| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
PROTAC D16-M1P2 targets PKMYT1 (protein kinase, membrane-associated tyrosine/threonine kinase 1) for degradation via the ubiquitin-proteasome system. The PKMYT1-binding moiety (compound 4) has a PKMYT1 enzymatic inhibition IC50 of 2.6 nM in a HTRF binding assay (Supplementary Fig. 6c). [1]
In a cell-free competitive HTRF binding assay with recombinant PKMYT1, D16-M1P2 shows a binding IC50 of 4.1-5.0 nM (comparable to four diastereoisomers). [1] In cellular assays (HCC1569 cells), D16-M1P2 degrades PKMYT1 with a DC50 of 0.7 nM and Dmax of 90%. It inhibits pCDK1 (Thr14) with an IC50 of 9.0 nM. [1] In a NanoBRET cellular target engagement assay, D16-M1P2 shows an IC50 of 12.0 nM. [1] D16-M1P2 is highly selective for PKMYT1; in a KinomeScan panel of 403 kinases at 1000 nM, only 4 kinases (including PKMYT1) exceeded 65% inhibition. Off-target validation shows IC50 values: BRAF 485.3 nM, RAF1 373.1 nM, SRC 398.5 nM (>50-fold selectivity over PKMYT1 IC50 of 7.6 nM). [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在 HCC1569 细胞中，D16-M1P2 诱导剂量依赖性的 PKMYT1 降解，DC50 为 0.7 nM，Dmax 为 90%。它还抑制 pCDK1，IC50 为 9.0 nM。 [1]
PKMYT1 降解迅速，在 100 nM 浓度下 4 小时内降解超过 80%。该降解由泛素-蛋白酶体系统介导，与 MG132 或 MLN-4924 共处理可完全消除降解。与过量的 PKMYT1 抑制剂或 CRBN 配体共处理也会阻断降解。 [1] 在洗脱实验中，100 nM D16-M1P2 处理 24 小时后，PKMYT1 降解和 pCDK1 抑制可持续至少 24 小时，而可逆抑制剂 RP-6306 在洗脱后 2 小时内快速恢复。 [1] 在 11 种肿瘤细胞系的细胞增殖实验中，D16-M1P2 对生物标志物阳性细胞的平均 IC50 为 177 nM，对野生型细胞为 2121 nM，显示出 12 倍的选择性。 [1] D16-M1P2 在 HCC1569 细胞中高达 1 μM 时不降解已知的 CRBN 新底物，表明高选择性。 [1] 定量质谱蛋白质组学鉴定 PKMYT1 为 D16-M1P2 处理后下降最显著的蛋白质。 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在携带 HCC1569 肿瘤的 NOD/SCID 小鼠异种移植模型中，口服 D16-M1P2 每日两次，连续 21 天，显示出剂量依赖性的肿瘤生长抑制：40 mg/kg 时抑制 35.1%，120 mg/kg 时抑制 66.4%。 [1]
肿瘤组织的药效学分析显示剂量依赖性的 PKMYT1 降解和相应的 pCDK1 抑制，药效在 120 mg/kg 剂量下持续至少 24 小时。 [1] 与 RP-6306 相比，D16-M1P2 在 120 mg/kg 剂量下达到相当的疗效，但体重下降更少，表明耐受性改善。 [1] |
| 酶活实验 |
PKMYT1 HTRF 结合测定：将人重组 PKMYT1-GST 激酶与系列稀释的测试化合物在 384 孔板中 25°C 孵育 15 分钟。加入 Tracer178 和 GST-Tb，继续孵育 60 分钟。在 665/615 nm 处测量信号，计算 IC50。 [1]
PKMYT1 ADP-Glo 激酶活性测定：将人重组 PKMYT1 与测试化合物在反应缓冲液中 25°C 孵育 10 分钟。加入未活化的 CDK1 和 ATP 启动反应。60 分钟后加入 ADP-Glo 试剂和检测液，测量发光。 [1] NanoBRET 细胞靶点接合测定：用 PKMYT1-NanoLuc 融合载体瞬时转染 HEK293 细胞，用测试化合物处理 30 分钟，然后用细胞渗透性激酶 NanoBRET Tracer K-5 处理 2 小时。加入 Nano-Glo 底物，测量受体和供体发射光。 [1] |
| 细胞实验 |
pCDK1 细胞內 western 测定：HCC1569 细胞在 384 孔板中用测试化合物处理 24 小时，固定、透化、封闭，与抗 pCDK1 抗体和 IRDye 800CW 二抗孵育，用 Odyssey CLx 成像系统扫描。 [1]
免疫印迹：细胞在含蛋白酶抑制剂的 RIPA 缓冲液中裂解。BCA 法测定蛋白浓度。50 μg 裂解液经 SDS-PAGE 分离，转至 NC 膜，封闭，与一抗 4°C 孵育过夜，然后与 HRP 标记二抗孵育，用 Image Quant LAS-4000 成像。 [1] Jess 自动化免疫印迹：细胞或组织裂解液与荧光预混液混合，95°C 变性 5 分钟，加载到 Jess 系统毛细管中。蛋白质分离、固定和免疫检测自动进行。使用化学发光检测，用 Compass Software 分析数据。 [1] 细胞增殖测定：细胞在 96 孔板中用系列稀释的化合物处理 7 天。加入 CellCounting-lite 试剂，测量发光，计算 IC50。 [1] |
| 动物实验 |
小鼠异种移植疗效研究：NOD/SCID 小鼠皮下接种 HCC1569 细胞。肿瘤体积达 100-200 mm³ 时，随机分组，口服 D16-M1P2 每日两次，共 21 天。每周两次测量肿瘤大小，计算肿瘤生长抑制率。 [1]
药效学分析：末次给药后 8 和 24 小时，收集肿瘤组织，裂解，通过 Jess 自动化免疫印迹分析 PKMYT1 和 pCDK1 水平。 [1] 药代动力学研究：CD-1 小鼠、SD 大鼠、Beagle 犬和食蟹猴分别单次静脉注射或口服 D16-M1P2。在多个时间点采集血样，处理得到血浆。 [1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在小鼠中，静脉注射后，D16-M1P2 显示中等清除率、分布容积和半衰期。口服给药后，Cmax、AUC0-24h 和口服生物利用度显示剂量比例暴露。 [1]
在大鼠、犬和猴子中，D16-M1P2 显示出良好的 PK 特征，低清除率和可接受至高口服生物利用度。 [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在小鼠异种移植疗效研究中，D16-M1P2 在 120 mg/kg 剂量下仅引起 2.8% 的体重下降，而 RP-6306 在 20 mg/kg 下引起 10.1% 的体重下降，表明耐受性改善和治疗窗口更宽。 [1]
D16-M1P2 表现出高激酶选择性，可能减轻多激酶抑制剂常见的脱靶毒性。 [1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
作用机制：D16-M1P2 具有双重机制：（1）通过 UPS 降解 PKMYT1（主要机制）；（2）通过其抑制剂部分直接抑制 PKMYT1 激酶活性。在发生“钩效应”的浓度下，直接抑制成为 pCDK1 抑制的主要机制。 [1]
选择性：在 403 种激酶的 KinomeScan 分析中，1000 nM 时 D16-M1P2 对仅 4 种激酶显示 >65% 抑制。D16-M1P2 在 HCC1569 细胞中高达 1 μM 时不降解 CRBN 新底物，表现出高特异性。定量蛋白质组学确认 PKMYT1 是下降最显著的蛋白质，无一致的脱靶降解。 [1] 化学稳定性：D16-M1P2 的 CRBN 配体在酸性条件下 24 小时后剩余 97%，无消旋；在模拟胃液中 12 小时后保持 87% 完整性。 [1] 合成路线：D16-M1P2 通过多步合成路线制备，涉及保护、Suzuki 偶联、手性 SFC 拆分和最终偶联反应。CRBN 结合部分的绝对立体化学基于文献和结合亲和力指定为 S-构型。 [1] |
| 分子式 |
C43H45FN10O4
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|---|---|
| 分子量 |
784.88
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| 外观&性状 |
Typically exists as solids at room temperature
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| 别名 |
PROTAC D16 M1P2; PROTAC D16-M1P2
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.2741 mL | 6.3704 mL | 12.7408 mL | |
| 5 mM | 0.2548 mL | 1.2741 mL | 2.5482 mL | |
| 10 mM | 0.1274 mL | 0.6370 mL | 1.2741 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
BMS-986463
PKMYT1-IN-10
Myt1-IN-6
Adavosertib-C3-NH-Boc
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