Insulin β Chain Peptide (15-23)

别名: Insulin beta Chain Peptide (15-23); 247044-67-3; Insulin ; A Chain Peptide (15-23); Insulin ?? Chain Peptide (15-23);
目录号: V60389 纯度: =98.01%
胰岛素β链肽(15-23),也称为INS,是一种被胰岛相关T细胞识别的胰岛素衍生肽。
Insulin β Chain Peptide (15-23) CAS号: 247044-67-3
产品类别: Peptides | 多肽
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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纯度: =98.01%

产品描述
胰岛素β链肽(15-23),也称为INS,是一种被胰岛相关T细胞识别的胰岛素衍生肽。胰岛素 β 链肽 (15-23) 四聚体对 INS 反应性 CTL 克隆 G9C8 进行染色,但该四聚体和阴性对照 (NC) 四聚体 (TUM) 均未对 NOD 或 8.3-TCRαβ 转基因 NOD 小鼠脾 CD8+ T 细胞进行染色。
生物活性&实验参考方法
靶点
Antigenic epitopes; CD8 T-cells
体外研究 (In Vitro)
胰岛素β链肽(15-23)是一种高度致糖尿病的CD8 t细胞克隆,G9C8,在非肥胖糖尿病(NOD)小鼠中,对低亲和力胰岛素肽B15-23特异性,对该抗原有反应的细胞是最早浸润胰岛的细胞之一。我们旨在研究这些胰岛素反应性t细胞的选择、激活和发展致糖尿病能力。[3]
体内研究 (In Vivo)
尽管胸腺胰岛素表达,但CD8 t细胞选择良好,以CD8单阳性胸腺细胞为主。外周淋巴结t细胞表型为naïve (CD44lo, CD62Lhi),并向胰岛素B15-23肽和胰岛素增殖。这些细胞对胰岛素肽产生干扰素和肿瘤坏死因子α,并对胰岛素肽包被的靶标具有细胞毒性。在体内,TCR转基因小鼠发生胰岛素炎,但未发生自发性糖尿病。然而,免疫小鼠发生糖尿病,激活的转基因t细胞能够将糖尿病转移到免疫缺陷NOD。scid小鼠。 结论:自身免疫性CD8 t细胞对低亲和力胰岛素b链肽的反应逃避了胸腺阴性选择,需要在体内激活才能引起糖尿病。[3]
细胞实验
细胞增殖与细胞毒性试验[3]
5 ~ 8周龄G9Cα−/−的胰岛素反应性CD8 t细胞。NOD小鼠与骨髓来源的树突状细胞和B15-23肽或流感血凝素肽IYSTVASSL(对照)在RPMI完全培养基中共培养,观察肽反应。同样,用可溶性胰岛素或锁孔帽贝血青素(对照)作为抗原进行蛋白交叉呈递反应。从G9Cα−/−的脾细胞中纯化CD8 t细胞。NOD小鼠使用阳性选择珠(Miltenyi Biotec),纯度>95%。孵育3天后,用[3H]胸腺嘧啶脉冲14 h检测细胞增殖情况。
细胞毒性。[3]
5 ~ 8周龄G9Cα−/−纯化的CD8 t细胞。将NOD小鼠直接离体或预先用1 μg/ml胰岛素B15-23肽刺激24 h,收获后与104个51cr -铬酸钠(Amersham)标记的P815细胞和B15-23胰岛素肽以效应靶比(E:T)为10:1共培养16 h。特异性裂解计算为[(细胞毒性释放- min)/(max - min)] × 100%,其中最小释放(min)与自发裂解相对应。最大裂解与添加Triton-X100诱导的裂解相对应(max)。
动物实验
在本研究中,研究人员构建了一种T细胞受体(TCR)转基因小鼠,该小鼠表达G9C8胰岛素反应性CD8 T细胞克隆的克隆TCR Vα18/Vβ6受体。将这些小鼠与TCRCα-/-小鼠杂交,使大多数T细胞表达克隆型TCR,并研究了这些细胞的表型和功能。[3]
体内免疫。[3]
将50 μg B15-23肽与不同浓度的CpG 1826寡核苷酸(Coley Pharmaceuticals)腹腔注射到G9Cα−/−.NOD小鼠体内进行免疫。9至21天后,再次注射相同剂量。对照组分别注射 50 μg B15-23 肽或不同剂量的 CpG。
糖尿病的诊断。[3]
糖尿病的初步检测方法是检测糖尿,并通过血糖测量(>13.9 mmol/l/l)进行确认。
糖尿病的过继转移。[3]
从 G9Cα−/−.NOD 小鼠中分离纯化 5–7 × 10⁶ 个 CD8 T 细胞,这些细胞可以直接从体外取出,也可以用 CpG 成熟的骨髓来源树突状细胞和胰岛素 B15-23 肽预激活。将细胞洗涤后,重悬于 200 μl 生理盐水中,然后静脉注射到 6 周龄 NOD.scid 小鼠、3 周龄 NOD 小鼠和 6 周龄 NOD 小鼠体内。从6周龄幼鼠(10⁷)或已患糖尿病的小鼠(4–10 × 10⁶)中纯化的CD4 T细胞,经静脉注射转移至3至4周龄的G9Cα−/−.NOD小鼠。
胰岛素反应性TCR转基因小鼠的构建。[3]
通过从G9C8克隆T细胞(23)中分离TCR基因组DNA,构建了胰岛素特异性TCR转基因小鼠。此前研究表明,这些T细胞对胰岛素B链的15-23位氨基酸具有特异性反应性。纯化TCRα(Vα18S1 Jα18 Cα)和β(Vβ6S1 Dβ1.1 Jβ2.3 Cβ1)链DNA,并将其克隆到pTαcass和pTβcass载体中。将克隆构建体直接注射到NOD小鼠卵子中,生成独立的TCRα和TCRβ创始品系,然后将这些品系进行杂交,得到αβ TCR转基因小鼠(G9NOD)。分别生成了三个独立的TCRα创始品系(品系17、22和24)和三个独立的TCRβ创始品系(品系1、2和3),并将α品系17、22和24分别与β品系2和3进行杂交。各品系在选择和功能表型方面的结果相似(数据未显示),因此,选择TCRα品系22和TCRβ品系2用于所有后续研究。[3]
为了生成具有特定TCR库的αβ TCR转基因小鼠,将αβ TCR转基因小鼠与NOD.Cα−/−小鼠杂交,生成G9Cα−/−.NOD小鼠。 NOD.Cα−/−小鼠是通过将TCR.Cα−/−小鼠(B6/129背景)与NOD/Caj小鼠回交20代以上而获得的,该实验室由RS Sherwin(耶鲁大学)教授领导。G9RAG−/−.NOD小鼠是通过将αβ TCR转基因小鼠与NOD.RAG2−/−小鼠杂交而获得的,而NOD.RAG2−/−小鼠则是通过将RAG2−/−小鼠与NOD/Caj小鼠回交12代以上而获得的。为了获得G9Cα−/−.RIP-B7.1 NOD小鼠,首先将RIP-B7.1小鼠与NOD.Cα−/−小鼠回交10代,然后进行同系杂交以获得NOD.Cα−/−RIP-B7.1小鼠,最后再与G9Cα−/−.NOD小鼠杂交以获得G9Cα−/−.RIP-B7.1 NOD小鼠。 NOD.scid 小鼠被饲养在屏障房内的微隔离器或扫描容器中。
参考文献
[1]. Amrani A, et al. Progression of autoimmune diabetes driven by avidity maturation of a T-cell population. Nature. 2000;406(6797):739-742.
[2]. Takaki T, et al. Requirement for both H-2Db and H-2Kd for the induction of diabetes by the promiscuous CD8+ T cell clonotype AI4. J Immunol. 2004;173(4):2530-2541.
其他信息
由于未知原因,1 型糖尿病等自身免疫性疾病会在靶组织中单核细胞长期炎症后发生。本文研究表明,在非肥胖糖尿病 (NOD) 小鼠中,胰岛炎症发展为显性糖尿病是由一种携带 CD8 抗原的、占主导地位的胰岛 β 细胞特异性 T 淋巴细胞群的“亲和力成熟”驱动的。该 T 淋巴细胞群能够识别主要组织相容性复合体 (MHC) I 类分子 H-2Kd 背景下的两种相关肽(NRP 和 NRP-A7)。随着糖尿病前期 NOD 小鼠年龄的增长,其胰岛相关 CD8+ T 淋巴细胞中 NRP-A7 反应性细胞的数量不断增加,这些细胞与 NRP-A7/H-2Kd 四聚体的结合特异性、亲和力和半衰期均有所提高。用可溶性NRP-A7肽反复治疗糖尿病前期NOD小鼠,可通过选择性清除表达对肽-MHC结合具有最高亲和力和最低解离速率的T细胞受体的克隆型,从而抑制NRP-A7反应性CD8+ T细胞群的亲和力成熟。这抑制了对β细胞具有细胞毒性的T细胞的局部产生,并阻止了从严重胰岛炎到糖尿病的进展。我们得出结论,致病性T细胞群的亲和力成熟可能是自身免疫性疾病中良性炎症进展为显性疾病的关键事件。[1]
NOD小鼠是人类自身免疫性1型糖尿病的模型。CD8(+) T细胞对于破坏产生胰岛素的胰腺β细胞至关重要,而这正是该疾病的特征。 AI4 是一种致病性 CD8+ T 细胞克隆,分离自 5 周龄雌性 NOD 小鼠的胰岛,能够在缺乏 CD4+ T 细胞辅助的情况下诱发明显的糖尿病。近期利用 MHC 同源 NOD 小鼠的研究表明,AI4 TCR 具有显著的分子混杂性,因为该克隆型的选择可受多种 MHC 分子(包括一些 II 类变体)的影响。本研究旨在部分确定类似的分子混杂性是否也体现在成熟 AI4 CTL 的效应功能中。我们利用脾细胞和骨髓疾病转移模型以及体外胰岛杀伤实验,发现 AI4 对 β 细胞的有效识别和破坏需要 β 细胞同时表达 H-2Db 和 H-2Kd I 类 MHC 分子。我们使用重组肽库证实了 AI4 TCR 与 H-2Db 和 H-2Kd 相互作用的能力。这种方法还使我们能够确定一种AI4以H-2D(b)限制性方式识别的模拟表位肽。利用ELISPOT和模拟表位/H-2D(b)四聚体分析,我们首次证明AI4代表了糖尿病前期NOD小鼠胰岛浸润中一种易于检测的T细胞群。我们鉴定出的AI4样T细胞配体将有助于进一步表征和调控这种致病性且具有广泛抗原性的T细胞群。[2]
总之,我们已经证明,对胰岛素天然肽(自身免疫性糖尿病的主要自身抗原)有反应的CD8 T细胞在胸腺中选择,并在外周激活后可变得高度致病,从而导致糖尿病。这些T细胞在初始状态下是“无知的”,但这种状态很容易被刺激克服,包括直接激活或激活胰腺淋巴结或胰岛中的抗原呈递细胞。 CD4 T细胞可能发挥重要作用,目前正在对此进行研究。进一步的实验旨在鉴定内源性刺激因子,这些因子能够促进NOD小鼠体内幼稚且“无知”的G9细胞“转换”为具有强大β细胞破坏作用的效应细胞。我们的研究不仅为研究胰岛素特异性CD8 T细胞在自身免疫性糖尿病中的免疫致病作用提供了一个重要的模型,而且也为更好地设计基于胰岛素的免疫疗法提供了有益的参考。[3]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C44N12O13SH72
分子量
1009.18
精确质量
1008.5062
CAS号
247044-67-3
PubChem CID
91808033
序列
Leu-Tyr-Leu-Val-Cys-Gly-Glu-Arg-Gly; L-leucyl-L-tyrosyl-L-leucyl-L-valyl-L-cysteinyl-glycyl-L-alpha-glutamyl-L-arginyl-glycine; H-Leu-Tyr-Leu-Val-Cys-Gly-Glu-Arg-Gly-OH
短序列
LYLVCGERG; H-LYLVCGERG-OH
外观&性状
Typically exists as White to off-white solid at room temperature
LogP
-2.8
tPSA
419Ų
氢键供体(HBD)数目
15
氢键受体(HBA)数目
16
可旋转键数目(RBC)
32
重原子数目
70
分子复杂度/Complexity
1810
定义原子立体中心数目
7
SMILES
[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)(C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)O)CC1C=CC(O)=CC=1
InChi Key
CPSZWYPVFBXING-PVKJLKLCSA-N
InChi Code
InChI=1S/C44H72N12O13S/c1-22(2)16-27(45)37(63)53-31(18-25-9-11-26(57)12-10-25)41(67)54-30(17-23(3)4)42(68)56-36(24(5)6)43(69)55-32(21-70)39(65)49-19-33(58)51-29(13-14-34(59)60)40(66)52-28(8-7-15-48-44(46)47)38(64)50-20-35(61)62/h9-12,22-24,27-32,36,57,70H,7-8,13-21,45H2,1-6H3,(H,49,65)(H,50,64)(H,51,58)(H,52,66)(H,53,63)(H,54,67)(H,55,69)(H,56,68)(H,59,60)(H,61,62)(H4,46,47,48)/t27-,28-,29-,30-,31-,32-,36-/m0/s1
化学名
(4S)-4-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]acetyl]amino]-5-[[(2S)-1-(carboxymethylamino)-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid
别名
Insulin beta Chain Peptide (15-23); 247044-67-3; Insulin ; A Chain Peptide (15-23); Insulin ?? Chain Peptide (15-23);
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.9909 mL 4.9545 mL 9.9090 mL
5 mM 0.1982 mL 0.9909 mL 1.9818 mL
10 mM 0.0991 mL 0.4955 mL 0.9909 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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