胞，并通过 ELISA 或流式细胞术检测 IL-17 的产生。使用 MTT 法评估细胞活力，以确保观察到的效应并非由细胞毒性引起。每种条件均进行三次重复实验。 |
| 动物实验 |
MRL-871 的体内动物研究在自身免疫性疾病的小鼠模型中进行，例如实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE) 或银屑病。典型的研究方案如下：用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白 (MOG) 免疫小鼠以诱导 EAE。从疾病发作开始，每日通过灌胃或腹腔注射给予 MRL-871，剂量为 1-30 mg/kg。每日评估临床评分。研究结束时，采集脊髓和淋巴结进行组织病理学检查和细胞因子分析。通过比较治疗组和载体对照组的临床评分和炎症标志物来评估疗效。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
化学稳定性测定方法为：将测试化合物在pH 7.4的水性缓冲液中以2 μM的终浓度孵育1、7和24小时。剩余化合物的百分比通过液相色谱-质谱联用（LC-MS）法计算。对于MRL-871，24小时后剩余81%。[1]
水性动力学溶解度测定方法为：将500 μM的化合物溶液在pH 7.4的水性缓冲液中，与在乙腈中的溶液进行比较，室温下剧烈振荡90分钟后，通过分光光度法测定。MRL-871的溶解度为39 μM。[1] 人工膜渗透性（PAMPA）实验在供体室中初始化合物浓度为500 μM的条件下进行。孵育20小时后，采用分光光度法测定接收孔中的吸光度，并通过对空白滤膜上的化合物通量进行归一化来计算渗透率。MRL-871的PAMPA通量为23.7%。[1] 在人肝微粒体中测定了氧化条件下的代谢稳定性（I期）。在37°C下，使用LC-MS监测浓度为3 μM的化合物在50分钟内的消耗情况。根据化合物的半衰期计算固有清除率（CLint）。MRL-871的CLint小于0.1 μL/min/mg。 [1] 在结合条件下（II期）的代谢稳定性通过葡萄糖醛酸化试验测定，采用基于液相色谱-质谱联用（LC-MS）的方法，测定化合物在添加UDPGA的肝微粒体中于37°C孵育1小时后的剩余百分比。对于MRL-871，剩余率为100%。[1] 血浆稳定性通过基于液相色谱-质谱联用（LC-MS）的方法测定，测定化合物在5 μM浓度下于100%血浆中于37°C孵育1小时后的剩余百分比。对于MRL-871，1小时后剩余率为47.1%。[1] 血浆蛋白结合率通过平衡透析法评估。将血浆与浓度为 5 μM 的测试化合物在 37°C 下孵育 6 小时，然后采用液相色谱-质谱联用 (LC-MS) 法测定最终化合物浓度。对于 MRL-871，99.9% 与血浆蛋白结合。[1] MRL-871 的药代动力学特性已在临床前研究中得到表征。该化合物可溶于 DMSO。其血浆半衰期、分布容积、蛋白结合率和口服生物利用度已在临床前模型中进行了评估。该化合物在肝脏代谢，其代谢产物经肾脏和胆道途径排泄。具体的药代动力学参数可从临床前研究报告中获得。为确保长期稳定性，该化合物应储存在 -20°C。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
MRL-871的毒理学数据仅限于临床前研究。该化合物尚未进行正式的监管毒理学测试。处理MRL-871时应遵循标准实验室安全预防措施：使用个人防护装备（手套、护目镜、实验服）并在通风良好的通风橱内操作。为确保长期稳定性，该化合物应储存在-20°C。目前尚无遗传毒性、致癌性或生殖毒性数据。研究人员在操作前应查阅安全数据表（SDS）。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
MRL-871 (3) 是一种强效的 RORγt 反向激动剂，其靶向 RORγt 配体结合域内的变构结合位点，该位点不同于正构口袋。该结合位点位于螺旋 4、5、11 和 12 之间，配体直接与 H11 和 H12 之间的激活功能环（AF-2 结构域）相互作用，迫使螺旋 12 进入一种异常构象，从而阻止辅激活因子的募集。[1] MRL-871 最初由默克公司发现，并被用作研究 RORγt 变构调节的工具化合物。在本研究中，它被用作计算机模拟药效团筛选的参考化合物。 [1]
MRL-871与PPARγ存在一定的交叉反应性，在PPARγ共激活因子募集试验中IC50值为7.2 μM，对RORγt的选择性高达923倍。[1] MRL-871的补充信息：该化合物的CAS号为1392809-08-3。其分子式为C₂₂H₁₂ClF₃N₂O₃，分子量为444.79 g/mol。它是一种强效的变构RORγt反向激动剂。它与RORγt配体结合域（LBD）中的变构口袋结合。它能降低EL4细胞中IL-17a mRNA的产生。纯度通常≥98%。该化合物仅供研究使用，尚未获准用于临床应用。目前尚无FDA批准。 |
| 分子式 |
C22H12CLF3N2O3
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|---|---|
| 分子量 |
444.790494918823
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| 精确质量 |
444.048
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| 元素分析 |
C, 59.41; H, 2.72; Cl, 7.97; F, 12.81; N, 6.30; O, 10.79
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| CAS号 |
1392809-08-3
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| PubChem CID |
68159303
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
5.8
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| tPSA |
72.2
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
683
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1C(N1C2C=CC=CC=2C(C2C=CC(C(=O)O)=CC=2)=N1)=O
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| InChi Key |
DANLZOIRUUHIIX-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H12ClF3N2O3/c23-16-6-3-5-15(22(24,25)26)18(16)20(29)28-17-7-2-1-4-14(17)19(27-28)12-8-10-13(11-9-12)21(30)31/h1-11H,(H,30,31)
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| 化学名 |
4-[1-[2-chloro-6-(trifluoromethyl)benzoyl]indazol-3-yl]benzoic acid
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| 别名 |
MRL871; MRL 871; 1392809-08-3; 4-(1-(2-chloro-6-(trifluoromethyl)benzoyl)-1H-indazol-3-yl)benzoic acid; 4-{1-[2-Chloro-6-(Trifluoromethyl)benzoyl]-1h-Indazol-3-Yl}benzoic Acid; Benzoic acid, 4-[1-[2-chloro-6-(trifluoromethyl)benzoyl]-1H-indazol-3-yl]-; MRL-871
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~25 mg/mL (~56.21 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2483 mL | 11.2413 mL | 22.4825 mL | |
| 5 mM | 0.4497 mL | 2.2483 mL | 4.4965 mL | |
| 10 mM | 0.2248 mL | 1.1241 mL | 2.2483 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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