| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
P2Y6 (EC50 = 15 nM)
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
内体运输与G蛋白偶联受体（GPCR）的命运和信号传导有着错综复杂的联系。细胞外尿苷二磷酸（UDP）通过选择性激活GPCR P2Y6充当信号分子。尽管最近人们对这种受体在胃肠道和神经系统疾病等病理学中的作用感兴趣，但关于P2Y6受体对其内源性激动剂UDP和合成选择性激动剂5-碘-UDP（MRS2693）的内体运输的信息很少。共聚焦显微镜和细胞表面ELISA揭示了表达人P2Y6的AD293和HCT116细胞对MRS2693与UDP刺激的延迟内化动力学反应。有趣的是，UDP诱导了网格蛋白依赖的P2Y6内化，而MRS2693内吞作用的受体刺激似乎与小窝蛋白依赖机制有关。内化P2Y6与Rab4、5和7阳性囊泡相关，与激动剂无关。我们测量了受体表达与Rab11囊泡、反高尔基体网络和溶酶体共同出现的更高频率，以响应MRS2693。有趣的是，在MRS2693刺激下，较高的激动剂浓度逆转了延迟的P2Y6内化和再循环动力学，而没有改变其依赖于小窝蛋白的内化。这项工作表明，配体依赖性效应影响P2Y6受体内化和内体运输。这些发现可以指导可能影响P2Y6信号传导的偏置配体的开发[1]
内源性P2Y6受体激动剂UDP和合成激动剂MRS2693以浓度依赖的方式（0.1-10 nM）保护C2C12骨骼肌细胞免于凋亡，如碘化丙啶染色、使用苏木精和赫斯特33258的组织化学分析以及DNA断裂所示。无法克服的P2Y6受体拮抗剂MRS2578阻断了这种保护作用。TNFα诱导C2C12细胞凋亡与转录因子NF-κB的激活有关。10nM MRS2693减弱了NF-κB的激活，激活了抗凋亡ERK1/2通路[2]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内小鼠后肢模型中，MRS2693可保护骨骼肌免受缺血/再灌注损伤。P2Y6受体是一种新型的细胞保护受体，在改善骨骼肌损伤方面值得进一步探索[2]
小鼠骨骼肌缺血/再灌注体内模型的细胞保护作用 我们使用小鼠后肢缺血/再灌注模型来测试选择性P2Y6激动剂MRS2693的体内保护能力。正如之前在同一模型中对腺苷受体诱导的保护作用的研究[16]所证明的那样，外部收缩剂（90分钟）诱导的缺血再灌注（24小时）导致PBS载体处理的小鼠骨骼肌严重损伤。损伤程度通过EBD对骨骼肌细胞染色的增加来量化，EBD与白蛋白结合，仅进入受损细胞，血清肌酸激酶水平更高。缺血再灌注前给予MRS2693（1mg/kg，腹腔注射）可显著减轻损伤程度（图5）。该化合物减少了骨骼肌损伤，血清CK水平显著降低（3450 U/L±1660 U/L，n=10，SE，与赋形剂治疗的12600 U/L±3300 U/L相比，n=14，P=0.037）。同样，MRS2693也显著降低了EBD染色面积百分比（10.4%±2.0%，SE，n=10，与载体处理的28.3%±5.6%，n=7，P=0.0038）。图6[2]显示了治疗和未治疗小鼠切片中EBD染色的肌细胞。 |
| 细胞实验 |
凋亡的诱导和检测[2]
TNFα用于诱导C2C12细胞（5、7和12天龄）凋亡。洗涤细胞后，用含有5μg/ml环己酰亚胺的新鲜培养基替换培养基，如前所述，在随后的整个培养过程中，环己酰酰亚胺都存在，以促进细胞凋亡。在P2Y6受体拮抗剂MRS2578联合用药的情况下，这是下一个要添加的试剂。将新制备的MRS2578（1 mM）DMSO溶液加入培养基中，使终浓度达到10μM，可选择初始培养20分钟。加入细胞的下一个试剂是P2Y6受体激动剂（MRS2693或UDP）（如果存在）或TNFα（10 ng/ml）。当使用P2Y6受体激动剂时，在激动剂后10分钟加入TNFα。细胞在TNFα和其他试剂存在下保持4小时。然后更换培养基，将培养物在放线菌酮存在下放置16小时。在首次暴露于TNFα后20小时观察到细胞死亡 使用标准末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记（TUNEL）方法检测凋亡细胞的DNA断裂。PI阳性细胞和用5-溴-2′-脱氧尿苷5′-三磷酸（BrdUTP）标记的DNA片段末端的荧光表明细胞死亡或凋亡。通过用细胞渗透染料Hoechst 33258对DNA进行荧光标记以染色核染色质来检测活细胞的存在。对于显微镜应用，细胞被沉积在载玻片上。 |
| 动物实验 |
P2Y6受体激动剂体内给药方案[2]
在诱导缺血前2小时，通过腹腔注射给予P2Y6受体激动剂MRS2693（300 μM）或溶剂（0.1% DMSO的PBS溶液），注射体积为0.1 ml。该方案曾用于先前在同一模型中对腺苷受体激动剂和拮抗剂的研究。此外，在诱导缺血前2.5小时，通过单独的腹腔注射给予EBD（1% w/v溶液，相当于1 mg EBD/10 g体重）。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
为了研究P2Y6受体在骨骼肌细胞损伤中的作用，我们选择使用一种新型高效的合成激动剂MRS2693。MRS2693对该亚型具有更高的选择性，原因在于：1）MRS2693本身对其他P2Y亚型没有活性；2）其相应的5′-三磷酸衍生物对其他P2Y受体亚型的激动作用远弱于UTP。我们已证实，该衍生物在体外和体内均对小鼠骨骼肌细胞具有细胞保护作用。
激活C2C12细胞中的内源性P2Y6受体可显著减弱TNFα诱导的细胞凋亡。这种保护作用在极低的激动剂浓度下即可观察到，并且与ERK1/2的激活相关。新型P2Y6受体激动剂MRS2693在C2C12细胞系中表现出强效的抗凋亡保护作用，且该作用呈浓度依赖性，浓度范围为0.1至10 nM。在星形细胞瘤细胞中也观察到了类似的结果，其中相应的P2Y激动剂的保护作用明显依赖于P2Y6受体，而在未转染的对照细胞或表达P2Y4受体的细胞中则未观察到该保护作用。 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶蛋白激酶C (PKC)家族成员参与多种细胞类型的多种细胞反应。每种PKC同工酶可能参与特定的调控过程。不同的PKC同工酶在组织分布、细胞内定位和辅因子需求方面存在差异，这表明它们可自由地响应不同的配体进行调控，并且可能作用于不同的蛋白质底物。我们的研究结果表明，MRS2693激活P2Y6受体后，PKCθ的表达水平升高，这可能调控ERK1/2的激活。ERK1/2通路是MRS2693保护C2C12细胞免受TNFα诱导的细胞死亡的关键通路之一。因此，MRS2693对骨骼肌细胞的保护作用机制与对星形胶质瘤细胞的保护作用机制相似。由于目前尚无可作为P2Y6受体药理学探针的竞争性拮抗剂，我们使用了二异硫氰酸酯衍生物MRS2578作为P2Y6受体拮抗剂。该拮抗剂阻断了MRS2693对C2C12细胞凋亡的保护作用。激动剂浓度较高时保护作用减弱可能是由于其与其他细胞外核苷酸结合位点或作用于核苷酸的酶相互作用所致。 TNFα诱导的C2C12细胞凋亡与NF-κB激活相关。这与之前众多报道一致，这些报道指出TNFα可在多种系统中激活NF-κB。NF-κB水平升高也被发现可诱导培养的大鼠骨骼肌细胞损伤并伴有蛋白质降解。有趣的是，先前有报道称P2Y6受体激活可诱导某些细胞类型（包括成骨细胞）中NF-κB易位至细胞核。在本研究中，单独的P2Y6受体激活对NF-κB的影响甚微，但却显著降低了TNFα诱导的NF-κB水平的急剧升高。 在小鼠后肢骨骼肌缺血/再灌注损伤的体内模型中，MRS2693也能够发挥有效的细胞保护作用。该模型此前已被用于研究腺苷受体激动剂的保护作用。我们尚未阐明P2Y6受体在体内发挥保护作用的机制。 总之，P2Y6受体是一种新型的细胞保护性受体，值得深入研究其在改善骨骼肌损伤方面的应用。开发更有效、更具选择性和更稳定的P2Y6受体激动剂将有助于这项研究。[2] |
| 分子式 |
C9H10IN2NA3O12P2
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|---|---|
| 分子量 |
596.003209590912
|
| 精确质量 |
595.844
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| 元素分析 |
C, 18.14; H, 1.69; I, 21.29; N, 4.70; Na, 11.57; O, 32.21; P, 10.39
|
| CAS号 |
1448858-83-0
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| 相关CAS号 |
1448858-83-0;MRS 2693 trisodium salt;93906-48-0;MRS2693
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| PubChem CID |
90488768
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| tPSA |
221
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
12
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
29
|
| 分子复杂度/Complexity |
704
|
| 定义原子立体中心数目 |
4
|
| SMILES |
IC1C(NC(N(C=1)[C@H]1[C@@H]([C@@H]([C@@H](COP(=O)([O-])OP(=O)([O-])[O-])O1)O)O)=O)=O.[Na+].[Na+].[Na+]
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| InChi Key |
QWGVSYFNEAILDQ-FCIXCQMASA-K
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| InChi Code |
InChI=1S/C9H13IN2O12P2.3Na/c10-3-1-12(9(16)11-7(3)15)8-6(14)5(13)4(23-8)2-22-26(20,21)24-25(17,18)19;;;/h1,4-6,8,13-14H,2H2,(H,20,21)(H,11,15,16)(H2,17,18,19);;;/q;3*+1/p-3/t4-,5-,6-,8-;;;/m1.../s1
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| 化学名 |
trisodium;[[(2R,3S,4R,5R)-3,4-dihydroxy-5-(5-iodo-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-oxidophosphoryl] phosphate
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| 别名 |
MRS 2693 trisodium salt; 1448858-83-0; 5-Iodouridine-5'-O-diphosphate trisodium salt; 5-Iodo-UDP trisodium salt; trisodium;[[(2R,3S,4R,5R)-3,4-dihydroxy-5-(5-iodo-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-oxidophosphoryl] phosphate;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6779 mL | 8.3893 mL | 16.7785 mL | |
| 5 mM | 0.3356 mL | 1.6779 mL | 3.3557 mL | |
| 10 mM | 0.1678 mL | 0.8389 mL | 1.6779 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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