| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 靶点 |
EGFR (IC50 = 0.45 nM)
EGFR (epidermal growth factor receptor) tyrosine kinase. PD 174265 is a potent, selective, and reversible inhibitor of EGFR tyrosine kinase activity. The compound targets the intracellular tyrosine kinase domain of EGFR, blocking its autophosphorylation and subsequent activation of downstream signaling pathways, including the Ras-Raf-MEK-ERK and PI3K-AKT pathways. PD 174265 shows an IC50 of 0.45 nM for EGFR inhibition, indicating exceptionally high potency. The compound's selectivity for EGFR over other kinases contributes to its specificity and reduced off-target effects. PD 174265 is cell-permeable, allowing it to effectively inhibit EGFR in intact cells. The compound's reversible binding mode distinguishes it from irreversible EGFR inhibitors, which may have different pharmacokinetic and safety profiles. PD 174265 has been used to study the role of EGFR in various diseases, including cancer, cardiovascular diseases, and neurodegenerative disorders. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
当蛋白质与PD174265孵育时，未观察到质量增加，表明不存在共价修饰。对药物结合蛋白进行胰蛋白酶消化，并通过液相色谱-电喷雾串联质谱（LC-ESI MS/MS）分析，鉴定出Cys-773是主要的相互作用位点（图3b）。检测到的唯一其他修饰残基是Cys-926；然而，其含量相对较低。包括其余四个半胱氨酸在内的其他残基均未发现改变。为了进一步证实Cys-773是与PD 168393结合的特异性氨基酸，我们构建了重组野生型人EGFR全胞质结构域及其点突变体（其中Cys-773被Ser取代，即C773S），并在杆状病毒中表达，然后从感染的昆虫细胞中纯化得到。野生型和突变型蛋白均表现出相似的酪氨酸激酶（TK）活性，且在相似剂量下均能被PD 168393和PD174265抑制[1]。PD 174265是一种强效的EGFR酪氨酸激酶抑制剂，IC50值为0.45 nM（450 pM）。该化合物在无细胞激酶活性测定中表现出高效性，能有效阻断EGFR的自身磷酸化。PD 174265具有细胞渗透性，因此能够在完整细胞中抑制EGFR活性。该化合物对EGFR的选择性高于其他激酶，这赋予了其特异性。PD 174265抑制EGFR依赖性信号通路，包括MAPK/ERK和PI3K/AKT通路，这些通路对细胞增殖、存活和迁移至关重要。该化合物对EGFR的强效抑制作用使其成为研究EGFR生物学以及验证EGFR作为癌症和其他疾病治疗靶点的宝贵工具。PD 174265已被用于探索EGFR在癌症、心血管疾病和神经退行性疾病中的作用的研究。
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| 体内研究 (In Vivo) |
为了说明不可逆性的优势，表2直接比较了PD 168393（不可逆）和PD174265（可逆）在活细胞中靶点调控方面的差异。PD 168393抑制A431人表皮样癌细胞中EGFR自磷酸化的效力比PD174265高9倍以上。在MDA-MB-453人乳腺癌细胞中，PD 168393对heregulin介导的酪氨酸磷酸化的抑制作用更为显著，其效力比PD174265高30倍以上。图 6a 非常直观地展示了不可逆抑制的治疗优势。该图直接比较了 PD 168393 和 PD174265 对裸鼠体内异种移植的 A431 人表皮样癌的体内活性。PD 168393 在每日一次腹腔注射给药的情况下，对肿瘤生长的抑制作用远优于 PD174265。PD 168393 的肿瘤生长抑制率达到 115%，在本实验中，该值定义为治疗组肿瘤达到三次体积倍增所需时间的中位数减去对照组肿瘤达到三次体积倍增所需时间的中位数，并以治疗持续时间（15 天）的百分比表示。相比之下，PD174265 的肿瘤生长抑制率仅为 13%。这两种化合物的抗肿瘤活性与其抑制EGFR磷酸酪氨酸含量的能力相关。注射后4小时，两种化合物均使磷酸化水平降低了约80%（图6b）。然而，注射可逆化合物PD174265的小鼠在8小时后，磷酸化水平恢复至对照组的75%，24小时后恢复至100%。相比之下，注射PD 168393的小鼠在24小时后EGFR的磷酸酪氨酸含量仍降低了50%。尽管在所有检测时间点，PD 168393的血浆浓度均低于PD174265（数据未显示）[1]，但其治疗优势依然存在。PD 174265已在体内研究了其对EGFR依赖性过程的影响。该化合物对EGFR具有强效且选择性的抑制作用，提示其在EGFR驱动的癌症和其他疾病的动物模型中可能有效。PD 174265已被用于探索心血管疾病和神经退行性疾病的研究，在这些疾病中，EGFR亚型与疾病进展密切相关。该化合物的细胞渗透性和可逆结合模式支持其在体内研究中的应用。虽然公开渠道尚未广泛提供详细的体内疗效数据，但PD 174265已被公认为研究EGFR介导的信号通路及其潜在治疗应用的重要工具。PD 174265的强效抑制作用使其能够精确研究疾病模型中EGFR的功能。
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| 酶活实验 |
将PD 168393或PD174265（溶于二甲基亚砜）的溶液加入到含有50 μg EGFr TK催化结构域的20 mM Tris缓冲液（pH 8.0）、150 mM NaCl、1 mM DTT、1 mM EDTA和1 μg/ml蛋白酶抑制剂（抑蛋白酶和亮抑蛋白酶）中，并用75 mM碳酸氢铵缓冲液（pH 7.5）稀释。90分钟后，加入5%（体积比）乙酸终止反应。取少量蛋白样品，使用配备低流速微型ESI源（流速150 nl/min）的Finnigan MAT 900Q质谱仪进行电喷雾电离（ESI）-MS分析。剩余的蛋白质经还原、烷基化处理后，用0.5 μg胰蛋白酶消化，具体方法见文献(40)。冻干的胰蛋白酶消化肽悬浮于0.1%三氟乙酸/2%乙腈溶液中，并使用配备0.3 × 15 mm Vydac C18色谱柱的Michrom BioResources Magic 2002高效液相色谱仪（HPLC）和Finnigan LCQ四极杆离子阱质谱仪进行液相色谱-电喷雾质谱（LC-ESI-MS）分析。数据采集使用Finnigan Navigator 1.0.1数据采集软件，自动增益控制的默认值分别设置为：全扫描MS、缩放扫描MS和MS/MS模式分别为5 × 10⁷、1 × 10⁷和2 × 10⁷。所有模式下均采用200 ms的最大进样时间和三次微扫描。 MS/MS碎片谱图的相对碰撞能量为35%。
EGFR激酶活性测定采用重组EGFR激酶结构域或从细胞裂解液中免疫沉淀的EGFR。将该酶与肽或蛋白质底物（例如，poly(Glu,Tyr)或EGFR自磷酸化位点）和[γ-³²P]ATP在激酶缓冲液（50 mM HEPES pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.01% Triton X-100）中孵育。反应在30°C下孵育30-60分钟。磷酸化底物通过闪烁计数或使用磷酸化特异性抗体（例如，抗磷酸化EGFR Y1068）的Western印迹法进行定量。将PD 174265用DMSO进行系列稀释，并加入反应混合物中以确定IC50值。 PD 174265 的 IC50 值为 0.45 nM。每个浓度均进行重复测试，IC50 值通过非线性回归分析计算得出。实验中包含适当的阳性对照（例如，已知的 EGFR 抑制剂，如厄洛替尼）和溶剂对照，以验证该检测方法的有效性。 |
| 细胞实验 |
在表达 EGFR 的癌细胞系（例如 A431、MDA-MB-468 或 HCC827 细胞）中评估细胞 EGFR 抑制作用。将细胞在适宜的培养基（例如含 10% FBS 的 DMEM 或 RPMI-1640）中于 37°C、5% CO₂ 条件下培养，并用浓度范围为 0.1 nM 至 10 μM 的 PD 174265 处理 1-24 小时。使用抗磷酸化 EGFR（Tyr1068 或 Tyr1173）抗体通过蛋白质印迹法检测 EGFR 的自身磷酸化。通过蛋白质印迹法检测 ERK1/2 (p-ERK) 和 AKT (p-AKT) 的磷酸化来评估下游信号通路。使用 MTT、CCK-8 或 CellTiter-Glo 检测法评估细胞活力和增殖情况。细胞周期分析采用碘化丙啶染色和流式细胞术进行。细胞凋亡的评估采用Annexin V/PI双染、caspase-3/7活性检测和PARP裂解Western blotting。每个实验均包含溶剂对照（DMSO）和相应的阳性对照（例如，厄洛替尼或吉非替尼）。
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| 动物实验 |
PD 174265 的体内疗效在小鼠异种移植模型中采用 EGFR 驱动的癌细胞系（例如 A431、HCC827 或 MDA-MB-468）进行评估。将肿瘤细胞皮下植入免疫缺陷小鼠体内。当肿瘤达到预定大小后，将小鼠随机分为治疗组和对照组。PD 174265 通过腹腔注射或灌胃给药，剂量根据临床前研究确定。该化合物配制于合适的载体中（例如 DMSO/PEG300/Tween 80）。使用游标卡尺测量肿瘤生长情况。在整个研究过程中监测体重和临床症状以评估耐受性。在研究终点，收集肿瘤进行组织病理学分析、免疫组织化学分析（Ki67 用于检测增殖，cleaved caspase-3 用于检测凋亡）和生化分析（EGFR 磷酸化、下游信号通路）。样本量通常为每组 6-10 只动物。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
分子量：371.23。分子式：C17H15BrN4O。CAS号：216163-53-0。纯度：≥97-98%（HPLC）。溶解度：DMSO：125 mg/mL (336.72 mM)。外观：固体。储存：-20°C保存。运输：冰袋运输。稳定性：≥2年。PD 174265是一种强效、细胞渗透性好、可逆且选择性的EGFR酪氨酸激酶抑制剂。该化合物对EGFR的IC50值为0.45 nM。PD 174265是研究EGFR介导的信号通路以及在癌症、心血管疾病和神经退行性疾病中潜在治疗应用的重要工具。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无PD 174265的公开毒理学数据。该化合物仅供研究使用，尚未完成临床开发所需的完整临床前毒理学评估。作为一种EGFR抑制剂，其潜在不良反应可能包括皮疹、腹泻以及其他与EGFR靶向相关的类效应。该化合物对EGFR的选择性优于其他激酶，可能降低脱靶毒性。标准毒性研究包括啮齿动物急性毒性评估、重复给药毒性研究（14天和28天）以及遗传毒性筛选（Ames试验、微核试验）。PD 174265仅供研究使用，不得用于人类治疗。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
本发明公开了一类高亲和力抑制剂，该类抑制剂通过特异性共价修饰ATP结合口袋中的半胱氨酸残基，选择性且不可逆地灭活表皮生长因子受体酪氨酸激酶。一系列采用质谱、分子建模、定点诱变和活细胞14C标记的实验清楚地表明，这些化合物以1:1的化学计量比选择性地与表皮生长因子受体的催化结构域结合，并烷基化Cys-773。尽管这些化合物在溶液中基本无活性，但当与ATP结合口袋结合时，它们会受到该特定氨基酸的快速亲核攻击。这些抑制剂中丙烯酰胺基团相对于Cys-773的分子取向和位置，完全支持基于ATP结合位点同源建模的分子对接实验的结果。证据还表明，这些化合物与erbB2的相互作用类似，但对本研究中测试的其他受体酪氨酸激酶或细胞内酪氨酸激酶无活性。最后，6-丙烯酰胺基-4-苯胺-喹唑啉与一种强效但可逆的类似物之间的直接比较表明，在人表皮样癌异种移植模型中，不可逆抑制剂的体内抗肿瘤活性远优于可逆类似物，且在治疗剂量下未观察到明显的毒性。该化合物的活性谱是新一代酪氨酸激酶抑制剂的典型特征，在增生性疾病的治疗中具有巨大的应用潜力。[1]
这些化合物的不可逆性可能在靶点抑制和体内药代动力学方面带来其他潜在优势。为了达到最佳的抗肿瘤活性，可能需要对激酶靶点进行长期抑制。不可逆抑制剂在这方面具有优势，因为它们能永久性地消除现有的激酶活性，而这种活性只有在新受体合成后才能恢复。目前的化合物只需在血浆中停留足够短的时间，使受体短暂暴露于药物，即可不可逆地抑制其激酶活性。之后，血浆浓度可以迅速下降，而激酶活性则保持非活性状态。这具有降低最低有效血浆浓度、减少多次给药需求以及无需较长血浆半衰期而不影响疗效的潜在优势。所有这些因素都有助于降低高血浆浓度或长时间血浆浓度下可能发生的非特异性相互作用所导致的毒性。这些药代动力学因素可能对图6中的数据产生一定影响，图6清楚地表明，在本实验的给药方案下，PD 168393 的疗效显著优于可逆化合物 PD 174265。 [1] PD 174265 也称为 PD174265 或 PD-174265。其 IUPAC 名称为 N-{4-[(3-溴苯基)氨基]喹唑啉-6-基}丙酰胺。MDL：MFCD02179208。PD 174265 是一种强效、可渗透细胞、可逆且选择性的 EGFR 抑制剂，IC50 为 0.45 nM。该化合物在研究癌症、心血管疾病和神经退行性疾病方面具有重要价值，因为 EGFR 亚型与这些疾病的进展密切相关。PD 174265 已被用于探索 PKC 介导的信号通路。目前尚未有关于该化合物的临床试验报道。PD 174265 仅供研究使用，不得用于人体。 |
| 分子式 |
C17H15BRN4O
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|---|---|
| 分子量 |
371.24
|
| 精确质量 |
370.043
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| 元素分析 |
C, 55.00; H, 4.07; Br, 21.52; N, 15.09; O, 4.31
|
| CAS号 |
216163-53-0
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| PubChem CID |
4709
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
4.63
|
| tPSA |
66.91
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
23
|
| 分子复杂度/Complexity |
408
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
CCC(=O)NC1=CC2=C(C=C1)N=CN=C2NC3=CC(=CC=C3)Br
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| InChi Key |
WUPUZEMRHDROEO-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C17H15BrN4O/c1-2-16(23)21-13-6-7-15-14(9-13)17(20-10-19-15)22-12-5-3-4-11(18)8-12/h3-10H,2H2,1H3,(H,21,23)(H,19,20,22)
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| 化学名 |
N-[4-(3-bromoanilino)quinazolin-6-yl]propanamide
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| 别名 |
PD-174265; PD174265; pd 174265; 216163-53-0; N-{4-[(3-Bromophenyl)amino]quinazolin-6-Yl}propanamide; 4-[(3-Bromophenyl)amino]-6-propionylamidoquinazoline; 4-aminoquinazoline, 2a; PD-174265; CHEMBL188762; N-(4-((3-Bromophenyl)amino)quinazolin-6-yl)propionamide; PD 174265
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~125 mg/mL (~336.72 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6937 mL | 13.4684 mL | 26.9368 mL | |
| 5 mM | 0.5387 mL | 2.6937 mL | 5.3874 mL | |
| 10 mM | 0.2694 mL | 1.3468 mL | 2.6937 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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