| 规格 | 价格 | |
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| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
FTO (fat mass and obesity-associated protein, an RNA m6A demethylase) – IC50 = 1.3 ± 0.2 μM (PAGE-based assay); IC50 = 43.7 ± 4.2 nM (cell-free dot blot assay); exhibits high selectivity over ALKBH5 and ALKBH3 (no inhibition at 50 μM) [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
FTO-IN-15（化合物 8a）（0-50 μM）是 FTO 的 2-OG 结合口袋的竞争性抑制剂，这由其在无细胞酶活性测定中随着 2-OG 浓度的增加而剂量依赖性逆转所证实[1]。FTO-IN-15 表现出强效的 FTO 抑制活性，在无细胞斑点印迹实验中 IC50 为 43.7 nM，在基于 PAGE 的去甲基化实验中 IC50 为 1.3 μM[1]。
化合物8a在基于PAGE的ssDNA去甲基化实验中抑制FTO去甲基酶活性，IC50为1.3 ± 0.2 μM；在使用m6A修饰的ssRNA底物的无细胞斑点杂交实验中，IC50为43.7 ± 4.2 nM。[1] 化合物8a对FTO显示出高于相关ALKBH家族成员ALKBH5和ALKBH3的高选择性，在基于PAGE的去甲基化实验中，50 μM浓度下未显示抑制。[1] 在差示扫描荧光法中，化合物8a浓度依赖性地稳定重组FTO ΔN31折叠，在80倍摩尔过量下产生1.9°C的ΔTm。[1] 与其单独片段相比，化合物8a表现出协同抑制活性：MA类似物活性中等（IC50 = 22.2 ± 5.8 μM），而富马酸无活性（IC50 > 50 μM）。[1] 前药酯8a-1（8a的混合乙基/甲基酯）在AML细胞系中表现出强效抗增殖活性，CCK-8活力测定中IC50值范围为2.3 ± 0.6 μM至5.5 ± 0.7 μM。在MOLM13细胞中，8a-1（8 μM）处理72小时后诱导显著生长抑制。[1] 在NB4细胞中，8a-1处理诱导剂量依赖性集落形成抑制并促进凋亡。[1] 8a-1处理增加了NB4和MOLM13细胞中的全局m6A水平。蛋白质印迹分析显示肿瘤抑制因子RARA和ASB2上调，致癌蛋白CEBPA和c-Myc下调。NB4细胞的qPCR分析证实ASB2表达增加，同时c-Myc和CEBPA转录本减少。在7种AML细胞系（NB4、MOLM13、HEL、MV4-11、OCI-AML3、NOMO-1、KG-1）中均观察到c-Myc蛋白下调。8a-1处理不改变FTO本身、ALKBH5或METTL3的蛋白水平。[1] 在基于2-OG竞争的PAGE实验中，8a的抑制可被2-OG剂量依赖性地逆转，证实了其与2-OG结合口袋的相互作用。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在雌性BALB/c裸鼠NB4异种移植模型中，每日腹腔注射8a-1（30或60 mg/kg，持续9天）以剂量依赖性方式显著抑制肿瘤生长。8a-1处理显著降低了最终肿瘤重量。切除肿瘤的分子分析显示肿瘤抑制因子（RARA、ASB2）上调、致癌蛋白（CEBPA、c-Myc）下调，以及斑点杂交法检测到全局RNA m6A修饰显著增加。未观察到体重下降或器官毒性（心、肝、脾、肺、肾）。[1]
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| 酶活实验 |
基于PAGE的去甲基化实验：使用含中央DpnII识别位点和m6A修饰的合成39核苷酸单链DNA底物。反应体系（50 mM Tris-HCl，pH 7.5）包含1 μM ssDNA底物、1 μM FTO ΔN31、300 μM 2-OG、280 μM (NH4)2Fe(SO4)2、2 mM L-抗坏血酸和20 μM测试化合物。室温反应2小时后热灭活。然后将底物与其互补DNA链退火以使DpnII切割。消化产物在15%天然聚丙烯酰胺凝胶上分离，用核酸染色剂可视化，并使用图像分析软件定量。[1]
无细胞斑点杂交实验：反应混合物（50 mM HEPES，pH 7.0）包含200 nM FTO、283 μM (NH4)2Fe(SO4)2、75 μM 2-OG、2 mM L-抗坏血酸、50 μg/mL BSA和不同浓度的抑制剂。室温预孵育10分钟后，加入m6A修饰的ssRNA底物（5'-AUUGUCA(m6A)CAGCAGC-3'）。反应在37°C进行3小时，然后用0.5 M EDTA终止。RNA在-80°C下乙醇沉淀过夜。等分样品通过Bio-Dot装置固定在膜上，然后进行UV交联。膜用抗m6A抗体孵育，然后用HRP偶联的二抗孵育。使用ECL底物显色m6A信号，并在化学发光成像系统上捕获。[1] 差示扫描荧光法：测定混合物（50 mM Tris-HCl，pH 7.5，150 mM NaCl）包含2 μM重组FTO ΔN31、测试化合物和SYPRO Orange染料。样品以0.5°C/min的速率从25°C加热至95°C进行热变性。连续记录610 nm处的荧光发射（激发：492 nm）。处理变性曲线以获得熔解温度（Tm）。[1] FTO/8j复合物结晶和结构测定：获得了FTO ΔN31与化合物8j的晶体。结构以2.3 Å分辨率解析（PDB：9VG4）。关键相互作用包括A环羧酸与Ser229的氢键、氯取代基与Thr92的氢键、酰胺NH与His232的氢键、富马酰胺羰基氧与His231的氢键。[1] 分子对接：MOE对接模拟表明8a完全占据底物和2-OG结合口袋，涉及与Ser229、Arg96、Asp233、Arg316和Ser318的氢键，以及与Thr92和Leu109的CH-π相互作用。[1] |
| 细胞实验 |
细胞热位移分析：NB4 AML细胞在预冷的RIPA缓冲液（含蛋白酶抑制剂混合物）中裂解。离心后，可溶性组分与50 μM 8a或溶媒对照（DMSO）在25°C孵育1小时。然后将处理后的裂解液等分，在递增温度（55-80°C）下进行热处理。离心后，通过免疫印迹分析剩余的可溶性蛋白。8a诱导内源性FTO的热稳定性，但不诱导ALKBH5。[1]
细胞活力测定（CCK-8）：AML细胞系（NB4、MOLM13、HEL、MV4-11、OCI-AML3、NOMO-1、KG-1）用不同浓度的前药8a-1处理72小时。IC50值范围为2.3 ± 0.6 μM至5.5 ± 0.7 μM。[1] 集落形成实验：NB4细胞用指定浓度的8a-1处理，观察到剂量依赖性的集落形成抑制。[1] 凋亡实验：8a-1处理的NB4细胞显示出凋亡促进（方法细节未明确）。[1] 蛋白质印迹分析：细胞或肿瘤组织裂解后，用抗RARA、ASB2、CEBPA、c-Myc、FTO、ALKBH5、METTL3的抗体和上样对照进行探测。8a-1处理上调RARA和ASB2，下调CEBPA和c-Myc，不影响FTO、ALKBH5或METTL3水平。[1] qPCR分析：8a-1处理的NB4细胞显示ASB2 mRNA增加，c-Myc和CEBPA转录本减少。[1] RNA m6A斑点杂交：从细胞或肿瘤中提取总RNA，固定在膜上，用抗m6A抗体探测。8a-1处理增加了全局m6A水平。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
母体二羧酸8a显示出较差的细胞渗透性（在AML细胞中10 μM浓度下抗增殖活性<10%抑制），通过前药酯化克服了这一限制。[1]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在NB4异种移植模型中，每日腹腔注射8a-1（30或60 mg/kg，持续9天）未引起体重下降或器官毒性（心、肝、脾、肺、肾重量未显示治疗相关异常）。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
化合物8a是通过甲氯芬那酸和2-OG模拟物的片段连接开发的底物/2-OG双竞争性FTO抑制剂。富马酸衍生物8a具有高效能（IC50 = 1.3 ± 0.2 μM），而其饱和类似物基于琥珀酸的8b完全失去抑制活性，突显了反式双键对有效模拟2-OG的关键作用。乙二胺连接基是最优的；延长至丙二胺或丁二胺导致活性完全丧失。8a中的3,5-二氯基序和8k中的氯/环丙基取代模式（IC50 = 0.6 ± 0.1 μM）被确定为FTO抑制的最佳选择。前药酯8a-1（混合乙基/甲基酯）被合成以克服二羧酸母体化合物的细胞渗透性差的问题。8a-1通过有效调节m6A表观转录组机制显示出强效抗白血病活性，代表了AML临床转化的有前景的先导化合物。[1]
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| 分子式 |
C20H17CL2N3O6
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|---|---|
| 分子量 |
466.27
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| 外观&性状 |
Typically exists as solids at room temperature
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1447 mL | 10.7234 mL | 21.4468 mL | |
| 5 mM | 0.4289 mL | 2.1447 mL | 4.2894 mL | |
| 10 mM | 0.2145 mL | 1.0723 mL | 2.1447 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
PROTAC FTO degrader 1
FTO ligand-1
3-Methylthymidine
FTO-IN-12
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