| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
mGluR1/5
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| 体外研究 (In Vitro) |
NPS2390在缺氧下抑制PASMCs的自噬，从而降低增殖并逆转表型调节[2]
为了确定CaSR的功能是否参与自噬在HPASMCs增殖中的调控和缺氧条件下的表型调节，我们在缺氧或常氧条件下用NPS2390 （10 μM， CaSR抑制剂）处理HPASMCs 24 h。我们的研究结果显示，NPS2390的加入减少了缺氧条件下HPASMCs的增殖并逆转了表型调节（图6A和B）。同时，NPS2390处理后LC3-II的表达也降低（图6C）。结果表明，抑制CaSR可抑制缺氧条件下HPASMCs的自噬（图6D）。 [Ca2+]i在不同组的变化[2] 我们发现低氧显著增强了[Ca2+]i，与低氧组相比，R568 （30 μM）的加入提高了[Ca2+]i的协同性（P < 0.05）。但NPS2390可以抑制这些变化（图7）。 NPS2390在缺氧下抑制HPASMCs中PI3K/Akt/mTOR通路[2] 接下来，我们打算确定NPS2390激活的自噬水平下降是否归因于PI3K/Akt/mTOR通路的变化。在缺氧条件下添加NPS2390 24 h后，p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的表达均升高（图8A、B）。为了进一步验证NPS2390的功能是否依赖于PI3K/Akt通路，我们在缺氧条件下将PI3K抑制剂LY294002 （10 μM）与CaSR激动剂R568一起加入HPASMCs中。与R568低氧组相比，LY294002抑制Akt及其下游mTOR的激活。western blot验证NPS2390对自噬相关蛋白的作用。与未处理的缺氧组相比，缺氧24 h时添加R568可上调LC3-II的表达（图8C和D）。与R568处理缺氧组相比，LY294002处理明显控制LC3-II的表达（图8E）。 这些结果表明，PI3K/Akt信号通路靶向依赖于mTOR抑制的自噬激活，这可能与NPS2390促进HPASMC增殖抑制有关。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
创伤性脑损伤（TBI）引发复杂的神经化学和信号变化级联，导致神经元凋亡，这是导致TBI患者预后不良的原因之一。先前的研究表明，钙敏感受体（CaSR）激活有助于局灶性脑缺血再灌注小鼠神经元死亡，但其在脑外伤后神经元凋亡中的作用尚未明确。本研究采用对照大鼠皮质冲击模型，探讨CaSR抑制剂NPS2390对脑外伤后神经元凋亡的影响。大鼠随机分为假手术组和脑外伤组，分别于脑外伤后30 min和120 min皮下注射NPS2390 (1.5 mg/kg)。所有大鼠均于脑外伤后24 h处死。我们的数据表明，NPS2390可显著减少脑水肿，改善脑外伤后的神经功能。此外，NPS2390可降低caspase-3水平和凋亡神经元数量。此外，NPS2390上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，下调促凋亡蛋白Bax的表达，减少随后细胞色素c释放到细胞质中。综上所述，本研究表明，NPS2390对CaSR的抑制在一定程度上是通过调节内在凋亡通路来减轻脑损伤后神经元的凋亡。[3]
NPS2390可减轻脑水肿，改善脑外伤后神经功能[3] 为了证实NPS2390在宏观水平上的保护作用，我们测量了脑含水量和神经功能缺陷。如图1B所示，与假手术组相比，TBI组脑含水量显著升高（P < 0.05）。然而，褪黑素组脑含水量明显低于TBI组（P < 0.05）。此外，CCI导致神经功能缺损。TBI组mNSS评分明显高于假手术组（P < 0.05，图1C）。如图1C所示，给药NPS2390显著降低TBI后24小时的神经功能缺损（P < 0.05，图1C）。 NPS2390减少了凋亡神经元的数量[3] 假手术组左半球皮层中几乎检测不到tunel阳性神经元的数量（图2）。脑外伤组大鼠TUNEL和NeuN双染色细胞数量较假手术组增加（P < 0.01，图2）。重要的是，NPS2390治疗显著减少了脑外伤后24小时的神经元凋亡（P < 0.05，图2）。 NPS2390上调Bcl-2的表达，降低cleaved caspase-1和bax的表达 [3] 为了证实NPS2390在神经元凋亡中的作用，我们用Western blot检测了cleaved caspase-3的蛋白水平。与sham组相比，TBI组cleaved caspase-3蛋白水平上调，而NPS2390处理显著降低了TBI后cleaved caspase-3的表达（P < 0.05，图3A和B）。 为了研究NPS2390在细胞凋亡通路中的作用，我们采用Western blot方法检测了Bcl-2和Bax的蛋白水平。TBI +载药组Bcl-2蛋白表达水平显著降低（P < 0.05，图3A和C），而NPS2390使Bcl-2蛋白表达升高（P < 0.05，图3A和C）。此外，与假手术大鼠相比，TBI +载药组在TBI后24 h Bax蛋白表达水平显著升高（P < 0.05，图3A和D）。与对照大鼠相比，米诺环素注射组Bax蛋白水平明显降低（P < 0.05，图3A和D）。 NPS2390减少细胞色素c释放到细胞质[3] Bax的上调和Bcl-2的下调诱导线粒体外膜通透性增加和细胞色素c的释放。与假手术组相比，TBI诱导后线粒体和细胞质中细胞色素c水平分别显著降低和升高（P < 0.05，图4A和B）。与TBI +载药组相比，NPS2390给药抑制了细胞色素c向细胞质中的释放。 |
| 细胞实验 |
缺氧治疗HPASMCs [2]
丢弃HPASMCs原培养基，在DMEM中加入1%胎牛血清。同步培养12 h后改为SMCM培养。将细胞置于低氧培养箱中，以1%的O2浓度处理。 BrdU掺入及检测[2] 将BrdU掺入PASMCs中，利用免疫荧光技术检测不同处理组的增殖情况。将不同处理组的细胞在96孔板中培养44 h，然后在细胞中加入BrdU，在38.5℃下继续培养4 h。随后，用4%多聚甲醛固定细胞20 min，用2mol /L HCl、37℃条件下含吐温-20磷酸盐缓冲盐水（PBST）洗涤3次，变性30 min。加入0.1 mol/L四硼酸钠后，保存5 min， PBST洗涤3次；然后用现成的山羊血清在室温下阻断细胞20分钟。加入BrdU一抗G3G4（1:200）后，4℃孵育过夜，PBST洗涤3次。将trifc标记的山羊抗小鼠二抗（1:500）加入细胞中，37℃孵育1 h，孵育后用PBST洗涤3次。最后加入DAPI，室温保存30 min， PBST洗涤3次。在I×70荧光显微镜下，通过BrdU标记的细胞核和dapi染色的细胞核比例计算BrdU掺入指数。 细胞周期测定[2] 为了进行细胞周期分析，将待测PASMCs用磷酸盐缓冲盐水溶液洗涤，置于离心管中，以1000 rpm离心5分钟。丢弃上清，细胞在4ºC下用80%乙醇重悬。再次离心24min， 1000 rpm, 24min。丢弃固定液，细胞重悬于碘化丙啶中。室温下30分钟后，用Cy-toFLEX S流式细胞仪进行细胞周期分析。 Western blot [2] 收集细胞，加入300 μL蛋白裂解液。将细胞置于冰上15 min， 15℃/ 12000 rpm离心15 min，收集上清。调整蛋白浓度后，在沸水中煮沸10分钟，制备SDS-PAGE凝胶，每孔填充40 μg样品进行电泳。300-mA湿旋转120 min后，PVDF膜在室温下封闭1 h，然后加入4℃过夜的CaSR（1:800）、calponin（1:50 00）、SMA-α(1:1000)、OPN（1:50 00）、PCNA（1:1000）、Ki67（1:1000）、LC3（1:1000）、caspase-3（1:1000）、AKT（1:1000）、p-AKT（1:1000）、PI3K（1:1000）、p-PI3K（1:1000）、mTOR（1:1000）、p-mTOR（1:1000）和GAPDH（1:1000）的抗体稀释。用TBST洗涤3次，每次洗涤10 min，然后加入辣根标记的山羊抗兔二抗（1:50 000），室温孵育1 h， TBST洗涤3次；在10 min用ECL化学发光法检测各蛋白的表达。得到蛋白条图像，用Quality one软件对图像进行GAPDH光密度分析。度值作为内部参数用于校正目标蛋白的光密度值。 HPASMCs细胞内钙的测定[2] 采用fluo - 4am钙离子荧光探针检测各组细胞内钙离子密度。细胞密度为2 × 105个/mL。插入激光共聚焦小圆盘。按上述组处理细胞后，按说明书添加10 μmol/L Fluo-4 AM。将细胞置于暗处孵育30 min后，用含无钙缓冲液的PBS反复冲洗，离心2次，激光共聚焦显微镜下观察。 |
| 动物实验 |
动物分组和给药[3]
本研究共使用了51只大鼠。大鼠被随机分为三组：假手术组、TBI+载体组和TBI+NPS2390组。TBI后30分钟和120分钟，皮下注射NPS2390（1.5 mg/kg）。SAH+载体组接受SAH手术，并注射载体。NPS2390的剂量和给药时间点参考了之前的研究。 神经功能缺损评估[3] 采用改良神经功能严重程度评分（mNSS）评估NPS2390对TBI后动物神经功能缺损的影响。在TBI后24小时，采用运动、感觉、反射和平衡测试对各组的神经功能进行盲法评估。总分范围为 0 到 18 分，分数越高表示功能越差。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
我们开发了一种针对非竞争性代谢型谷氨酸受体1型（mGluR1）拮抗剂的鉴别性药效团模型，该模型有助于发现中等活性的mGluR1拮抗剂。我们选择了一种骨架，用于设计多个靶向化合物库，并在其中引入不同的取代模式。由于mGluR1和mGluR5受体亚型具有相似的结合口袋，因此该方法有助于发现强效的mGluR1拮抗剂以及正向和负向的mGluR5调节剂。对于mGluR1拮抗剂，我们构建了mGlu1受体的同源模型，并可视化了受体跨膜结构域内的一种假定结合模式。 [1]
背景与目的：钙敏感受体（CaSR）已知可通过调节小肺动脉中肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）的表型来调控缺氧诱导的肺动脉高压（HPH）和血管重塑。此外，自噬是血管平滑肌细胞（VSMC）表型的重要调节因子。但CaSR是否能在缺氧条件下通过表型调节来调控自噬尚不清楚。 方法：采用细胞周期和BrdU染色检测人PASMCs的活力。采用Western blot检测人PASMCs中增殖蛋白、表型标志蛋白和自噬蛋白的表达。 结果：我们的结果显示，缺氧诱导的自噬在24小时后显著增强。添加NPS2390可降低自噬蛋白和合成表型标志蛋白骨桥蛋白的表达，并通过抑制下游PI3K/Akt/mTOR信号通路增加收缩表型标志蛋白SMA-α和钙调蛋白的表达。 结论：我们的研究表明，NPS2390治疗可通过调节自噬水平抑制肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）的增殖并逆转其表型。[2] 本研究提供的证据表明，钙敏感受体（CaSR）拮抗剂NPS2390对创伤性脑损伤（TBI）引起的脑损伤具有保护作用。首先，NPS2390减轻了脑水肿并改善了神经功能。其次，NPS2390下调了caspase-3的蛋白水平并减少了TUNEL阳性神经元的数量。此外，NPS2390上调了抗凋亡蛋白Bcl-2，下调了促凋亡蛋白Bax，并减少了细胞色素c的释放，表明NPS2390对内源性凋亡途径具有抑制作用。本研究采用改良的神经功能评分（mNSS）评估神经功能缺损，并采用湿重/干重法测定脑水肿。通过Western blot检测cleaved caspase-3以及NeuN和TUNEL双重免疫荧光染色检测神经元凋亡。结果显示，TBI可显著诱发神经功能障碍、严重脑水肿和明显的神经元凋亡。这些变化与既往研究结果一致。NPS2390可改善这些变化。这些发现提示CaSR激活与神经元凋亡密切相关，并可能促进TBI后脑损伤的发生发展。[3]本研究存在一些局限性。首先，本研究仅揭示了NPS2390在早期时间点的神经保护作用，需要进一步研究以评估NPS2390在TBI后的长期疗效。此外，NPS2390治疗TBI的治疗时间窗、最佳剂量以及其他给药途径也需要进一步探讨。最后，CaSR调控TBI中内源性凋亡通路的具体机制仍有待研究。总之，本研究表明CaSR拮抗剂NPS2390能够减轻大鼠TBI后的皮质神经元凋亡，缓解脑水肿，并改善神经功能。NPS2390的神经保护作用可能与内源性凋亡通路有关。 |
| 分子式 |
C19H21N3O
|
|---|---|
| 分子量 |
307.389544248581
|
| 精确质量 |
307.168
|
| 元素分析 |
C, 74.24; H, 6.89; N, 13.67; O, 5.20
|
| CAS号 |
226878-01-9
|
| PubChem CID |
7067728
|
| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
|
| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
542.4±30.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
281.9±24.6 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.4 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.658
|
| LogP |
3.65
|
| tPSA |
54.88
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
|
| 重原子数目 |
23
|
| 分子复杂度/Complexity |
450
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
O=C(C1C=NC2C=CC=CC=2N=1)NC12CC3CC(CC(C3)C1)C2
|
| InChi Key |
ZKFVOZCCAXQXBU-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C19H21N3O/c23-18(17-11-20-15-3-1-2-4-16(15)21-17)22-19-8-12-5-13(9-19)7-14(6-12)10-19/h1-4,11-14H,5-10H2,(H,22,23)
|
| 化学名 |
N-(1-adamantyl)quinoxaline-2-carboxamide
|
| 别名 |
NPS-2390; NPS 2390; NPS2390
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~6.25 mg/mL (~20.33 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.2532 mL | 16.2660 mL | 32.5320 mL | |
| 5 mM | 0.6506 mL | 3.2532 mL | 6.5064 mL | |
| 10 mM | 0.3253 mL | 1.6266 mL | 3.2532 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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