| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
UDP-glucuronosyltransferase, cytochrome P-450 isozyme[1]; RAR, RXR-alpha[2]
4-Hydroxyretinoic acid acts as a ligand for Retinoic Acid Receptors (RARs). It exhibits binding affinity and transcriptional activation activity towards RAR-beta and RAR-gamma, although its potency is generally lower than that of its parent compound, ATRA. It shows minimal activity towards RAR-alpha and Retinoid X Receptor-alpha (RXR-alpha) . |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
报告中，我们研究了atRA氧化产物通过葡萄糖醛酸化的生物转化。为此，我们合成了放射性和非放射性形式的4-Hydroxyretinoic acid/4-羟基-RA（4-OH-RA）、4-羟基-乙酸芳酯（4-OH-RTAC）和5,6-环氧-RA，所有这些都是atRA氧化的主要产物。对人肝微粒体和人重组UDP-葡糖醛酸基转移酶（UGTs）对这些维甲酸的葡糖醛酸化进行了表征，并与atRA的葡糖酰化进行了比较。人肝微粒体葡萄糖醛酸化4-OH-RA和4-OH-RAc的活性分别比atRA高6倍和3倍。对葡萄糖醛酸化产物的分析表明，4-OH-RA的羟基连接的葡萄糖醛酸化物
划译
这表明全反式维甲酸（atRA）通过氧化途径形成极性更强的代谢产物限制了其生物活性。在本报告中，我们研究了atRA氧化产物通过葡萄糖醛酸化的生物转化。为此，我们合成了放射性和非放射性形式的4-Hydroxyretinoic acid/4-羟基-RA（4-OH-RA）、4-羟基-乙酸芳酯（4-OH-RTAC）和5,6-环氧-RA，所有这些都是atRA氧化的主要产物。对人肝微粒体和人重组UDP-葡糖醛酸基转移酶（UGTs）对这些维甲酸的葡糖醛酸化进行了表征，并与atRA的葡糖酰化进行了比较。人肝微粒体葡萄糖醛酸化4-Hydroxyretinoic acid/4-OH-RA和4-OH-RAc的活性分别比atRA高6倍和3倍。对葡萄糖醛酸化产物的分析表明，4-OH-RA和4-OH-RAc的羟基连接的葡萄糖醛酸是主要产物，而与atRA、4-氧代-RA和5,6-环氧-RA形成的羧基连接的葡萄糖酸相反。我们还确定，人重组UGT2B7可以在RA、4-OH-RA和4-OH-RAc上葡萄糖醛酸化，其活性与人肝微粒体中发现的活性相似。因此，我们假设这种在人类肝脏、肾脏和肠道中表达的人类同工酶在atRA的生物学命运中起着关键作用。我们还提出，atRA通过细胞色素P450（CYP26）诱导自身的氧化代谢，并通过UGT介导的途径进一步生物转化为葡糖苷酸[1]。
在转染了RARs的CV-1细胞的体外研究中，4-HRA能够通过RAR-beta和RAR-gamma刺激基因转录，但其ED50值高于ATRA所需的浓度。在HaCaT角质形成细胞系中，外源性ATRA会显著通过羟基化转化为4-HRA，证实了其作为细胞视黄酸信号通路中主要下游代谢产物的作用。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
视黄酸通过细胞色素P-450同工酶代谢为活性较低的代谢产物4-羟基视黄酸。研究了药理学剂量的视黄酸对皮肤中视黄酸水平和细胞色素P-450活性的影响。在封闭状态下，将含有0.1%视黄酸的乳膏或单独的乳膏局部应用于成人皮肤四天。用角膜刀切除治疗区域，并从每次活检中分离出微粒体部分。与单独用体内乳膏处理部位的微粒体体外孵育相比，3H-维甲酸与体内维甲酸处理部位的微粒体体外温育导致其转化为4-羟基维甲酸的比例增加了4.5倍（P=0.0001，n=13）。这种细胞色素P-450介导的活性是氧和NADPH依赖性的，被5微M酮康唑抑制68%（P=0.0035，n=8），被一氧化碳抑制51%（P=0.02，n=6）。将单个视黄酸受体（RAR）或维甲酸X受体α（RXR-alpha）和含有视黄酸反应元件的氯霉素乙酰转移酶（CAT）报告质粒共转染到CV-1细胞中，以确定视黄酸及其代谢产物刺激CAT活性的ED50值。RA治疗组织中全反式和13-顺式RA的水平大于用这些化合物对所有三种RAR测定的ED50值。此外，RXRα的全反式RA水平高于ED50，而4-OH RA水平高于RARβ和RARγ的ED50，但低于RARα和RXRα。这些数据表明，治疗过的皮肤中有足够量的视黄酸来激活RAR和RXRα的基因转录[2]。
在皮肤结构与人类相似的尤卡坦微型猪模型中，局部应用4-HRA可诱导表皮增生并增加经皮水分丢失（TEWL），但其效力弱于ATRA。在大鼠模型中，视黄酸在胃和组织中迅速生成4-HRA，表明它是一个重要的体内代谢产物。 |
| 酶活实验 |
人肝微粒体[1]
实验中使用的人肝微粒体来自一名死于脑出血的56岁男子（HLM15）和一名死于大脑损伤的13岁女孩（HLM18）。这些样本来自荷兰格罗宁根大学。HLM通过为重组UGT提供比较基础，作为葡萄糖醛酸化测定的对照。 人重组UGTs[1] 如前所述，人重组UGT1A3在哺乳动物表达系统中表达。如前所述，UGT2B7在人胚胎肾（HK293）细胞中表达。如前所述制备富集的内质网膜组分。膜组分在-80°C下储存在5 mm HEPES、0.25 m蔗糖、20 mm MgCl2（pH 7.4）中。在这些条件下，重组UGT蛋白的酶活性可持续长达6个月。 酶分析[1] 以放射性和未标记形式的atRA和4-OH-RA作为苷元，UDP-GlcUA作为糖供体（图1所示的类维生素A结构），测量UGT活性。所有维甲酸底物均以Brij 58（0.12%）的混合胶束形式制备。Brij 58胶束既能激活酶，又能溶解类维生素A。试验中使用了人肝微粒体和重组UGT（50μg蛋白质）。所有酶测定均在黄光下进行。形成的产物的量小于添加的总底物的10%，并且与添加的微粒体蛋白的量成线性比例。将类维生素a衍生物（终浓度0.10 mm）在100 mm HEPES NaOH、pH 7.5、5 mm MgCl2、5 mm糖内酯和0.05%Brij 58中孵育，最终体积为60μl。在开始反应之前，将反应混合物与蛋白质在室温下预孵育10分钟，然后加入50 mm UDP-GlcUA用于放射性类维生素A（终浓度4.17 mm）或20 mm[14C]-UDP GlcUA（终浓度3.33 mm）用于未标记的类维生素A。将反应物在37°C下孵育30分钟。用20μl乙醇停止反应，涡旋并置于冰上。对于TLC，将60μl反应混合物施加到19通道硅胶TLC板（Baker Si250 PA（19C）；VWR Scientific），之后将板干燥并在氯仿-甲醇-冰醋酸-水（65:25:2:4，v/v）中显影两次。这些TLC条件允许分离羧基和羟基连接的葡糖苷酸。显影后，将板干燥，并在-80°C下进行3-7天的放射自显影。 典型的非细胞实验使用含有CYP450酶的微粒体组分（如来自人类皮肤或肝脏）。将化合物与NADPH和氧气共同孵育以测量代谢稳定性。或者，使用竞争性结合实验评估结合亲和力，该实验采用重组RAR-配体结合域（LBD）和放射性标记的ATRA，随后通过炭吸附或过滤分离结合与游离的配体。 |
| 细胞实验 |
将细胞（如CV-1或HaCaT）接种于培养基中，并用不同浓度的4-HRA（例如0.1 nM至1 µM）处理24-48小时。通过报告基因实验（例如与CAT或荧光素酶偶联的RAR-beta启动子）测量转录活性。或者，通过RP-HPLC分析细胞代谢，以量化视黄醇类的转化和4-HRA随时间的积累。
|
| 动物实验 |
采用尤卡坦微型猪模型进行局部给药研究。动物背部皮肤每日接受4-HRA的局部给药（例如溶于乙醇或乳膏中），持续5周（每周5天）。终点包括通过组织学分析皮肤活检样本以测量表皮厚度，以及通过仪器评估经皮水分丢失（TEWL）以评价皮肤屏障功能。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
代谢/代谢物
4-羟基维甲酸是维甲酸在人体内的已知代谢物。 作为一种初级代谢产物，4-HRA比ATRA更具极性。它主要经历进一步氧化生成4-氧代-视黄酸，或通过UGT2B7进行葡萄糖醛酸化结合反应，通过肾脏排泄。大鼠研究表明，在给予ATRA后，4-HRA迅速出现在血清和组织中，但由于其亲水性增加，通常清除速度更快，且全身生物利用度低于ATRA。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
4-HRA通常被认为毒性低于其母体化合物ATRA，且效力较弱。在动物模型（微型猪）中，与ATRA相比，它引起的皮肤刺激和增生程度较轻，这表明4-羟基化是一种解毒途径。然而，作为一种视黄醇类药物，高剂量使用仍可能存在类似其他同类化合物的发育毒性（致畸性）风险。
|
| 参考文献 |
|
| 其他信息 |
全反式-4-羟基维甲酸是一种类视黄醇，由全反式维甲酸在环己烯环4位引入羟基取代基构成。它是一种人体代谢产物。它既是类视黄醇，也是一种仲烯丙醇。它在功能上与全反式维甲酸相关。它是全反式-4-羟基维甲酸的共轭酸。
已有报道称，4-羟基维甲酸存在于智人体内，并有相关数据。 对于HLM15和重组UGT2B7，全反式维甲酸羧基连接的葡萄糖醛酸苷形成的Km值均在低微摩尔范围内（1.3–1.5 μM）。使用 HLM15 和重组 UGT2B7 测定的 atRA 最大催化速率 (Vmax) 分别为 764 和 523 pmol 葡糖醛酸化·min-1·mg 蛋白-1。这对应于 HLM15 的催化效率 (Vmax/Km) 为 509 μl·min-1·mg-1，重组 UGT2B7 的催化效率为 402 μl·min-1·mg-1，表明 atRA 羧基连接的葡糖醛酸苷的形成效率很高。4-OH 导向的葡糖醛酸化反应的 Km 值，HLM15 和重组 UGT2B7 分别为 273 μM 和 221 μM。典型的Vmax值测定结果显示，其在低纳摩尔范围内（HLM15和重组UGT2B7分别为2176和1709 pmol × mg−1 × min−1），导致羟基连接的葡萄糖醛酸苷的生成效率显著降低，如HLM15和重组UGT2B7的Vmax/Km值均为8 μl × min−1 × mg–1所示。通常，类视黄醇部分中羟基的存在会将葡萄糖醛酸化的位点从羧基转移到羟基，并逆转所涉及的UGT的亲和力。相应的催化效率（Vmax/Km）对于全反式维甲酸（atRA）羧基的葡萄糖醛酸化比羟基化类视黄醇4-OH部分的葡萄糖醛酸化高数百倍。 在迄今为止研究的UGT同工酶中，人重组UGT2B7对atRA和4-OH-RA的葡萄糖醛酸化能力最强。UGT2B7对atRA和4-OH-RA的活性与已报道的人肝微粒体活性相似，表明UGT2B7在将atRA和4-OH-RA代谢为羧基连接的RAG和羟基连接的4-OH-RAG的过程中起着关键作用。当4-OH-RA为底物时，UGT2B7能够催化羟基连接的葡萄糖醛酸苷的生物合成；当atRA为底物时，UGT2B7能够催化羧基连接的葡萄糖醛酸苷的生物合成。近期关于UGT2B7催化类固醇激素和脂肪酸葡萄糖醛酸化的研究表明，该同工酶积极参与这些亲脂性底物羟基和羧基连接的葡萄糖醛酸苷的形成(30)。总而言之，类视黄醇、类固醇激素和脂肪酸是启动细胞信号传导事件的重要配体。我们推测UGT2B7可能参与调控细胞内配体（如类固醇和全反式维甲酸）的水平。如果情况属实，它也可能参与调控类固醇和类视黄醇受体可用配体数量的反馈回路。 总之，我们推测全反式维甲酸通过细胞色素P450（CYP26）机制诱导自身氧化代谢，随后通过UGT依赖性机制进行代谢。 4-OH-RA的羟基连接的葡萄糖醛酸苷是全反式维甲酸（atRA）经CYP26代谢的直接产物。因此，4-OH-RA的4-OH葡萄糖醛酸化终止了atRA的生物活性，而atRA的羧基连接的葡萄糖醛酸苷可能是一种参与细胞过程的生物活性化合物。因此，CYP26和UGT2B7可能共同在atRA的代谢和生物学命运中发挥关键作用。[1] |
| 分子式 |
C20H28O3
|
|---|---|
| 分子量 |
316.43
|
| 精确质量 |
316.204
|
| CAS号 |
66592-72-1
|
| PubChem CID |
6438629
|
| 外观&性状 |
White to yellow solid powder
|
| 密度 |
1.075g/cm3
|
| 沸点 |
506.5ºC at 760 mmHg
|
| 闪点 |
274.2ºC
|
| 折射率 |
1.574
|
| LogP |
4.573
|
| tPSA |
57.53
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
23
|
| 分子复杂度/Complexity |
598
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
CC1=C(C(CCC1O)(C)C)/C=C/C(=C/C=C/C(=C/C(=O)O)/C)/C
|
| InChi Key |
KGUMXGDKXYTTEY-FRCNGJHJSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C20H28O3/c1-14(7-6-8-15(2)13-19(22)23)9-10-17-16(3)18(21)11-12-20(17,4)5/h6-10,13,18,21H,11-12H2,1-5H3,(H,22,23)/b8-6+,10-9+,14-7+,15-13+
|
| 化学名 |
(2E,4E,6E,8E)-9-(3-hydroxy-2,6,6-trimethylcyclohexen-1-yl)-3,7-dimethylnona-2,4,6,8-tetraenoic acid
|
| 别名 |
4-Hydroxyretinoic acid; all-trans-4-hydroxyretinoic acid; 4-hydroxy-Retinoic acid; Retinoic acid, 4-hydroxy-; 4-OH-retinoate; GT84HX78DR; 4-hydroxy-Retinoate; ...; 66592-72-1;
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。 (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1603 mL | 15.8013 mL | 31.6026 mL | |
| 5 mM | 0.6321 mL | 3.1603 mL | 6.3205 mL | |
| 10 mM | 0.3160 mL | 1.5801 mL | 3.1603 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
