| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
TRIM21 (E3 ubiquitin ligase) and NUP98 (nucleoporin) [1]
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
- TRIM21 依赖的 NPC 降解： 在 IFNγ 预刺激的 A549 细胞中，(S)-ACE-OH (10 µM) 处理 8 小时可触发核孔蛋白 NUP35、SMPD4 和 GLE1 的降解，而无活性的对映异构体 (R)-ACE-OH 则不能。这种降解可被蛋白酶体抑制剂硼替佐米和 E1 泛素激活酶抑制剂 TAK-243 所阻断 [1]。
- 立体选择性细胞毒性： (S)-ACE-OH 在 A549 和 DLD-1 细胞中显示出干扰素增强的细胞毒性。相反，(R)-ACE-OH 在这两种细胞系中均无活性。在 A549 细胞中，(S)-ACE-OH 在有 IFNγ 存在时的 IC50 为 6.2 µM (95% 置信区间: 5.2-7.4 µM) [1]。 |
| 酶活实验 |
- 等温滴定量热法 (ITC) 测定结合亲和力： ITC 实验在 25°C 下使用 MicroCal PEAQ-ITC 进行。将纯化的 TRIM21D355A 的 PRYSPRY 结构域透析后（缓冲液：20 mM HEPES, 150 mM NaCl, 0.5 mM TCEP， pH 8.0, 1% DMSO）以 20-25 µM 的浓度加入样品池中。将 (S)-ACE-OH 从 100 mM DMSO 母液中稀释至 300-500 µM（最终 DMSO 浓度为 1%）。滴定程序包括一次 0.4 µL 的初始注射和 18 次 2 µL 的注射，搅拌速度为 1000 rpm。测得 (S)-ACE-OH 与 PRYSPRY 结构域的结合亲和力（Kd）为 17.9 µM。未检测到 (S)-ACE-OH 与 NUP98APD 的结合 [1]。
- ITC 测定三元复合物形成： 为探究三元复合物的形成，将 NUP98APD (注射器中 200 µM) 滴定到含有预孵育了 (S)-ACE-OH (100 µM) 的 全长 His-Lipoyl-TRIM21D355A (50 µM) 的样品池中。实验结果显示，NUP98APD 对预形成的 TRIM21D355A;(S)-ACE-OH 复合物表现出强结合亲和力，解离常数 (Kd) 为 3.38 µM (置信区间: 2.06-4.70 µM)。在无配体情况下未检测到相互作用 [1]。 - GST Pull-Down 实验： 将 His-Lipoyl-TRIM21 (WT 或 D355A) 与 GST-NUP98APD 按 1:1 摩尔比在 pull-down 实验缓冲液中混合。向蛋白混合物中加入 DMSO、(S)-ACE-OH 或 (R)-ACE-OH。冰上孵育后，将混合物与谷胱甘肽琼脂糖珠一起孵育。通过 SDS-PAGE 和考马斯亮蓝染色分析结合蛋白。实验表明，GST-NUP98APD 在 (S)-ACE-OH 存在下能有效拉下 His-Lipoyl-TRIM21，而在 (R)-ACE-OH 存在下则不能 [1]。 - CEBIT（基于冷凝物的试管内生物分子相互作用富集）实验： 形成 SmF-EGFP-SH3-NUP98APD 和 SmF-EGFP-PRM 冷凝物。将含有 TRIM21D355A-3xFLAG 的细胞裂解液或纯化的 TRIM21D355A-3xFLAG 蛋白与不同浓度的 (S)-ACE-OH 或 (R)-ACE-OH 一起孵育。通过离心沉淀冷凝物，并用蛋白质印迹法进行分析。该实验证明，用 (S)-ACE-OH 处理能以剂量依赖的方式富集冷凝物中的 TRIM21，而 (R)-ACE-OH 没有这种效果，显示了相互作用的特异性 [1]。 - 体外泛素化实验： 在含有 ATP 的缓冲液中，混合纯化的 TRIM21D355A-3xFLAG、SmF-EGFP-PRM、SmF-EGFP-SH3-NUP98APD、UBA1 (E1)、七种 E2 酶的混合物以及泛素，进行体外泛素化反应。在加入酶之前 30 分钟加入 (S)-ACE-OH 或 (R)-ACE-OH。结果显示，用抗泛素和抗 GFP 抗体检测，只有 (S)-ACE-OH，而非 (R)-ACE-OH，能诱导 SmF-EGFP-SH3-NUP98APD 和 SmF-EGFP-PRM 的多聚泛素化 [1]。 |
| 细胞实验 |
- 细胞活力测定： 为获得浓度-反应曲线，将细胞（如 A549, DLD-1）接种在 96 孔板中，并使用数字分配器加入梯度稀释的 (S)-ACE-OH 或 (R)-ACE-OH。三天后，按照制造商说明使用发光法细胞活力检测试剂盒测量细胞存活率。使用 GraphPad Prism 软件计算 IC50 [1]。
- 检测蛋白质降解的蛋白质印迹法： A549 细胞先用 IFNγ 预处理，再用 (S)-ACE-OH 或 (R)-ACE-OH 处理 8 小时。细胞在含有苯并酶和蛋白酶抑制剂的 SDS 裂解缓冲液中裂解。蛋白裂解液经 SDS-PAGE 分离，转移到硝酸纤维素膜上，然后用靶蛋白（如 NUP35, SMPD4, GLE1）和内参（β-actin）的一抗进行孵育。这证实了只有 (S)-ACE-OH 能诱导特定核孔蛋白的降解 [1]。 - 免疫荧光和共聚焦成像： A549 细胞用母体化合物 ACE 处理指定时间。将盖玻片上的细胞用多聚甲醛固定，Triton X-100 透化，并用血清封闭。然后，将细胞与一抗（如 anti-NPC, anti-NUP98, anti-SMPD4）孵育，随后与荧光二抗和 DAPI 孵育。使用共聚焦显微镜采集图像，以观察对核孔复合物的影响 [1]。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
- 代谢活化： 母体药物乙酰丙嗪 (ACE) 是一种前药。在敏感的癌细胞系中，它通过醛酮还原酶 AKR1C1、AKR1C2 和 AKR1C3 转化为活性代谢物 (S)-ACE-OH。这种转化在 A549 和 HeLa 细胞中观察到，但在 DLD-1 或 HCT-116 细胞中未观察到。通过薄层色谱和液相色谱-质谱联用确认了转化，结果显示一个质量增加 2 道尔顿的物质，对应于添加了两个氢原子 [1]。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
- 活性的立体特异性： 乙酰丙嗪还原产生的手性中心产生两种对映异构体。 (S)-对映异构体是负责干扰素增强的细胞毒性和蛋白质降解活性的活性代谢物，而 (R)-对映异构体是无活性的。通过化学衍生化和 X 射线衍射确定了其绝对构型 [1]。
- 结构见解： TRIM21 PRYSPRY 结构域与 (S)-ACE-OH 的共晶体结构显示，三环吩噻嗪环占据一个疏水口袋。 (S)-ACE-OH 的脂肪链将其胺基定向，与 E389 和 Q395 的侧链形成极性相互作用，这种构象与无活性的 (R)-ACE-OH 不同，表明这对分子胶活性至关重要 [1]。 |
| 分子式 |
C19H24N2OS
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|---|---|
| 分子量 |
328.47
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| 精确质量 |
328.1609345
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| 相关CAS号 |
3095569-90-4
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| PubChem CID |
92288648
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow ointment
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| LogP |
3.8
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| tPSA |
52 Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
23
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| 分子复杂度/Complexity |
378
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
C[C@@H](C1=CC2=C(C=C1)SC3=CC=CC=C3N2CCCN(C)C)O
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| InChi Key |
ZIJWCRNUEBJMSQ-AWEZNQCLSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H24N2OS/c1-14(22)15-9-10-19-17(13-15)21(12-6-11-20(2)3)16-7-4-5-8-18(16)23-19/h4-5,7-10,13-14,22H,6,11-12H2,1-3H3/t14-/m0/s1
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| 化学名 |
(1S)-1-[10-[3-(dimethylamino)propyl]phenothiazin-2-yl]ethanol
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| 别名 |
(S)-ACE-OH; (S)-ACE OH;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 100 mg/mL (304.4 mM）
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.0444 mL | 15.2221 mL | 30.4442 mL | |
| 5 mM | 0.6089 mL | 3.0444 mL | 6.0888 mL | |
| 10 mM | 0.3044 mL | 1.5222 mL | 3.0444 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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