| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 靶点 |
Menin (menin-KMT2A interaction). [1][2]
In a homogeneous time-resolved fluorescence assay, the average IC50 of JNJ-75276617 against human menin was 0.1 ± 0.05 nM across 10 independent experiments. Against mouse menin, IC50 was 0.045 ± 0.002 nM. Against dog menin, IC50 was ≤0.066 ± 0.004 nM. [2] In a fluorescence polarization binding assay, the Ki values for JNJ-75276617 against wild-type menin, M327I mutant menin, and T349M mutant menin were 0.02 nM, 0.4 nM, and 3.8 nM, respectively. [2] (S)-Bleximenib targets the menin-MLL (mixed lineage leukemia) protein-protein interaction. Menin is a scaffold protein that binds to MLL fusion proteins and mutant NPM1, which are drivers of acute myeloid leukemia (AML). The menin-MLL interaction is essential for the leukemogenic activity of MLL fusion proteins and mutant NPM1. (S)-Bleximenib is the (S)-enantiomer of Bleximenib and serves as the less active isomer or negative control. In the MEIS1 mRNA expression assay (a pharmacodynamic marker of menin-MLL inhibition), (S)-Bleximenib shows an IC50 >1 microM, indicating significantly weaker activity compared to the active (R)-enantiomer. As a menin-MLL inhibitor, this compound functions by binding to menin and preventing its interaction with MLL fusion proteins, thereby disrupting the leukemic transcriptional program. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在浓度为 0.1 至 1.0 μM 时，JNJ-75276617 可降低 KMT2A-r MOLM-14 和 NPM1c OCI-AML3 细胞中 menin 与靶基因启动子（MEIS1、HOXA9、HOXA10）的结合，与 DMSO 对照组相比，结合倍数降低了 1.4 至 24.7 倍。[2] JNJ-75276617 可抑制 KMT2A-r 和 NPM1c AML 细胞系中 menin-KMT2A 靶基因（MEIS1、JMJD1C、FLT3、MEF2C、PBX3）的 mRNA 表达，并增加分化标志物（ITGAM/CD11b、MNDA）的表达。 [2]
JNJ-75276617在以下急性髓系白血病（AML）细胞系中显示出抗增殖活性：MOLM-14（IC50 <0.1 μM）、MOLM-13（IC50 <0.1 μM）、MV4-11（IC50 <0.1 μM）、THP-1（IC50 >15 μM）、EOL-1（IC50 = 0.116 μM）、OCI-AML3（IC50 = 0.045 μM），以及B细胞急性淋巴细胞白血病（B-ALL）RS4;11（IC50 = 0.040 μM）。浓度高达10 μM，持续7天，对正常外周血单核细胞无影响。 [2] JNJ-75276617 处理 7 天后，以剂量依赖的方式诱导 MOLM-14、OCI-AML3 和 RS4;11 细胞凋亡。[2] JNJ-75276617 处理 3 天和 7 天后，诱导 MOLM-14 和 OCI-AML3 细胞中 CD11b 和 CD14 分化标志物的表达。在 KMT2A-AF9 转导的小鼠骨髓细胞中，200 nM JNJ-75276617 处理 10 天后，中性粒细胞样形态增加（28.9% ± 2.6% vs DMSO 组 10.65% ± 1.35%）。 [2] JNJ-75276617在第7天和第14天对13例NPM1c原发性AML患者样本中的6例表现出抗增殖活性，并诱导CD11b表达。它还在KMT2A-r B-ALL原发性患者样本中显示出抗增殖作用和剂量依赖性细胞凋亡。[2] JNJ-75276617与吉瑞替尼在MOLM-13细胞中显示出协同抗增殖作用（p<0.001）。[2] JNJ-75276617与维奈托克或维奈托克联合阿扎胞苷在MOLM-13细胞中显示出协同抗增殖作用。 [2] JNJ-75276617在MEN1M327I和MEN1T349M突变型MV4-11细胞中保持了强效的抗增殖活性（IC50分别为22.6 nM和53.59 nM）。[2] JNJ-75276617处理（0.3 μM，4天）上调了原发性AML样本中HLA-A和HLA-DR的mRNA和蛋白表达，且该过程依赖于CIITA。[1] JNJ-75276617预处理（0.3 μM，4天）增强了原发性AML样本（尤其是携带NPM1c和DNMT3A突变的样本）在同种异体和自体移植条件下的T细胞介导的细胞毒性。[1] 体外实验表明，(S)-Bleximenib 在 MEIS1 mRNA 表达检测中 IC50 > 1 uM。MEIS1 是 menin-MLL 复合物的直接靶基因，可作为 menin-MLL 抑制剂活性的药效学标志物。该 IC50 值显著高于活性对映体 (R)-Bleximenib，后者通常 IC50 值在低纳摩尔范围内（例如 2-10 nM）。(S)-Bleximenib 可用作细胞实验中的阴性对照，以证明 Bleximenib 的抗白血病作用是由于特异性抑制 menin-MLL 而非脱靶效应所致。该化合物对 MLL 重排和 NPM1 突变型 AML 细胞系的增殖抑制活性较低。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在皮下MOLM-14 AML异种移植小鼠模型中，每日口服30、50和100 mg/kg的JNJ-75276617（草酸盐形式），持续5周，可诱导剂量依赖性的肿瘤消退，消退率分别为70%、97%和99%（p<0.0001）。在50和100 mg/kg剂量组，停药3个月后，10/10和9/9个肿瘤均未复发。[2] 在KMT2A-AF6 AML PDX模型（CBAM-68552）中，JNJ-75276617治疗显著延长了小鼠的生存期，所有剂量组的生存期均延长超过89%（p<0.05），同时减少了人CD45+白血病细胞的数量，并增加了分化标志物（CD11b、CD13、CD14）的表达。 [2]在NPM1c AML PDX模型（LEXFAM-2734和AM7577）中，30、50或100 mg/kg剂量的JNJ-75276617分别使中位生存期超过133天和147天（对照组：74天和53.5天），显著延长了生存期（>66%至>169%，p<0.0001）。[2]在KMT2A-AF4 B-ALL PDX模型（CBAB-62871）中，每日30和100 mg/kg剂量的JNJ-75276617分别使生存期延长了>48%和>160%（p=0.002），并降低了骨髓中的白血病负荷。 [2] 在播散性 MOLM-13 模型中，JNJ-75276617 (10 mg/kg) 联合阿扎胞苷 (2 mg/kg) 和维奈克拉 (100 mg/kg) 可使生存期延长 277% (p<0.0001)，优于阿扎胞苷+维奈克拉方案 (53% ILS)。[2] 在播散性 OCI-AML3 NPM1c 模型中，JNJ-75276617 联合阿扎胞苷和维奈克拉可获得优于阿扎胞苷+维奈克拉的生存期，但疗效主要由 JNJ-75276617 驱动。[2]
目前尚无关于(S)-Bleximenib单独使用的直接体内活性研究发表。活性(R)-对映体Bleximenib在MLL重排和NPM1突变型急性髓系白血病(AML)小鼠异种移植模型中显示出显著的体内疗效，可导致肿瘤消退并延长生存期。(S)-Bleximenib作为活性较低的异构体，在体内研究中用作阴性对照。预计其在小鼠模型中不具有显著的抗肿瘤活性。该化合物可用于药代动力学或药效学研究，以确认观察到的体内效应是由特异性抑制menin-MLL所致，而非化合物骨架的非特异性作用。 |
| 酶活实验 |
采用均相时间分辨荧光 (HTRF) 检测法定量分析了 JNJ-75276617 取代荧光素异硫氰酸酯 (FITC) 标记的 menin 结合基序 1 肽（源自 KMT2A）与铽标记的人、犬和小鼠 menin 结合的能力。将该化合物与 menin 和 FITC-MBM1 肽孵育，并使用酶标仪监测 TR-FRET 信号。在达到平衡的 300 或 420 分钟时报告抑制剂效力。使用 Prism 软件计算抑制率和效力。[2] 进行荧光偏振结合实验以评估 JNJ-75276617 与野生型、M327I 突变体和 T349M 突变体 menin 的结合情况。测量了 KMT2A 肽的剂量依赖性置换。[2]
目前尚无针对 (S)-Bleximenib 的特定酶/受体结合方案。对于 menin-MLL 结合研究，标准生化检测方法包括使用重组 menin 蛋白和荧光标记的 MLL 肽段进行荧光偏振 (FP) 或时间分辨荧光能量转移 (TR-FRET) 检测。将不同浓度的 (S)-Bleximenib (0.1-10000 nM) 与 menin 和标记的 MLL 肽段孵育。测量 FP 或 TR-FRET 信号，并根据竞争曲线计算 IC50 值。对于细胞靶标结合检测，采用 MEIS1 mRNA 表达检测。将 AML 细胞（例如，MLL 重排或 NPM1 突变细胞系）用不同浓度的 (S)-Bleximenib 处理 24-48 小时。提取 RNA，并通过 qRT-PCR 检测 MEIS1 mRNA 水平。根据剂量反应曲线计算 IC50 值。 (S)-Bleximenib 在此检测中 IC50 >1 uM。 |
| 细胞实验 |
为了筛选menin-KMT2A抑制剂，将冷冻保存的AML患者单核细胞解冻，重悬于含DNase I、MgSO4和肝素的培养基中，然后在含G-CSF、TPO和IL-3（均为20 ng/mL）的液体培养基中培养，或与MS5基质细胞共培养。细胞用DMSO或0.03、0.30和3.00 μM的JNJ-75276617处理14天，在第7天加入新鲜培养基和抑制剂。在第7天和第14天，用CD45-PECy7和CD117对细胞进行染色，并使用流式细胞仪测量荧光强度。 [1]
为检测细胞凋亡，将细胞用JNJ-75276617处理长达7天后，用膜联蛋白V和活/死细胞染料染色，然后进行流式细胞术分析。[2] 为评估细胞分化，用CD11b和CD14抗体对细胞进行染色，然后进行流式细胞术分析。用May-Grünwald Giemsa染色法评估KMT2A-AF9转导的小鼠骨髓细胞在用200 nM JNJ-75276617处理10天后的形态学变化。 [2] 对于T细胞毒性试验，将原代AML样本用0.3 μM JNJ-75276617预处理4天，然后洗涤并与来自健康供体的抗CD3/CD28活化T细胞以不同的效应细胞：靶细胞比例共培养3天。活细胞计数通过Annexin-V和Zombie NIR染色测定。[1] 对于自体T细胞毒性试验，从NPM1c AML患者样本中分选出CD45+原始细胞和CD3+ T细胞群，并将AML原始细胞与自身T细胞以固定比例在有或无0.3 μM JNJ-75276617存在的情况下进行培养。 [1] 对于染色质免疫沉淀 (ChIP)-qPCR，细胞经交联、裂解和超声处理。使用 Menin 抗体进行免疫沉淀，并定量分析其与靶基因启动子（MEIS1、HOXA9、HOXA10）的结合。[2] 对于 Quantigene 多重检测，细胞用 JNJ-75276617 或 DMSO 处理 48-72 小时后裂解。将靶标特异性探针与裂解液混合，并在 FLEXMAP 3D 系统上测量信号。通过剂量反应模型计算绝对 IC50 值。[2] (S)-Bleximenib 的体外细胞实验方案包括：将携带 MLL 重排（例如 MV4-11、MOLM-13、OCI-AML3）或 NPM1 突变（例如 OCI-AML3）的 AML 细胞系在含 10-20% FBS 的 RPMI-1640 培养基中，于 37℃、5% CO2 条件下培养。将细胞接种于 96 孔板（1-5×10⁴ 个细胞/孔），并用不同浓度的 (S)-Bleximenib（0.01-10000 nM）处理 72-120 小时。采用 MTT、CellTiter-Glo 或 CCK-8 法检测细胞活力。为检测 MEIS1 mRNA 的表达，将细胞接种于 6 孔板（5×10⁵ 个细胞/孔），并用 (S)-Bleximenib（0.1-10000 nM）处理 24 小时。提取 RNA，并使用特异性引物通过 qRT-PCR 定量 MEIS1 mRNA 水平。GAPDH 或 β-actin 作为管家基因。IC50 值由剂量反应曲线计算得出。活性 (R)-对映体用作阳性对照。所有实验均重复三次。 |
| 动物实验 |
本研究使用6至8周龄的免疫缺陷雌性小鼠进行异种移植研究。JNJ-75276617（草酸盐）以不同浓度（10、30、50、100 mg/kg）每日口服给药，持续4周。维奈托克（100 mg/kg）每日口服给药。阿扎胞苷（2 mg/kg）仅在第一周每日腹腔注射给药。所有实验均按照机构指南进行。[2]
在皮下MOLM-14模型中，测量肿瘤体积并评估肿瘤消退情况。在播散模型中，监测生存期，并通过流式细胞术检测骨髓中人CD45+细胞来评估白血病负荷。[2] (S)-Bleximenib 的体内研究采用标准动物实验方案，即在免疫缺陷小鼠（NSG 或裸鼠，6-8 周龄）中建立异种移植模型。将约 5×10⁶ 个 MLL 重排或 NPM1 突变的 AML 细胞皮下或静脉注射（播散性白血病模型采用尾静脉注射）。当肿瘤体积达到约 200 mm³（皮下）或确认白血病细胞植入（播散性）时，将小鼠随机分组（每组 n=5-10）。(S)-Bleximenib 以 10-50 mg/kg 的剂量口服或腹腔注射给药，制剂溶剂为 10% DMSO、40% PEG300、5% Tween 80 和 45% 生理盐水。给药频率可为每日一次。每隔2-3天测量一次皮下肿瘤体积。对于播散性模型，监测生存期，并在研究结束时通过流式细胞术（hCD45+细胞）评估血液和骨髓中的白血病负荷。(S)-Bleximenib预计几乎没有或完全没有抗白血病活性，作为阴性对照。活性(R)-对映体显示出显著的肿瘤消退和生存获益。所有实验程序均需获得机构动物伦理委员会的批准。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚未发表关于 (S)-Bleximenib 的直接药代动力学研究。据报道，活性 (R)-对映体 Bleximenib 在临床前动物模型中具有良好的口服生物利用度和药代动力学特性。(S)-Bleximenib 的计算性质包括分子式 C32H50FN7O3、分子量 599.78 g/mol 和预测的 logP 值约为 3.0-4.0，表明其具有中等至高的亲脂性。对于 Bleximenib（外消旋体或 (R)-对映体），已报道的药代动力学参数可能包括半衰期（小鼠体内为 2-4 小时）、中等清除率和口服生物利用度 >50%。(S)-对映体可能具有相似的理化性质，但清除率和分布容积可能有所不同。该化合物可溶于 DMSO，并可制成口服制剂。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
(S)-Bleximenib 的安全性数据有限。该化合物仅供研究使用，不得用于人体治疗。应遵循标准实验室安全预防措施：佩戴防护手套、护目镜和实验服。在通风良好的通风橱内操作。避免吸入、摄入以及与皮肤和眼睛接触。该化合物应储存在 -20°C，避光防潮。作为一种 menin-MLL 抑制剂，它可能对 MLL 重排和 NPM1 突变细胞具有活性，但 (S)-对映异构体的活性显著降低。尽管如此，仍应谨慎操作。本产品不得用于人体治疗。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
(S)-Bleximenib 是 Bleximenib (JNJ-75276617) 的对映异构体，在 menin-MLL 抑制剂研究中用作活性较低的异构体或阴性对照。Bleximenib 是一种强效、选择性强且口服生物利用度高的 menin-MLL 蛋白-蛋白相互作用抑制剂，该相互作用是伴有 MLL 重排或 NPM1 突变的急性髓系白血病 (AML) 的关键依赖性机制。(S)-对映异构体在 MEIS1 mRNA 表达检测中 IC50 > 1 μM，而活性 (R)-对映异构体的 IC50 在低纳摩尔范围内 (2-10 nM)。(S)-Bleximenib 用于 AML 的研究中，尤其用作对照，以区分特异性 menin-MLL 抑制和脱靶效应。目前尚无 (S)-Bleximenib 的临床试验数据。活性对映体Bleximenib目前正处于治疗MLL重排和NPM1突变型急性白血病的临床前或早期临床开发阶段。本产品仅供研究使用，尚未获准用于人体治疗。
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| 分子式 |
C32H50FN7O3
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|---|---|
| 分子量 |
599.78
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| 精确质量 |
599.3959
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| 元素分析 |
C, 64.08; H, 8.40; F, 3.17; N, 16.35; O, 8.00
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| CAS号 |
2654081-27-1
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| 相关CAS号 |
Bleximenib; Bleximenib oxalate; (S)-Bleximenib oxalate; 2866179-95-3 (oxalate); 2654081-35-1
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| 外观&性状 |
Colorless to light yellow Oil
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| SMILES |
CCN(C(C)C)C(=O)C1=C(C=CC(=C1)F)OC2=C(N=CN=N2)N3CCC4(C3)CN(C4)[C@@H](CCCN(C)CCOC)C(C)C.C(=O)(C(=O)O)O
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| 别名 |
(S)-JNJ-75276617; (S)-Menin-MLL inhibitor 24
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6673 mL | 8.3364 mL | 16.6728 mL | |
| 5 mM | 0.3335 mL | 1.6673 mL | 3.3346 mL | |
| 10 mM | 0.1667 mL | 0.8336 mL | 1.6673 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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