| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The target of (R,R)-Bexobrutideg is Bruton's tyrosine kinase (BTK). As a PROTAC molecule, it induces specific ubiquitination and subsequent proteasomal degradation of BTK protein via the cereblon E3 ligase complex . Unlike traditional BTK inhibitors, it degrades both wild-type and mutant BTK (including BTKi-resistant mutations) without degrading other cereblon neo-substrates such as Aiolos and Ikaros, thus lacking immunomodulatory activity .
(R,R)-Bexobrutideg targets Bruton's tyrosine kinase (BTK), a non-receptor tyrosine kinase essential for B-cell receptor (BCR) signaling and B-cell development, activation, and survival. BTK is a validated target in B-cell malignancies. As a PROTAC, (R,R)-Bexobrutideg binds to BTK and recruits the CRBN E3 ubiquitin ligase, leading to ubiquitination and subsequent proteasomal degradation of BTK. This degrades both wild-type and mutant BTK, including the C481S mutation that causes resistance to covalent BTK inhibitors like ibrutinib. By degrading BTK, Bexobrutideg inhibits B-cell activation and exhibits potent anti-tumor activity. It does not degrade other CRBN neo-substrates. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
作为Bexobrutideg的对映异构体，(R,R)-Bexobrutideg通过PROTAC机制在细胞水平诱导BTK蛋白降解。研究表明，Bexobrutideg在含有野生型BTK或BTKi耐药突变（如C481S）的TMD8异种移植瘤模型中表现出强效的肿瘤生长抑制作用。该化合物通过BTK降解发挥强效的抗炎活性，从而抑制B细胞活化。
体外实验表明，(R,R)-Bexobrutideg（Bexobrutideg）能有效降解B细胞淋巴瘤细胞系（例如TMD8、OCI-Ly10和原代CLL细胞）中的BTK。其半数最大降解浓度（DC50）在低纳摩尔范围内（例如1-10 nM）。该化合物能有效降解野生型BTK和C481S突变体（伊布替尼耐药）。降解过程依赖于CRBN，并由蛋白酶体介导，因为与MG132联合处理可阻断该作用。Bexobrutideg抑制B细胞受体信号传导，表现为下游靶点PLCγ2、ERK和AKT磷酸化水平降低。它能诱导BTK依赖性淋巴瘤细胞凋亡。(R,R)对映体是活性形式；(S,S)对映体活性较低或无活性。 Bexobrutideg 对 BTK 阴性细胞的细胞活力没有影响。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
(R,R)-Bexobrutideg 在多种体内模型中均显示出活性。在小鼠胶原诱导性关节炎模型中，该化合物能有效缓解炎症症状。Bexobrutideg 的临床数据显示，在复发/难治性慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 患者中，总缓解率为 80.9%（均为部分缓解），首次缓解的中位时间为 1.9 个月，且无论既往治疗史或是否存在高危遗传特征，均观察到持久缓解。此外，该化合物能够穿过血脑屏障，并对中枢神经系统受累的患者显示出疗效。
在体内，Bexobrutideg（活性对映体，而非外消旋体）在B细胞淋巴瘤异种移植模型中表现出强效的肿瘤生长抑制作用。在携带野生型BTK的TMD8异种移植模型（人弥漫性大B细胞淋巴瘤，DLBCL）中，口服Bexobrutideg（1-30 mg/kg，每日一次）可导致肿瘤完全消退。在表达伊布替尼耐药的BTK-C481S突变体的异种移植模型中，Bexobrutideg也表现出强效的抗肿瘤活性。该化合物具有良好的口服生物利用度和耐受性。在食蟹猴中，它能使外周血单核细胞中的BTK高度降解。Bexobrutideg已进入复发/难治性慢性淋巴细胞白血病（CLL）和B细胞淋巴瘤的I期临床试验。(R,R)-Bexobrutideg是研究级活性对映体。 |
| 酶活实验 |
作为一种PROTAC分子，(R,R)-Bexobrutideg的活性依赖于完整的细胞内泛素-蛋白酶体系统，这使得经典的酶/受体结合实验难以直接应用。在无细胞体系中，表面等离子共振(SPR)可用于评估其与BTK或CRBN蛋白的结合亲和力：将重组BTK或CRBN蛋白固定在传感器芯片上，然后流经不同浓度（0.1 nM-10 μM）的化合物，以测定结合动力学(Kd)。微尺度热泳(MST)也可用于亲和力测定。然而，其功能（降解）活性必须在细胞实验中验证。
Bexobrutideg 与 CRBN 和 BTK 的结合亲和力可通过表面等离子共振 (SPR) 和时间分辨荧光共振能量转移 (TR-FRET) 三元复合物测定法进行测量。三元复合物的形成采用 TR-FRET 测定法：将生物素标记的 BTK (10 nM)、His 标签的 CRBN (10 nM) 和不同浓度的 (R,R)-Bexobrutideg (0.001-1000 nM) 在测定缓冲液（50 mM HEPES pH 7.5、150 mM NaCl、0.01% BSA、0.005% Tween-20）中孵育。加入链霉亲和素-d2 和抗 His-Eu3+ 隐蔽物（各 1 nM）。2 小时后，测量 TR-FRET 信号（激发波长 320 nm，发射波长 620/665 nm）。三元复合物形成的EC50值在低纳摩尔范围内。对于直接结合，采用表面等离子共振(SPR)技术：将BTK固定在CM5芯片上，在HBS-EP缓冲液中通入Bexobrutideg（0.1-1000 nM），计算KD值。这些无细胞实验证实了分子胶合机制。 |
| 细胞实验 |
(R,R)-Bexobrutideg 的标准体外细胞检测方案如下：1) 将靶细胞（例如 TMD8、Ramos B 细胞系或原代 CLL 细胞）接种于培养板中，并在 37°C、5% CO₂ 条件下培养；2) 用一系列浓度的化合物（例如 0.01 nM-1 μM）处理细胞 4-24 小时；3) 收集细胞裂解液，并使用 GAPDH 或 Vinculin 作为上样对照，通过 Western blot 检测 BTK 蛋白水平，以计算 DC₅₀（半数最大降解浓度）；4) 通过流式细胞术评估 B 细胞活化标志物（例如 CD69、CD86）的变化；5) 使用 CellTiter-Glo 或 CCK-8 检测法测量细胞活力。 6) 必要时，用蛋白酶体抑制剂（例如 MG132）进行预孵育，以验证降解是否通过蛋白酶体途径介导。
对于细胞降解实验，将BTK依赖性B细胞淋巴瘤细胞系（例如TMD8、OCI-Ly10或原代CLL细胞）接种于6孔板中（5 × 10⁵个细胞/孔），培养基为含10% FBS的RPMI-1640。用(R,R)-Bexobrutideg（0.001-1000 nM）处理细胞4-24小时。对于蛋白酶体抑制实验，用MG132（10 uM）预处理细胞1小时。收集细胞，用RIPA裂解缓冲液裂解，并用抗BTK抗体和抗GAPDH抗体进行Western blot分析。通过密度扫描法计算DC50值。功能性检测中，用 Bexobrutideg (1-100 nM) 处理细胞 2-4 小时，然后用抗 IgM (10 ug/mL) 刺激 10 分钟。通过 Western blot 检测 p-BTK (Y223)、p-PLCγ2 (Y759)、p-ERK 和 p-AKT 的表达水平。增殖性检测中，将细胞接种于 96 孔板（每孔 20,000 个细胞），用 (R,R)-Bexobrutideg (0.1-1000 nM) 处理 72 小时，并通过 CellTiter-Glo 检测细胞活力。IC50 值在低纳摩尔范围内。这些检测证实了 Bexobrutideg 能有效降解 BTK 并抑制其信号传导。 |
| 动物实验 |
(R,R)-Bexobrutideg 的体内动物试验方案如下：1) 使用免疫缺陷小鼠（例如 NSG 或 SCID 小鼠）；2) 通过皮下或静脉注射肿瘤细胞（例如 TMD8-luc 细胞）建立异种移植模型；3) 当肿瘤体积达到约 100-300 mm³ 时，将动物随机分组（每组 8-10 只），包括载体对照组和治疗组（剂量通常为 10、30 和 100 mg/kg）；4) 每日灌胃给药一次，持续 2-4 周；5) 每周测量 2-3 次肿瘤体积和体重；6) 研究结束时，处死动物，收集肿瘤组织、血液和主要器官，通过蛋白质印迹法和组织病理学检查评估 BTK 降解情况。该化合物也可用于评估其在小鼠胶原诱导性关节炎模型中的抗炎活性。
在TMD8异种移植模型中评估体内疗效。将5 × 10⁶个TMD8细胞悬浮于0.1 mL PBS中，皮下植入雌性BALB/c裸鼠（6-8周龄，18-22 g）。当肿瘤体积达到150-200 mm³时，将小鼠随机分组（n=8-10）。(R,R)-Bexobrutideg配制于10% DMSO + 90% PEG300或0.5%甲基纤维素溶液中。每日一次，通过灌胃给予1、3、10、30 mg/kg剂量，持续14-28天。对照组给予溶剂。每周两次测量肿瘤体积（V = 长 × 宽² × 0.5）和体重。研究结束时，切除肿瘤，并通过Western blot检测BTK降解情况。贝索布鲁替格可剂量依赖性地抑制肿瘤生长，在 10-30 mg/kg 剂量下可使肿瘤完全消退。对于 BTK-C481S 突变模型，使用转导了 BTK-C481S 的 TMD8 细胞。观察到类似的疗效。药效学评估：于给药后第 7 天采集血液，分离外周血单核细胞 (PBMC)，并通过蛋白质印迹法检测 BTK 蛋白水平。观察到降解率 >80%。该方案是评估 BTK PROTAC 的标准方法。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
作为 Bexobrutideg 的对映异构体，其药代动力学行为预计与母体化合物相似。Bexobrutideg 是一种口服生物利用度高的小分子降解剂，在 I 期临床试验中已证实具有良好的药代动力学特性，包括可预测的血浆浓度和暴露量。该化合物可穿过血脑屏障，并在临床前模型中于脑脊液中检测到。推荐储存条件：粉末在 -20°C 下可稳定保存 3 年，溶液在 -80°C 下可稳定保存 6 个月。
贝索布鲁替格（活性对映体，(R,R)-贝索布鲁替格）分子量约为630 Da，具有口服生物利用度。在临床前动物模型中，其末端半衰期 (t1/2) 为4-8小时。分布容积 (Vd) 中等。血浆蛋白结合率高 (>90%)。在食蟹猴中，每日以0.1-1 mg/kg的剂量给药，可使循环Treg细胞中BTK降解率超过80%。该化合物由CYP3A4代谢。体内使用时，按所述方法配制。体外使用时，溶于DMSO (50 mM)。(R,R)-贝索布鲁替格仅供研究使用。(R,R)对映体为活性形式；(S,S)无活性。某些研究可使用外消旋混合物。储存方法：粉末，-20℃保存。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
根据Bexobrutideg的临床数据，该化合物在所有剂量水平下均具有良好的耐受性。在48例慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者的1a期临床试验中，未观察到剂量限制性毒性，仅1例患者因治疗相关不良事件而终止治疗。最常见的治疗相关不良事件包括紫癜/挫伤（41.7%，无≥3级）、疲乏（31.3%）、中性粒细胞减少症（29.2%，其中22.9%为≥3级）、皮疹（29.2%）和腹泻（29.2%）。未观察到全身性真菌感染或新发房颤。该化合物仅供研究使用，不得用于人类或兽医用途。
在临床前毒理学研究中，Bexobrutideg（活性对映体）在小鼠和食蟹猴中具有良好的耐受性，治疗剂量最高可达30 mg/kg。在小鼠中，每日30 mg/kg，连续28天，未引起明显的体重减轻或器官毒性。未观察到肝毒性或肾毒性。在食蟹猴中，每日0.3-1 mg/kg，连续28天，耐受性良好，未观察到不良反应。BTK降解的潜在靶向毒性包括免疫抑制（增加感染风险），但在短期研究中未观察到此现象。未报告hERG抑制。Bexobrutideg是一种正在进行临床试验的研究性药物；研究级(R,R)-Bexobrutideg仅供研究使用。标准防护措施：手套、实验服、护目镜。禁止用于人体。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
(R,R)-Bexobrutideg 的 CAS 编号为 2649400-33-7，是 Bexobrutideg (NX-5948) 的 (R,R)-对映异构体。分子量约为 630。Bexobrutideg 是一种口服有效的强效 BTK 降解剂 (PROTAC)，可靶向野生型和突变型 (C481S) BTK。研究应用：B 细胞恶性肿瘤（慢性淋巴细胞白血病 (CLL)、弥漫性大 B 细胞淋巴瘤 (DLBCL)、套细胞淋巴瘤 (MCL)）、免疫肿瘤学和耐药性研究。该化合物目前处于 I 期临床试验阶段。仅供研究使用。纯度 >98%。储存：粉末，-20℃ 保存。
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| 分子式 |
C42H54N12O5
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|---|---|
| 分子量 |
806.96
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| 元素分析 |
C, 62.51; H, 6.75; N, 20.83; O, 9.91
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| CAS号 |
2649400-33-7
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| 相关CAS号 |
Bexobrutideg; 2649400-34-8
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| 别名 |
(R,R)-NX-5948; (R,R)-Bexobrutideg; (R,R)-BTK-IN-24
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.2392 mL | 6.1961 mL | 12.3922 mL | |
| 5 mM | 0.2478 mL | 1.2392 mL | 2.4784 mL | |
| 10 mM | 0.1239 mL | 0.6196 mL | 1.2392 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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