| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 10mg | ||
| 25mg | ||
| 50mg | ||
| 500mg | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
BFL1 (Bcl-2-related protein A1). The compound is a covalent inhibitor selectively targeting BFL1 over other BCL2 family members (BCL-xl, BCL2, MCL1 all had IC50 >30 μM in FRET assays). [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
- 生化活性: 化合物20在BFL1 TR-FRET实验中显示出有效的抑制作用，IC50为19 nM。其共价结合的二阶速率常数 (kinact/KI) 测定为11,000 M⁻¹·s⁻¹。 [1]
- 细胞活性（Caspase激活）: 在同时依赖于BFL1和MCL1的SUDHL1细胞中，使用20联合MCL1抑制剂AZD5991 (0.5 μM) 处理，导致caspase 3/7激活，EC50为0.35 μM。 [1] - 细胞活性（细胞活力）: 在使用SUDHL1细胞并与0.5 μM AZD5991联合的细胞活力测定中，20的EC50为0.25 μM。在不表达BFL1的Karpas-422细胞系中，未观察到20处理导致细胞活力丧失，表明其脱靶毒性极小。 [1] - 作用机制（BIM置换）: 20被证明能将促凋亡蛋白BIM从BFL1上置换下来，这与BH3模拟拮抗剂的作用机制一致。这种置换导致BIM重新与MCL1结合，而这一问题可以通过与MCL1抑制剂联合使用来解决。 [1] - 作用机制（蛋白稳定化）: 在OCILY10细胞中进行的pulsed-SILAC实验显示，使用3.2 μM的20处理可将BFL1蛋白的半衰期从2.6小时（基础水平）显著延长至10.8小时，表明由于高靶点占有率而产生的稳定效应。 [1] - 靶点占有率: 在SUDHL1细胞中，靶向蛋白质组学显示，20以剂量和时间依赖的方式降低了未结合（apo）BFL1肽的水平，并增加了药物结合（加合物）肽的水平。在1 μM和24小时的时间点，20的占有率较早期化合物7略有提高。 [1] - 选择性分析: 在包含24种不同分子靶点（受体、离子通道、转运蛋白、酶）的 panel 中，20仅对CB1受体显示出低于1 μM的结合活性，但未显示功能活性（IC50 >100 μM）。在48种激酶的 panel 中，在1 μM浓度下未观察到>50%的抑制活性。 [1] 体内活性: - 肿瘤模型中的药效学(PD): 在携带OCILY10肿瘤的小鼠中，单次口服给予100 mg/kg和300 mg/kg的20，在给药后6小时，肿瘤组织中出现了剂量依赖性的BFL1稳定化和cleaved caspase-3激活。这些效应与从药代动力学研究预测的血浆暴露量一致。 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
- 肿瘤模型中的药效学(PD): 在携带OCILY10肿瘤的小鼠中，单次口服给予100 mg/kg和300 mg/kg的20，在给药后6小时，肿瘤组织中出现了剂量依赖性的BFL1稳定化和cleaved caspase-3激活。这些效应与从药代动力学研究预测的血浆暴露量一致。 [1]
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| 酶活实验 |
- BFL1 TR-FRET实验: 为筛选能阻断BFL1与BH3-only蛋白BIM相互作用的化合物，建立了TR-FRET实验。实验在2小时时间点进行。将化合物与BFL1蛋白和标记的BIM肽孵育。测试化合物抑制BFL1-BIM相互作用会导致FRET信号降低。IC50值通过归一化的剂量反应FRET数据使用曲线拟合软件计算。对于化合物20，该实验测得的IC50为19 nM。 [1]
- kinact/KI测定（共价结合效率）: 测定了关键化合物的二阶速率常数，该常数描述了共价键形成的效率。在此实验中，BFL1蛋白（600 nM，溶于20 mM Tris pH 7.4，150 mM NaCl）与测试化合物的对数浓度范围（0.5至50 μM）在七个不同的孵育时间（1至90秒）下一起孵育。通过加入淬灭溶液（1.6%甲酸）终止反应。通过完整蛋白质质谱法测量被化合物修饰的蛋白质分数。将观察到的速率常数(kobs)对抑制剂浓度作图，并拟合到动力学模型以推导kinact/KI值。对于化合物20，kinact/KI测定为11,000 M⁻¹·s⁻¹。 [1] - 谷胱甘肽(GSH)反应性实验: 为监测丙烯酰胺弹头（warhead）的反应性并避免非特异性化合物，进行了GSH反应性实验。将化合物与过量的GSH孵育，通过质谱法测量化合物消耗的半衰期(t1/2)。目标是GSH t1/2 >100分钟。化合物20的GSH t1/2为140分钟。 [1] |
| 细胞实验 |
- SUDHL1细胞中的Caspase激活实验: 为了测量化合物在功效测定中的效力，使用了Caspase 3/7实验。将SUDHL1细胞（3000个/孔）接种在384孔白板中，孔中预分发了10点稀释范围（0.3 nM至10 μM）的化合物20，并与固定剂量的0.5 μM AZD5991（MCL1抑制剂）联合使用。最终DMSO浓度为0.1%。阴性对照仅用0.5 μM AZD5991处理，阳性对照用0.5 μM AZD5991和0.5 μM AZD4320（BCL-xL抑制剂）的组合处理。在37°C、5% CO2下孵育6小时后，加入Caspase-Glo 3/7试剂。30分钟后测量发光信号，该信号与caspase 3/7活性成正比。20在该实验中的EC50为0.35 μM。 [1]
- SUDHL1和Karpas-422细胞中的细胞活力实验: 为了分析效力和选择性，使用了测量总ATP含量（CellTiter-Glo）的细胞活力实验。将SUDHL1（表达BFL1）和Karpas-422（不表达BFL1）细胞（4000个/孔）接种在384孔板中，孔中预分发了10点稀释范围（0.3 nM至10 μM）的化合物20。对于SUDHL1细胞的联合研究，包含了固定剂量0.5 μM的AZD5991。在37°C、5% CO2下孵育24小时后，加入CellTiter-Glo 2.0试剂并测量发光。在联合AZD5991的SUDHL1细胞中，20的细胞活力EC50为0.25 μM。在Karpas-422细胞中未观察到对活力的影响。 [1] - SUDHL1细胞中的BFL1靶点占有率实验: 为测量靶点占有率，用DMSO或10、1、0.1 μM的20处理SUDHL1细胞2、6或24小时，每个条件做双复孔。收集细胞，洗涤并裂解。为进行绝对定量，向样品中加入重标标准肽。通过质谱监测一个不受影响的BFL1肽、apo-肽（含有未结合的Cys55）和加合物-肽（与20共价结合）。占有率通过apo-BFL1与总BFL1的比例计算。20显示出剂量和时间依赖性的占有率增加。 [1] - OCILY10细胞中的BFL1蛋白转换率（pulsed-SILAC）实验: OCILY10细胞在“重”培养基中完全标记。然后用DMSO或3.2 μM 20预处理1小时。实验开始（t=0）时，将细胞转换到含有相同处理的“轻”培养基中。在不同时间点（0分钟至24小时）收集细胞。通过质谱监测BFL1肽段，以追踪预先存在的“重”蛋白的降解和新“轻”蛋白的合成。BFL1的半衰期根据“重”信号的衰减计算。20处理将BFL1半衰期从2.6小时（DMSO）延长至10.8小时。 [1] - OCILY10细胞中BFL1稳定化和Cleaved Caspase-3的MSD实验: 为了评估靶点参与情况，开发了MSD实验。OCILY10细胞用Q-VD-OPH (50 μM) 预处理过夜，然后用20 (0.3, 1, 3, 9 μM) 或DMSO处理6小时。收集细胞裂解物并归一化蛋白浓度。对于BFL1稳定化实验，用BFL1捕获抗体包被板。封闭和洗涤后，加入裂解物，然后加入一级检测抗体和SULFO-TAG标记的二级抗体。对于cleaved caspase-3实验，按照制造商方案使用商业试剂盒。两项实验均显示，用20处理后，BFL1稳定化和cleaved caspase-3信号呈剂量依赖性增加。 [1] |
| 动物实验 |
- Pharmacokinetic (PK) Study in Mice: Male CD-1 mice (n=2 per route) were dosed with compound 20. The intravenous (iv) dose was 0.5 mg/kg administered via tail vein bolus. The oral (po) dose was 1 mg/kg administered by gavage. The formulation for both routes was a solution in 5% DMSO and 95% SBE-β-CD (30% w/v) in water. Blood samples were collected from the dorsal metatarsal vein at 2, 5, 30 min, 1, 2, 4, 8, and 24 h (iv) and at 15, 30 min, 1, 2, 4, 8, and 24 h (po). Plasma was isolated and analyzed by LC-MS/MS. [1]
- Pharmacokinetic (PK) Study at Higher Dose: Female SCID mice were dosed orally with 20 at 30 mg/kg to determine plasma concentration at the 6-hour time point. The formulation used was a suspension in 0.5% hydroxypropylmethylcellulose/0.1% Tween in water. [1] - In Vivo Pharmacodynamics (PD) Study: Female C.B.-17 SCID mice were subcutaneously implanted with 5 million OCILY10 cells in the right flank. When tumors were established, mice were given a single oral dose of 20 at 100 mg/kg or 300 mg/kg. The formulation was in water with the pH adjusted to 2.3-2.5. Six hours post-dose, tumors were collected, homogenized, and analyzed for BFL1 stabilization and cleaved caspase-3 activation using MSD assays. [1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
理化性质：化合物20在pH 7.4时的LogD值为2.1。它具有良好的溶解度（182 μM）和较高的被动渗透性（Caco-2 Papp：9.1 × 10⁻⁶ cm/s）。[1]
- 体外代谢稳定性：20在大鼠肝细胞中显示出中等的固有清除率（24 μL/min/10⁶ 个细胞），在人肝微粒体中显示出较低的固有清除率（<7 μL/min/mg）。在小鼠肝细胞中，固有清除率为26 μL/min/10⁶ 个细胞。 [1] - 小鼠体内药代动力学（静脉注射 0.5 mg/kg，口服 1 mg/kg）：静脉给药后，化合物20的血浆清除率 (CLobs) 为 41 mL/min/kg，稳态分布容积 (Vss) 为 2.1 L/kg，末端半衰期 (T1/2) 为 1.8 小时。口服给药后，生物利用度 (F) 为 55%，Cmax 为 605 nM，AUC 为 270 nM·h。小鼠血浆蛋白结合率为 5.9%。 [1] - 小鼠体内药代动力学（口服 30 mg/kg）：在 SCID 小鼠单次口服 30 mg/kg 剂量后，6 小时时间点血浆中药物浓度约为 150 nM，表明药代动力学呈线性关系。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
细胞选择性/毒性：在 BFL1 缺失的 Karpas-422 细胞系中，化合物 20 不影响细胞活力，表明其脱靶细胞表型极小。[1]
- 脱靶药理学：在包含 24 个分子靶点的广泛测试中，化合物 20 仅与 CB1 受体表现出显著结合（IC50 < 1 μM），但未表现出功能活性（IC50 > 100 μM）。在包含 48 个激酶的测试中，1 μM 浓度下未观察到显著抑制（> 50%）。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
背景和原理：BFL1 是 BCL2 家族中一个研究不足的抗凋亡成员，在多种血液系统恶性肿瘤中过表达。由于 BFL1 的蛋白质-蛋白质相互作用 (PPI) 界面较浅，靶向 BFL1 具有挑战性。BFL1 BH3 沟槽中独特的半胱氨酸残基 Cys55 是共价抑制的靶点。化合物 20 是通过基于结构的优化，从共价片段先导化合物（化合物 6）开发而来，旨在提高其效力、选择性和口服生物利用度。[1]
- 作用机制（细胞死亡）：在 SUDHL1 和 OCILY10 细胞系中，用化合物 20 处理（在共依赖性细胞系中与 MCL1 抑制剂联合使用）可诱导细胞死亡表型，表现为 caspase 3 的激活。体内实验证实了这一点，在 OCILY10 肿瘤异种移植模型中，裂解 caspase-3 的激活呈剂量依赖性。 [1] - 蛋白质稳定作用：化合物20与BFL1蛋白的结合率很高，能够稳定该蛋白并将其半衰期从2.6小时延长至10.8小时。这种稳定作用可作为体外和体内靶点结合的标志。[1] - 先导化合物筛选：基于其均衡的特性，包括强效的细胞活性（在caspase活性测定中EC50 = 0.35 μM）、适中的体外固有清除率、高渗透性、良好的溶解性以及在小鼠体内良好的口服生物利用度（55%），化合物20被选为体外和体内研究的工具化合物。[1] |
| 分子式 |
C22H24CLFN2O2
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|---|---|
| 分子量 |
402.89
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| 精确质量 |
402.15103
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| CAS号 |
3106363-91-8
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| 相关CAS号 |
3106363-91-8
; Bfl-1-IN-6 trifluoroacetate
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| 外观&性状 |
Typically exists as solids at room temperature
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| LogP |
4.5
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| tPSA |
55.6 Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
28
|
| 分子复杂度/Complexity |
541
|
| 定义原子立体中心数目 |
3
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| SMILES |
C[C@@H](C1=CC=C(C=C1)Cl)N(C2=CC(=C(C=C2)O[C@@H]3CC[C@H](C3)N)F)C(=O)C=C
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| InChi Key |
PDKKJSNSPGZTJL-POZUXBRTSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H24ClFN2O2/c1-3-22(27)26(14(2)15-4-6-16(23)7-5-15)18-9-11-21(20(24)13-18)28-19-10-8-17(25)12-19/h3-7,9,11,13-14,17,19H,1,8,10,12,25H2,2H3/t14-,17+,19+/m0/s1
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| 化学名 |
N-[4-[(1R,3R)-3-aminocyclopentyl]oxy-3-fluorophenyl]-N-[(1S)-1-(4-chlorophenyl)ethyl]prop-2-enamide
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| 别名 |
Bfl-1-IN-6; Bfl-1-IN6;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4821 mL | 12.4103 mL | 24.8207 mL | |
| 5 mM | 0.4964 mL | 2.4821 mL | 4.9641 mL | |
| 10 mM | 0.2482 mL | 1.2410 mL | 2.4821 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
IGN523
d-T101 peptide
Ac-DMLD-CMK TFA
2-Et-AZT
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