β adrenergic receptor
The (2R) isomer does not significantly bind to or inhibit beta3-adrenergic receptors. It serves as an inactive isomer control for the active (S)-enantiomer SR59230A. SR59230A (the active enantiomer) is a potent, selective, and blood-brain barrier penetrating beta3-adrenergic receptor antagonist with IC50s of 40 nM (beta3), 408 nM (beta1), and 648 nM (beta2). (2R)-SR59230A is inactive at these receptors.

SR59230A（100 nM-50 μM；24 小时）以剂量依赖的方式降低 Neuro-2A、BE(2)C 和 SK-N-BE(2) NB 细胞系的细胞活力[3]。

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体外实验表明，(2R)-SR59230A 对 β-肾上腺素能受体亚型的抑制活性极低。与能强效拮抗 β3 受体（IC50 = 40 nM）的 (S)-对映体 SR59230A 不同，(2R) 异构体不会引起显著的阻断作用，因此可作为药理学研究中排除化学骨架相关非特异性效应的理想阴性对照。

MDMA（20 mg/kg）引起的高热逐渐发展，注射后130分钟达到最高体温1.8°C。SR59230A（0.5 mg/kg）可轻微但显著地减弱MDMA引起的逐渐升高的高热反应。SR59230A（5 mg/kg）则表明MDMA可引起显著且早期的低体温反应[4]。

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在体内，(2R)-SR59230A 用作对照，以验证 SR59230A 介导的生理效应的特异性。将其施用于动物体内，以区分 β3 受体介导的效应（例如，对棕色脂肪组织产热、食物摄入或心血管功能的影响）与脱靶效应。活性异构体 (SR59230A) 可穿过血脑屏障，并用于中枢神经系统研究。

SS-对映体3-(2-乙基苯氧基)-1-[(1S)-1,2,3,4-四氢萘-1-基氨基]-(2S)-2-丙醇草酸盐(SR 59230A)被认为是第一个β3-肾上腺素能受体拮抗剂。本研究表明，SR 59230A 与无活性的 RR 对映体 (SR 59483) 不同，在体外拮抗典型的 β 3-肾上腺素能反应，即 SR 58611A 乙基-[(7s)-7-[[(2R)-2-(3-氯苯基)-2-羟乙基]氨基]-5,6,7,8-四氢萘-2-基]氧乙酸盐酸盐-或 (-)-4-(3-叔丁基氨基-2-羟基丙氧基)苯并咪唑-2-酮 (CGP 12177) 刺激的大鼠棕色脂肪组织膜中 cAMP 的合成，其 pKB 值分别为 8.87 +/- 0.12 和 8.20 +/- 0.15 [1]。

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竞争性放射性配体结合 [4]
竞争性结合实验在 5 mL 聚丙烯试管中进行，每个样品重复两次。取 100 µL 膜样品，分别与 100 µL [3H]-哌唑嗪（2 nmol·L−1；比活度：85 Cinmol−1）、100 µL 未标记的测试配体（浓度范围为 1 nmol·L−1 至 0.1 mmol·L−1）、孵育缓冲液（溶剂）或酚妥拉明（10 µmol·L−1）混合。实验在 25°C 下进行 30 分钟。30 分钟孵育结束后，通过真空过滤分离结合的和游离的放射性配体。实验终止方法为：向所有试管中加入5 mL冰冷的洗涤缓冲液（Tris-HCl 50 mmol·L⁻¹，EDTA 5 mmol·L⁻¹，pH 7.4，4℃）。随后使用Brandell滤膜收集器，通过Whatman GF/C玻璃纤维滤膜快速过滤。滤膜和试管用5 mL冰冷的洗涤缓冲液洗涤四次。将每个滤膜放入标准聚丙烯闪烁瓶中，并向每个瓶中加入5 mL有机液体闪烁液。将闪烁瓶静置过夜，然后在LKB 1214型β计数器上进行计数。

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进行非细胞放射性配体结合试验以确认其无活性。将表达人β3-肾上腺素能受体的膜制备物与放射性标记的拮抗剂（例如[3H]-CGP12177）在不同浓度（0.1 nM-100 uM）的(2R)-SR59230A存在下孵育。通过过滤和液体闪烁计数法测量结合的放射性。与活性(S)-对映体相比，(2R)异构体的置换可忽略不计。

细胞系：三种不同的神经母细胞瘤 (NB) 细胞系，一种鼠源细胞系 (Neuro-2A) 和两种人源细胞系 (SK-N-BE(2)、BE(2)C)
浓度：100 nM、1 μM、5 μM、10 μM 和 50 μM
孵育时间：24 小时
结果：SR59230A 以剂量依赖的方式降低细胞活力，在浓度超过 1 μM 时，SR59230A 对 Neuro-2A 细胞的抑制作用显著；在浓度超过 5 μM 时，SR59230A 对 SK-N-BE(2) 和 BE(2)C 细胞的抑制作用显著。

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MTT 法 [3]
使用 MTT 法评估肿瘤细胞的活力。将 NB 细胞用不同浓度的 SR59230A 处理 24 小时，然后在 37 °C 下用 MTT 孵育 1 小时，最后用等体积的 DMSO 裂解细胞。使用分光光度计在 570 nm 处测定溶解染料的吸光度。

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神经球形成实验[3]
神经球形成实验中，将 24 孔板用 1.2% 的聚（2-羟乙基甲基丙烯酸酯）95% 乙醇溶液包被。然后，将细胞（5000 个/孔）接种于神经球基础培养基中，该培养基由 DMEM:F12 培养基、2% B27、1% N2、20 ng/ml FGF 和 20 ng/ml EGF 组成。24 小时后，分别用 1 μM SR59230A 和 1 μM BRL37344 单独处理细胞，或与 1 μM ABC294640 和 10 μM CYM5520 联合处理细胞。神经球形成后，将其破碎，并将细胞重新接种进行第二代（P2）。 7天后，对神经球进行计数，并使用ImageJ软件（美国国立卫生研究院）测量其直径大小。然后将神经球破碎并染色，用于流式细胞术分析。

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肾上腺素能受体信号传导研究使用表达重组β3-肾上腺素能受体（例如CHO细胞）的细胞。细胞预先与(2R)-SR59230A（0.1-100 uM）孵育30分钟，然后用β3-激动剂（例如BRL37344或CL316243）刺激。使用均相时间分辨荧光（HTRF）cAMP测定法或放射免疫测定法测量细胞内cAMP水平。(2R)异构体不阻断激动剂诱导的cAMP升高，证实其无活性。

雄性 C-57BL6J 野生型小鼠（22-35 g）
0.5 或 5 mg/kg
皮下注射；在皮下注射 MDMA（20 mg/kg）前 30 分钟给药。

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肿瘤同源模型 [3]
使用 4 周龄雌性 NCI A/JCr 小鼠。将 Neuro-2A 细胞皮下植入 A/J 受体小鼠体内，方法是将 1 × 10⁶ 个细胞悬浮于 100 µl PBS 中，注射到小鼠右侧腹部。当 Neuro-2A 细胞形成可触及的肿瘤（约 6 天）后，开始治疗。SR59230A 和载体组每天给药两次，ABC294640 和 CYM5520 组每天给药一次。SR59230A 以 10 mg/kg 的生理盐水通过腹腔注射 (ip) 给药； ABC294640 以 30 mg/kg 的剂量溶于 0.375% 聚山梨醇 80 的 PBS 溶液中，经口（po）给药；CYM5520 以 5 mg/kg 的剂量溶于 3.6% DMSO 的 PBS 溶液中，经腹腔（ip）给药。肿瘤生长速率通过游标卡尺测量肿瘤质量来评估，肿瘤体积计算公式为：体积 = [(长度 × 宽度)²/2]。小鼠在治疗 8 天后处死。动物皮下注射 β3-肾上腺素能受体拮抗剂 SR59230A（0.5 或 5 mg·kg⁻¹）或 SR59230A（5 mg·kg⁻¹）加哌唑嗪（0.1 mg·kg⁻¹）。拮抗剂或溶剂在皮下注射溶剂（1 mL·kg⁻¹）或 MDMA（20 mg·kg⁻¹）前 30 分钟给药。[4]

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在体内实验中，(2R)-SR59230A异构体用作对照。雄性Sprague-Dawley大鼠在代谢挑战前30分钟腹腔注射(2R)-SR59230A (1 mg/kg)或活性SR59230A (1 mg/kg)。监测体温、食物摄入量和运动活性。(2R)异构体处理组与溶剂对照组无显著差异，而活性SR59230A引起可测量的生理变化（例如，体温过低或食物摄入量减少），证实了β3受体介导效应的特异性。

(2R)-SR59230A 的分子量为 415.48 (C23H29NO6)。它可溶于 DMSO（31.25 mg/mL，75.21 mM）。(2R) 异构体的体外和体内药代动力学特性被认为与活性外消旋体相似，但缺乏活性。该化合物通常以粉末形式储存于 -20℃，可保存长达 3 年；或以溶液形式储存于 -80℃，可保存 6 个月。

目前尚无针对 (2R)-SR59230A 的毒性数据。作为一种用于研究的低剂量非活性异构体，在有效对照剂量下通常认为其无毒。应遵循处理精细化学品的标准实验室安全预防措施。本品不适用于人体，且尚未进行人体毒性研究。

[1]. Functional studies of the first selective beta 3-adrenergic receptor antagonist SR 59230A in rat brown adipocytes.Mol Pharmacol. 1996 Jan;49(1):7-14.

[2]. Involvement of β3-adrenergic receptors in the control of food intake in rats.Braz J Med Biol Res. 2011 Nov;44(11):1141-7.

[3]. β3-adrenoreceptor blockade reduces tumor growth and increases neuronal differentiation in neuroblastoma via SK2/S1P2 modulation.Oncogene. 2020 Jan;39(2):368-384.

[4]. Role of alpha 1- and beta 3-adrenoceptors in the modulation by SR59230A of the effects of MDMA on body temperature in the mouse. Br J Pharmacol. 2009 Sep;158(1):259-66.

SS-对映体 3-(2-乙基苯氧基)-1-[(1S)-1,2,3,4-四氢萘-1-基氨基]-(2S)-2-丙醇草酸盐 (SR 59230A) 被认为是第一个β3-肾上腺素能受体拮抗剂。本研究表明，SR 59230A 与无活性的 RR 对映体 (SR 59483) 不同，在体外拮抗典型的 β-肾上腺素能反应，即 SR 58611A 乙基-[(7S)-7-[[(2R)-2-(3-氯苯基)-2-羟乙基]氨基]-5,6,7,8-四氢萘-2-基]氧乙酸盐酸盐-或 (-)-4-(3-叔丁基氨基-2-羟基丙氧基)苯并咪唑-2-酮 (CGP 12177) 刺激的大鼠棕色脂肪组织膜中 cAMP 的合成，其 pKB 值分别为 8.87 +/- 0.12 和 8.20 +/- 0.15。此外，SR 59230A 不拮抗 fosclerin 诱导的大鼠肩胛间棕色脂肪组织中 cAMP 的积累。与选择性 β1 和 β2 肾上腺素能受体拮抗剂 (+/-)[2-(3-氨基甲酰基-4-羟基苯氧基)-乙基氨基]-3-[4-(1-甲基-4-三氟甲基-2-咪唑基)苯氧基]-2-丙醇和赤式-(+/-)-1-(7-甲基茚满-4-氧基)-3-异丙基氨基丁酸-2-醇盐酸盐不同，SR 59230A 不拮抗 (-)-异丙肾上腺素或去甲肾上腺素 (NE) 在富含 β1 或 β2 肾上腺素能受体的大鼠脑区（如额叶皮层和小脑）中诱导的 cAMP 生成。此外，在增殖的棕色脂肪细胞中，β1-肾上腺素能受体是唯一与cAMP生成偶联的β-肾上腺素能受体亚型；SR 59230A不影响NE诱导的cAMP生成，而CGP 12177则有影响。在融合的棕色脂肪细胞中，β3-肾上腺素能受体是与腺苷酸环化酶偶联的功能性β-肾上腺素能受体亚型；SR 59230A拮抗NE诱导的cAMP积累和甘油释放，但不影响基础水平；而CGP 12177本身刺激cAMP积累和甘油释放，但不改变NE诱导的这两个参数的增加。最后，SR 59230A 以浓度依赖的方式拮抗融合棕色脂肪细胞中去甲肾上腺素 (NE) 刺激的解偶联蛋白基因的合成，这主要归因于其对 β3-肾上腺素能受体的选择性刺激。这些结果表明，这种新型选择性 β3-肾上腺素能受体拮抗剂可以极大地增强对 β3-肾上腺素能受体的功能表征。[1]

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本研究检测了成年雄性 Wistar 大鼠（200-350 g，每组 6 只）禁食 24 小时后，经脑室内 (icv) 注射选择性 β3-肾上腺素能受体激动剂（BRL37344，2 和 20 nmol）或拮抗剂（SR59230A，10 和 50 nmol）后食物摄入量的变化。为了确定 BRL37344 在食物摄入方面的选择性以及 SR59230A 在风险评估 (RA) 行为方面的选择性，动物预先接受脑室内注射生理盐水 (SAL) 或 SR59230A (50 nmol)，随后注射 BRL37344 (20 nmol) 或 SAL。最高剂量的 BRL37344 (N = 7) 在给药后 1 小时内降低了食物摄入量（SAL 处理组为 6.4 ± 0.5 g，药物处理组为 4.2 ± 0.8 g）。尽管两种剂量的SR59230A均未影响食物摄入量（10 nmol组为5.1 ± 1.1 g，50 nmol组为6.0 ± 1.8 g），但该治疗降低了复发性呼吸骤停（RA）的频率（30分钟内的次数）（生理盐水组为4 ± 2次，10 nmol SR59230A组为1 ± 1次，50 nmol组为0.5 ± 1次），而RA频率是与焦虑相关的行为指标。SR59230A预处理（7.0 ± 0.5 g）消除了BRL37344（3.6 ± 0.9 g）引起的食物摄入量减少，而BRL37344抑制了SR59230A引起的RA频率降低。这些结果表明，BRL37344引起的食物摄入量减少是由中枢神经系统中的β3-肾上腺素能受体选择性介导的。此外，它们还提出这些受体参与焦虑的调节。[2] 神经母细胞瘤（NB）是儿童最常见的颅外实体瘤。它表现出很强的临床异质性，尤其是在诊断时的表现和治疗反应方面，这通常取决于癌细胞的分化/干性。NB患者血液和尿液中儿茶酚胺水平升高很常见，这表明了解肾上腺素能系统对于更好地理解这种癌症至关重要。β3-肾上腺素能受体（β3-AR）是肾上腺素能受体家族中最新发现的成员，与多种肿瘤疾病相关，例如黑色素瘤。多项研究表明，生物活性脂质鞘氨醇-1-磷酸（S1P）的代谢和信号传导失调与多种病理疾病相关，包括癌症。然而，S1P是否对神经母细胞瘤（NB）的进展和侵袭性至关重要仍有待研究。本文提供的实验证据表明，β3-肾上腺素能受体（β3-AR）在人类神经母细胞瘤标本和细胞系中均有表达，并通过与鞘氨醇激酶2（SK2）/鞘氨醇-1-磷酸受体2（S1P2）轴的功能性串扰，在NB细胞增殖激活和干性/分化调控中发挥关键作用。SR59230A通过特异性阻断SK2/S1P2信号通路，对β3-AR产生特异性拮抗作用，从而在体内外抑制NB细胞生长和肿瘤进展，进而促进细胞从干细胞状态向分化状态转变。 [3]

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背景与目的：我们研究了β(3)-肾上腺素能受体拮抗剂1-(2-乙基苯氧基)-3-[[(1S)-1,2,3,4-四氢-1-萘基]氨基]-(2S)-2-丙醇盐酸盐(SR59230A)对清醒小鼠MDMA诱导的高热的影响，以及α(1)-肾上腺素能受体拮抗作用是否参与其中。方法：在麻醉状态下，将温度探针植入小鼠体内，并使其恢复2周。在注射赋形剂或测试拮抗剂30分钟后，皮下注射MDMA（20 mg/kg），并通过遥测技术监测其对体温的影响。主要结果：注射赋形剂后，MDMA 诱导了缓慢发展的体温升高，在注射后 130 分钟达到最大升高 1.8°C。低浓度 SR59230A (0.5 mg/kg) 可轻微但显著地减弱 MDMA 诱导的缓慢发展的体温升高。高浓度 SR59230A (5 mg/kg) 可引起 MDMA 诱导的显著且明显的早期体温过低反应，其作用类似于 α1-肾上腺素能受体拮抗剂哌唑嗪。功能和配体结合研究揭示了 SR59230A 对 α1-肾上腺素能受体的作用。结论和意义：高浓度的1-(2-乙基苯氧基)-3-[[(1S)-1,2,3,4-四氢-1-萘基]氨基]-(2S)-2-丙醇盐酸盐通过两种途径调节MDMA在小鼠体内的产热效应：首先，阻断早期α(1)-肾上腺素能受体介导的成分，导致体温过低；其次，轻微减弱晚期产热成分，该成分可能由β(3)-肾上腺素能受体介导（即使在低浓度SR59230A下也能观察到这种现象）。因此，SR59230A调节MDMA产热效应的主要机制是通过拮抗α(1)-肾上腺素能受体。[4]

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(2R)-SR59230A 是 β3-肾上腺素能受体拮抗剂 SR59230A 的 2R 对映异构体。它作为重要的阴性对照，用于确认观察到的 SR59230A 的生物活性是由 β3-肾上腺素能受体拮抗作用引起的，而非非特异性效应。它仅供研究使用，目前尚无任何获批的治疗适应症或临床应用。

C23H29NO6

415.4795

415.199

C, 66.49; H, 7.04; N, 3.37; O, 23.10

1932675-95-0

SR59230A;174689-39-5; (2R)-SR59230A; 1932675-95-0; SR59230A hydrochloride; 1135278-41-9; 174689-38-4

White to off-white solid powder

116Ų

CCC1=CC=CC=C1OC[C@@H](CN[C@H]2CCCC3=CC=CC=C23)O.C(=O)(C(=O)O)O

XTBQNQMNFXNGLR-VDWUQFQWSA-N

InChI=1S/C21H27NO2.C2H2O4/c1-2-16-8-4-6-13-21(16)24-15-18(23)14-22-20-12-7-10-17-9-3-5-11-19(17)20;3-1(4)2(5)6/h3-6,8-9,11,13,18,20,22-23H,2,7,10,12,14-15H2,1H3;(H,3,4)(H,5,6)/t18-,20+;/m1./s1

(2R)-1-(2-ethylphenoxy)-3-[[(1S)-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-1-yl]amino]propan-2-ol;oxalic acid

(2R)-SR59230A; (2R)-SR-59230A; 1932675-95-0;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 31.25 mg/mL (75.21 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。