β adrenergic receptor

SR59230A（100 nM-50 μM；24 小时）能够以剂量依赖性方式降低 Neuro-2A、BE(2)C 和 SK-N-BE(2) NB 细胞系的细胞活力[3]。细胞活力测定[3] 细胞系：三种不同的神经母细胞瘤 (NB) 细胞系，一种小鼠 (Neuro-2A) 和两种人类 (SK-N-BE(2)、BE(2)C) 浓度：100 nM，1 μM、5 μM、10 μM 和 50 μM 孵育时间：24 小时 结果：细胞活力以剂量依赖性方式降低，浓度限制超过 1 µM 对 Neuro-2A 细胞和 5 µM 对 SK-N 细胞有显着影响-BE(2) 和 BE(2)C)。

MDMA (20 mg/kg) 会产生缓慢发展的体温过高，注射后 130 分钟达到最高 1.8°C。 SR59230A (0.5 mg/kg) 对 MDMA 缓慢发展的高热产生小幅但显着的减弱作用。 SR59230A (5 mg/kg) 显示出对 MDMA 的显着且显着的早期低温反应[4]。动物模型：雄性C-57BL6J野生型小鼠（22-35克）[4] 剂量：0.5或5 mg/kg 给药方式：皮下注射；在皮下注射 MDMA (20 mg/kg) 前 30 分钟给药。结果：MDMA对温度的调节作用涉及α1-肾上腺素受体拮抗作用。

SS对映体3-（2-乙基苯氧基）-1-[（1S）-1,2,3,4-四氢决萘-1-基氨基]-（2S）-2-丙醇草酸盐（SR 59230A）被认为是第一种β3-肾上腺素能受体拮抗剂。本工作表明，SR 59230A不同于其非活性RR对映体（SR 59483），在体外拮抗典型的β3-肾上腺素能反应，即SR 58611A，乙基-[（7s）-7-[[（2R）-2-（3-氯苯基）-2-羟基乙基]氨基]-5,6,7,8-四氢萘-2-基]氧乙酸盐盐酸盐或（-）-4-（3-叔丁基氨基-2-羟基丙氧基）苯并咪唑-2-酮（CGP 12177）刺激的大鼠棕色脂肪组织膜中cAMP的合成，pKB值分别为8.87+/-0.12和8.20+/-0.15[1]。

---

竞争性放射性配体结合[4]
竞争结合试验在5ml聚丙烯试管中进行，一式两份。100µL膜等分液与100µL [3H]-prazosin (2 nmol·L−1；比活性：85 Cinmol−1)，100µL未标记的测试配体（浓度从1 nmol·L−1到0.1 mmol·L−1），孵育缓冲液（载体）或酚托拉明（10µmol·L−1）。实验在25℃下进行30分钟。在30分钟的孵育期后，用真空过滤分离结合的和游离的放射性配体。在所有试管中加入5 mL冷水洗涤缓冲液（Tris-HCl 50 mmol·L−1,EDTA 5 mmol·L−1:pH 7.4, 4oC），终止实验。这是随后通过Whatman GF/C玻璃纤维过滤器使用布兰德尔呼叫收割机快速过滤。然后用5毫升冷水洗涤缓冲液洗涤过滤器和试管四次。每个过滤器被放置在一个标准的聚丙烯闪烁瓶和5毫升有机液体闪烁介质添加到每个瓶。小瓶放置过夜，然后在LKB 1214机架Beta计数器上计数。

细胞系：三种不同的神经母细胞瘤 (NB) 细胞系，一种小鼠 (Neuro-2A) 和两种人类 (SK-N-BE(2)、BE(2)C) 浓度：100 nM、1 μM、5 μM、10 μM 和 50 μM 孵育时间：24 小时 结果：细胞活力以剂量依赖性方式降低，浓度限制超过 1 µM 对 Neuro-2A 细胞和 5 µM 对 SK-N-BE(2) 和BE(2)C)。

---

MTT试验[3]
使用MTT法评估肿瘤细胞的活力。用不同浓度的SR59230A处理NB细胞24 h，然后在37℃MTT中保持1 h，然后用等体积的DMSO裂解。用分光光度计在570nm处测定溶解染料的吸光度。

---

Neurosphere试验[3]
对于神经球形成实验，24孔板涂有1.2%用95%乙醇稀释的聚（2-羟乙基甲基丙烯酸酯）。然后，将细胞（5.000/孔）接种于由DMEM:F12添加2% B27, 1% N2, 20 ng/ml FGF和20 ng/ml EGF组成的Neurosphere基本培养基中。24 h后，分别用1 μM SR59230A和1 μM BRL37344单独或与1 μM ABC294640和10 μM CYM5520联合作用细胞。一旦形成，球体被破坏，细胞重新镀上第二次传代（P2）。7天后，使用ImageJ软件（美国国立卫生研究院）计数神经球并测量直径大小。然后破坏神经球并染色进行流式细胞术分析。

雄性 C-57BL6J 野生型小鼠（22-35 g）
0.5 或 5 mg/kg
皮下注射；在皮下注射 MDMA（20 mg/kg）前 30 分钟给药。

---

肿瘤同源模型 [3]
使用 4 周龄雌性 NCI A/JCr 小鼠。将 Neuro-2A 细胞皮下植入 A/J 受体小鼠体内，方法是将 1 × 10⁶ 个细胞悬浮于 100 µl PBS 中，注射到小鼠右侧腹部。当 Neuro-2A 细胞形成可触及的肿瘤（约 6 天）后，开始治疗。SR59230A 和载体组每天给药两次，ABC294640 和 CYM5520 组每天给药一次。SR59230A 以 10 mg/kg 的生理盐水通过腹腔注射 (ip) 给药； ABC294640 以 30 mg/kg 的剂量溶于 0.375% 聚山梨醇 80 的 PBS 溶液中，经口（po）给药；CYM5520 以 5 mg/kg 的剂量溶于 3.6% DMSO 的 PBS 溶液中，经腹腔（ip）给药。肿瘤生长速率通过游标卡尺测量肿瘤质量来评估，肿瘤体积计算公式为：体积 = [(长度 × 宽度)²/2]。小鼠在治疗 8 天后处死。动物皮下注射 β3-肾上腺素能受体拮抗剂 SR59230A（0.5 或 5 mg·kg⁻¹）或 SR59230A（5 mg·kg⁻¹）加哌唑嗪（0.1 mg·kg⁻¹）。拮抗剂或溶剂在皮下注射溶剂（1 mL·kg⁻¹）或 MDMA（20 mg·kg⁻¹）前 30 分钟给药。[4]

[1]. Functional studies of the first selective beta 3-adrenergic receptor antagonist SR 59230A in rat brown adipocytes.Mol Pharmacol. 1996 Jan;49(1):7-14.

[2]. Involvement of β3-adrenergic receptors in the control of food intake in rats.Braz J Med Biol Res. 2011 Nov;44(11):1141-7.

[3]. β3-adrenoreceptor blockade reduces tumor growth and increases neuronal differentiation in neuroblastoma via SK2/S1P2 modulation.Oncogene. 2020 Jan;39(2):368-384.

[4]. Role of alpha 1- and beta 3-adrenoceptors in the modulation by SR59230A of the effects of MDMA on body temperature in the mouse. Br J Pharmacol. 2009 Sep;158(1):259-66.

SS-对映体3-(2-乙基苯氧基)-1-[(1S)-1,2,3,4-四氢萘-1-基氨基]-(2S)-2-丙醇草酸盐(SR 59230A)被认为是第一个β3-肾上腺素能受体拮抗剂。本研究表明，SR 59230A 与无活性的 RR 对映体 (SR 59483) 不同，在体外拮抗典型的 β 3-肾上腺素能反应，即 SR 58611A 乙基-[(7s)-7-[[(2R)-2-(3-氯苯基)-2-羟乙基]氨基]-5,6,7,8-四氢萘-2-基]氧乙酸盐酸盐-或 (-)-4-(3-叔丁基氨基-2-羟基丙氧基)苯并咪唑-2-酮 (CGP 12177) 刺激的大鼠棕色脂肪组织膜中 cAMP 的合成，其 pKB 值分别为 8.87 +/- 0.12 和 8.20 +/- 0.15。此外，SR 59230A 对福斯克林诱导的大鼠肩胛间棕色脂肪组织中 cAMP 的积累没有拮抗作用。与选择性 β1 和 β2 肾上腺素受体拮抗剂 (+/-)[2-(3-氨基甲酰基-4-羟基苯氧基)-乙基氨基]-3-[4-(1-甲基-4-三氟甲基-2-咪唑基)-苯氧基]-2-丙醇和赤式-(+/-)-1-(7-甲基茚满-4-氧基)-3-异丙基氨基丁酸-2-醇盐酸盐不同，SR 59230A 不能拮抗 (-)-异丙肾上腺素或去甲肾上腺素 (NE) 在富含 β1 或 β2 肾上腺素受体的大鼠脑区（如额叶皮层和小脑）中诱导的 cAMP 生成。此外，在增殖的棕色脂肪细胞中，β1-肾上腺素能受体是唯一与cAMP生成偶联的β-肾上腺素能亚型，SR 59230A不影响NE诱导的cAMP生成，而CGP 12177则有影响。在融合的棕色脂肪细胞中，β3-肾上腺素能受体是与腺苷酸环化酶偶联的功能性β-肾上腺素能亚型，SR 59230A拮抗NE诱导的cAMP积累和甘油释放，但不影响其基础值；而CGP 12177本身可刺激cAMP积累和甘油释放，但并不改变NE诱导的这两个参数的增加。最后，SR 59230A 以浓度依赖的方式拮抗了融合棕色脂肪细胞中去甲肾上腺素（NE）刺激的解偶联蛋白基因的合成，这主要被认为是选择性刺激β3-肾上腺素能受体的结果。这些结果表明，这种新型选择性β3-肾上腺素能受体拮抗剂可以极大地促进β3-肾上腺素能受体的功能表征。[1]

---

本研究检测了在禁食24小时的大鼠（成年雄性Wistar大鼠，200-350 g，每组6只）中，脑室内（icv）注射β3-肾上腺素能受体选择性激动剂（BRL37344，2和20 nmol）或拮抗剂（SR59230A，10和50 nmol）后引起的食物摄入量变化。为了确定BRL37344对食物摄入量的影响选择性，以及SR59230A对风险评估（RA）行为的影响选择性，动物预先接受脑室内注射生理盐水（SAL）或SR59230A（50 nmol）处理，随后再接受BRL37344（20 nmol）或SAL处理。最高剂量的BRL37344（N = 7）在给药后1小时降低了食物摄入量（SAL处理组为6.4 ± 0.5 g，药物处理组为4.2 ± 0.8 g）。虽然两种剂量的SR59230A均未影响食物摄入量（10 nmol组为5.1 ± 1.1 g，50 nmol组为6.0 ± 1.8 g），但该治疗降低了RA频率（30分钟内次数）（生理盐水组为4 ± 2，SR59230A 10 nmol组为1 ± 1，50 nmol组为0.5 ± 1），RA频率是与焦虑相关的行为学指标。SR59230A预处理（7.0 ± 0.5 g）消除了BRL37344（3.6 ± 0.9 g）引起的摄食减少，而BRL37344抑制了SR59230A引起的RA频率降低。这些结果表明，BRL37344引起的摄食减少是由中枢神经系统内的β3-肾上腺素能受体选择性介导的。此外，他们还提出这些受体参与焦虑的调控。[2]神经母细胞瘤（NB）是颅外儿童实体瘤中最常见的类型。它表现出极强的临床异质性，尤其是在诊断时的表现和治疗反应方面，这通常取决于癌细胞的分化/干性。NB患者血液和尿液中儿茶酚胺水平升高的情况很常见，这表明解析肾上腺素能系统对于更好地理解这种癌症至关重要。β3-肾上腺素能受体（β3-AR）是肾上腺素能受体家族中最新发现的成员，与多种肿瘤疾病相关，例如黑色素瘤。多项研究表明，生物活性脂质鞘氨醇-1-磷酸（S1P）的代谢和信号传导失调与包括癌症在内的多种病理疾病有关。然而，S1P是否对NB的进展和侵袭性至关重要，目前仍在研究中。本文提供的实验证据表明，β3-肾上腺素能受体（β3-AR）在神经母细胞瘤（NB）的人类标本和细胞系中均有表达，并且通过与鞘氨醇激酶2（SK2）/鞘氨醇-1P受体2（S1P2）轴的功能性串扰，在NB细胞增殖激活和干性/分化调控中发挥关键作用。SR59230A对β3-AR的特异性拮抗作用，通过特异性阻断SK2/S1P2信号通路，在体内外均能抑制NB细胞的生长和肿瘤进展，从而促进细胞从干性状态向分化状态转变。 [3]

---

背景和目的：我们研究了β(3)-肾上腺素受体拮抗剂1-(2-乙基苯氧基)-3-[[(1S)-1,2,3,4-四氢-1-萘基]氨基]-(2S)-2-丙醇盐酸盐(SR59230A)对清醒小鼠亚甲二氧基甲基苯丙胺(MDMA)诱导的高热的影响，以及α(1)-肾上腺素受体拮抗作用是否参与其中。实验方法：在麻醉状态下，将温度探针植入小鼠体内，并使其恢复2周。在注射赋形剂或测试拮抗剂 30 分钟后，皮下注射 MDMA (20 mg/kg)，并通过遥测技术监测其对体温的影响。主要结果：注射赋形剂后，MDMA 引起缓慢发展的体温过高，在注射后 130 分钟达到最大升高 1.8°C。低浓度 SR59230A (0.5 mg/kg) 可轻微但显著地减弱 MDMA 引起的缓慢发展的体温过高。高浓度 SR59230A (5 mg/kg) 则引起 MDMA 引起的显著且明显的早期体温过低反应，这种效应与 α1-肾上腺素能受体拮抗剂哌唑嗪的作用相似。功能和配体结合研究揭示了SR59230A对α(1)-肾上腺素能受体的作用。结论和意义：高浓度的1-(2-乙基苯氧基)-3-[[(1S)-1,2,3,4-四氢-1-萘基]氨基]-(2S)-2-丙醇盐酸盐通过两种方式调节MDMA在小鼠体内的体温过高作用：一是阻断早期α(1)-肾上腺素能受体介导的成分，从而导致体温过低；二是轻微减弱后期体温过高成分，该成分可能由β(3)-肾上腺素能受体介导（低浓度SR59230A即可观察到此现象）。因此，SR59230A调节MDMA对体温作用的主要机制是拮抗α(1)-肾上腺素能受体。[4]

C23H29NO6

415.4795

415.199

C, 66.49; H, 7.04; N, 3.37; O, 23.10

1932675-95-0

SR59230A;174689-39-5; (2R)-SR59230A; 1932675-95-0; SR59230A hydrochloride; 1135278-41-9; 174689-38-4

White to off-white solid powder

116Ų

CCC1=CC=CC=C1OC[C@@H](CN[C@H]2CCCC3=CC=CC=C23)O.C(=O)(C(=O)O)O

XTBQNQMNFXNGLR-VDWUQFQWSA-N

InChI=1S/C21H27NO2.C2H2O4/c1-2-16-8-4-6-13-21(16)24-15-18(23)14-22-20-12-7-10-17-9-3-5-11-19(17)20;3-1(4)2(5)6/h3-6,8-9,11,13,18,20,22-23H,2,7,10,12,14-15H2,1H3;(H,3,4)(H,5,6)/t18-,20+;/m1./s1

(2R)-1-(2-ethylphenoxy)-3-[[(1S)-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-1-yl]amino]propan-2-ol;oxalic acid

(2R)-SR59230A; (2R)-SR-59230A; 1932675-95-0;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 31.25 mg/mL (75.21 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。