PPTN Mesylate   中文名称: PPTN马来酸盐

P2Y14 receptor (KB = 434 pM)

与其他七种噻吩激活的 P2Y 陷阱相比，PPTN盐酸盐 P2Y14-R 表现出更高的选择性。对于P2Y1、P2Y2、P2Y4、P2Y6、P2Y11、P2Y12和P2Y13插管，1 μM PPTN既没有镇痛作用，也没有拮抗作用[1]。
在分泌性HL-60人早幼粒细胞中，PPTN抑制白细胞中UDP浓度促进的细胞趋化性；在 10 μM UDP 浓度存在下，IC50 为 1 nM；在存在 100 μM UDP 的情况下 - 在存在葡萄糖的情况下，IC50 约为 4 nM[1]。 < br /> PPTN (10μM) 显着降低 p-p38/p38 和 p-ERK1/2/ERK1/2[2]。

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研究人员合成了其中一种分子，即4,7-二取代2-萘酸衍生物（PPTN），并对其药理特性进行了详细研究。在稳定表达P2Y14-R的C6胶质瘤细胞中，udp -葡萄糖促进腺苷酸环化酶抑制的浓度-效应曲线被PPTN呈浓度依赖性向右移动。Schild分析显示pptn介导的抑制遵循竞争动力学，观察到KB为434 pM。相比之下，1 μM PPTN对P2Y1、P2Y2、P2Y4、P2Y6、P2Y11、P2Y12和P2Y13受体没有激动剂或拮抗剂作用。udp -葡萄糖促进HL-60人早幼粒细胞白血病细胞分化的趋化作用被PPTN阻断，其浓度依赖性与重组P2Y14-R测定的KB一致。相比之下，趋化肽fMetLeuPhe引起的趋化反应不受PPTN的影响。新分离的人中性粒细胞的udp -葡萄糖促进的趋化性也被PPTN阻断。总之，这项工作确立了PPTN作为P2Y14-R的高选择性高亲和拮抗剂，有助于探究该受体在生理系统中的作用。[1]

抑制P2Y14受体三叉神经节(TG)减弱cfa诱导的机械性痛觉过敏[2]
P2Y14受体的选择性抑制剂4-[4-（4-哌啶基）苯基]-7-[4-（三氟甲基）苯基]-2-萘甲酸盐酸盐（PPTN）用0.05%二甲亚砜（DMSO）稀释。在CFA治疗前30分钟将DMSO（0.05%）和PPTN注射到TG中 。在图3,机械痛觉过敏在CFA组相比,DMSO政府没有影响机械痛觉过敏1 d (P > 0.05),2 d (P > 0.05),和3 d (P > 0.05)每组(n = 9)(RM双向方差分析后跟Bonferroni测试)治疗的主要作用(F(3、24) = 315.696,P < 0.001),主要的影响时间(F(3、24) = 22.192,P < 0.001),和交互效应(F (72) = 25.208, P < 0.001)。然而，与CFA + DMSO组的机械性痛觉过敏相比，5 μM PPTN组在第1天（P < 0.001）、第2天（P < 0.001）和第3天（P < 0.05）减轻了机械性痛觉过敏（n = 9 /组），10 μM PPTN组在第1天（P < 0.001）、第2天（P < 0.001）和第3天（P < 0.001）减轻了机械性痛觉过敏（n = 9 /组）。这些结果表明，TG中P2Y14受体的抑制可能调节cfa诱导的炎症性疼痛。 <人力资源> 抑制TG中的P2Y14受体降低了cfa诱导的IL-1β、TNF-α、GFAP和CCL2 [2]
的上调表达 CFA治疗前30分钟，在TG中注射0.05% DMSO和10 μM PPTN。western blot检测注射CFA后1 d对侧和同侧TG中IL-1β、TNF-α、GFAP和CCL2蛋白的表达。在图3C、D、E、F中，CFA组与CFA + DMSO组IL-1β、TNF-α、CCL2、GFAP的表达差异无统计学意义（P < 0.05）。如图3C所示，与对侧相比，CFA治疗显著增加了同侧IL-1β的表达（P < 0.001）。但与CFA + DMSO组相比，10 μM PPTN预处理可降低IL-1β表达（P < 0.01）（每组n = 3）。如图3D所示，注射CFA后TNF-α的表达明显上调（P < 0.001，与对照组相比）。10 μM PPTN预处理组TNF-α降低（P < 0.05，与CFA + DMSO相比）（每组n = 3）。在图3E中，CFA处理后GFAP表达显著升高（P < 0.001，与对照组相比），然后10 μM PPTN （P < 0.01，与CFA + DMSO相比）减弱（每组n = 3）。图3F结果显示，CFA处理显著上调CCL2表达（P < 0.001，与对照组相比），CCL2表达降低10 μM PPTN （P < 0.05，与CFA + DMSO相比）（每组n = 3）。上述数据表明，P2Y14受体抑制可能通过抑制SGCs活化和降低TG中IL-1β、TNF-α和CCL2的表达来减轻机械性痛觉过敏。 <人力资源> P2Y14受体的抑制降低了cfa诱导的细胞外信号调节激酶1/2 （ERK1/2）和p38 [2]
的磷酸化 ERK1/2和p38的磷酸化和激活参与炎症性疼痛(Cady et al., 2014；Dong等人，2014)。在TG中注射0.05% DMSO和10 μM PPTN后，根据前人的研究，在CFA治疗后3 d采用western blot检测对侧和同侧TG中p-ERK1/2和p-p38的表达（Cady et al., 2014）。在图4B和E中，ERK1/2与β-actin和P -38与β-actin的综合光密度（IOD）比在对照组、CFA组、CFA + DMSO组和CFA + PPTN组之间无显著差异（P < 0.05）（每组n = 3）。在图4C中，与对侧相比，CFA治疗提高了P -ERK1/2与ERK1/2的IOD比值（P < 0.01）（每组n = 3）。CFA组与CFA + DMSO组P -ERK1/2与ERK1/2比值差异无统计学意义（P < 0.05）。但与CFA + DMSO组相比，10 μM PPTN显著降低了P -ERK1/2与ERK1/2的比值（P < 0.01）。在图4F中，注射CFA后，P -p38与p38的IOD比值也增加（P < 0.01，与对照相比）（每组n = 3）。CFA组P -p38 / p38比值与CFA + DMSO组比较差异无统计学意义（P < 0.05）。然而，10 μM PPTN预处理组P -p38 / p38比值显著低于CFA + DMSO组（P < 0.05）（每组n = 3）。这些数据表明，P2Y14受体对cfa诱导的机械性痛觉过敏的影响可能包括TG中ERK1/2和p38的磷酸化。

AMP循环积累的量化。[1]
在检测前约24小时将细胞镀于24孔板中，并在检测前2小时用1µCi [3H]腺嘌呤/孔标记在25 mM 4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙磺酸（HEPES）缓冲的无血清DMEM中。所有实验均在200µM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX）存在下进行，并通过添加30 μM forskolin、激动剂和/或PPTN启动。37℃孵育15分钟，抽吸培养基，加入500µl 5%三氯乙酸，终止孵育。[3H]环状AMP通过顺序Dowex和氧化铝色谱分离（Salomon et al., 1974），如前所述（Harden et al., 1982）。

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稳定表达P2Y受体的细胞系中肌醇磷酸的积累。[1]
采用稳定的1321N1人星形细胞瘤细胞系，分别检测Gq/磷脂酶c偶联P2Y受体（即P2Y1-1321N1、P2Y2-1321N1、P2Y4-1321N1、P2Y6-1321N1和P2Y11-1321N1细胞）对PPTN的P2Y- r亚型选择性。实验前2天将细胞（20,000个细胞/孔）置于96孔板中，实验前16小时，用100µl含1.0µCi肌[3H]肌醇的无血清无肌醇DMEM孵育细胞的肌醇脂质池。药物在含10 mM LiCl的20 mM HEPES （pH 7.4）缓冲Hanks平衡盐溶液（HBSS）中孵育，在37℃下吸出培养基并加入50 mM甲酸，30分钟后终止。样品用150mm的氢氧化铵中和，用Dowex色谱法和液体闪烁计数定量测定[3H]肌醇磷酸积累，如前所述（Brown等，1991）。

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趋化性的量化。[1]
用2.5 μM碳氰染料1,1′-二十八烷基-3,3,3′，3′-四甲基二碳氰高氯酸盐（DID）负载人中性粒细胞；Vybrant Cell-Labeling Solutions)在添加10%热灭活FBS的RPMI培养基中培养15分钟（106个细胞/ml）， dHL-60细胞在hepes缓冲（pH 7.4） HBSS中加载2.5 μM DID，并添加1.6 mM CaCl2和0.8 mM MgCl2。如上所述，将细胞冲洗两次，悬浮在RPMI或HBSS中。如前所述，在96个多孔FluoroBlock插入物中量化趋化性（Sesma等，2012）。简而言之，在没有或存在指示量的PPTN的情况下，将载体或激动剂添加到下室（225 μl），并将75 μl的细胞悬液（2 × 105个细胞）加载到上室。荧光信号（F， 612 nm激发/670 nm发射）在指定的时间使用Tecan Infinite M1000平板阅读器读取。趋化性指数（Ctx index）定义为： Ctx Index = (F1 - FB) / (F0 - FB)，其中F1和F0分别表示受刺激细胞和未受刺激细胞的荧光信号，FB为无细胞时测得的背景荧光。这些实验中典型的荧光值为：F(B) = 180， F(0) = 1000， F(UDP-glucose) = 1300-1600；F[甲醛- met - leu - phe (fMLP)] = 2300-2500。

三叉神经节（TG）给药[2]
三叉神经注射按照先前的研究（Long et al., 2017）进行。异氟烷麻醉后，用剃毛器剃除耳眼之间的面部毛发。该区域用10%碘伏消毒。注射部位位于切迹和鼓室泡之间；更具体地说，注射部位位于切迹最前点后方2 mm处。触诊同侧角突和髁突之间的切迹后，使用Hamilton注射器沿内侧-上方方向（与头部中线成90°角，与冠状面成15°角）向大鼠注射药物。针头插入深度约为9 mm。然后，在1分钟内注射药物，并在最终位置保持1分钟后缓慢拔出针头。在注射CFA前30分钟，大鼠接受二甲基亚砜（DMSO，稀释至0.05%，0.05 μl/g体重；Sigma-Aldrich）和PPTN（5 μM或10 μM，溶于0.05% DMSO，0.05 μl/g体重；Tocris Bioscience，英国）处理。PPTN的浓度和用量参考了之前的研究（Azroyan等，2015；Long等，2017；Sesma等，2016）。因此，将大鼠随机分为四组：对照组（对侧胡须垫区域注射生理盐水）、CFA 组（同侧胡须垫区域注射 CFA，炎症大鼠）、CFA + DMSO 组（炎症大鼠，同侧三叉神经注射 0.05% DMSO）和 CFA + PPTN 组（炎症大鼠，同侧三叉神经注射 PPTN）。

[1]. A selective high-affinity antagonist of the P2Y14 receptor inhibits UDP-glucose-stimulated chemotaxis of human neutrophils. Mol Pharmacol. 2013 Jul;84(1):41-9.

[2]. The P2Y14 receptor in the trigeminal ganglion contributes to the maintenance of inflammatory pain. Neurochem Int. 2019 Dec;131:104567.

核苷酸糖激活的P2Y14受体（P2Y14-R）在造血细胞中高表达。尽管该受体的生理功能尚未明确，但近期研究表明其与免疫和炎症反应密切相关。由于缺乏受体选择性高亲和力拮抗剂，对该受体以及大多数其他八种核苷酸糖激活的P2Y受体的研究进展缓慢。Gauthier等人（Gauthier et al., 2011）近期发现了一系列对P2Y14-R具有拮抗活性的分子。
UDP-葡萄糖与黏蛋白同时从气道上皮杯状细胞（黏液细胞）释放（Hirschberg等人，1998；Kreda等人，2007；Okada等人，2011），而囊性纤维化、哮喘和慢性阻塞性肺病等慢性肺部疾病的特征是黏蛋白分泌过多和炎症。值得注意的是，囊性纤维化患者肺分泌物（即支气管肺泡灌洗液）中的UDP-葡萄糖水平处于能够有效激活P2Y14受体的浓度范围内（Sesma等人，2009），这可能与气道炎症有关。因此，本文利用重组细胞系统阐明的PPTN对P2Y14受体的药理活性和选择性表明，该分子有望用于研究P2Y14受体在体内肺部炎症中的生理作用。我们观察到PPTN能够阻断UDP-葡萄糖促进的人中性粒细胞趋化作用，且其作用浓度范围与在表达P2Y14受体的细胞系中测定的Kb值一致，这一观察结果进一步证实了上述观点。[1]

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三叉神经节(TG)神经元和卫星胶质细胞(SGC)中表达的P2Y嘌呤能受体与炎症性和神经性疼痛有关。据报道，脊髓、背根神经节(DRG)和三叉神经节(TG)中均有P2Y14受体的表达。本研究探讨了P2Y14受体在Sprague-Dawley (SD)大鼠炎症性口面部疼痛中三叉神经节(TG)中的作用。外周注射弗氏完全佐剂(CFA)可诱导机械性痛觉过敏，并伴随TG中P2Y14受体、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、CC趋化因子CCL2、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)和磷酸化p38(p-p38)蛋白的快速上调。此外，免疫荧光染色证实了CFA诱导的P2Y14受体上调。双重免疫染色显示P2Y14受体与谷氨酰胺合成酶(GS)和神经元核(NeuN)共定位。最后，三叉神经内注射P2Y14受体选择性拮抗剂（PPTN）可减轻CFA诱导的机械性痛觉过敏。PPTN还能降低GFAP、IL-1β、TNF-α、CCL2、p-ERK1/2和p-p38蛋白的表达上调。我们的研究结果表明，三叉神经节中的P2Y14受体可能通过调节唾液腺细胞活化、释放细胞因子（IL-1β、TNF-α和CCL2）以及磷酸化ERK1/2和p38，参与口面部炎症性疼痛的发生。[2]

C30H28F3NO5S

571.61

571.164

1160271-31-7

154731156

Typically exists as solid at room temperature

112

3

9

4

40

798

0

NUTQRNOURPWIIS-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C29H24F3NO2.CH4O3S/c30-29(31,32)25-8-5-19(6-9-25)22-7-10-26-23(15-22)16-24(28(34)35)17-27(26)21-3-1-18(2-4-21)20-11-13-33-14-12-20;1-5(2,3)4/h1-10,15-17,20,33H,11-14H2,(H,34,35);1H3,(H,2,3,4)

methanesulfonic acid;4-(4-piperidin-4-ylphenyl)-7-[4-(trifluoromethyl)phenyl]naphthalene-2-carboxylic acid

PPTN Mesylate salt; PPTN Mesylate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。