IAG933   中文名称: YAP-TEAD-抑制剂-3

YAP-TEAD (IC50 = 9 nM)[1]

IAG933及其类似物是YAP-TEAD蛋白-蛋白相互作用的强效一流和选择性干扰物，具有进入临床试验的合适特性。药理学上废除与所有四种TEAD副同源物的相互作用导致YAP从染色质中排出，并减少Hippo介导的转录和细胞死亡的诱导。[2]
IAG933是一种直接针对界面3的YAP-TEAD蛋白质相互作用干扰物（PPID），已于2021年进入临床试验[3]。

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IAG933通过诱导细胞凋亡改善对JDQ443的反应[2]
尽管选择性KRASG12C抑制剂对突变型癌症有影响，但它们的临床疗效通常不如RTK抑制剂明显。克服对KRASG12C抑制剂的耐药性仍然是一个挑战，促使正在进行的临床试验研究联合疗法。与变构TEAD抑制剂的研究结果一致，IAG933和诺华KRASG12C抑制剂JDQ443在KRASG12B突变的NSCLC和CRC细胞系中显示出很强的联合益处（图6a）。IAG933与其他JDQ443候选伴侣（如SHP2、MEK、ERK或PIKα抑制剂）相比具有优势，因为它导致细胞系间最大生长抑制的显著变化（扩展数据图9a）。在长期增殖试验中，我们观察到，当联合亚等效浓度的JDQ443和IAG933时，细胞生长受到强烈和持续的抑制，这适度延迟了细胞增殖（扩展数据图9b）。一致地，在体内，预先添加IAG933加深了NCI-H2122 NSCLC异种移植物对JDQ443的反应（图6b），这种组合优于JDQ443加SHP2抑制剂TNO155（扩展数据图9c）。在非小细胞肺癌的PDX模型中也观察到了这种抗肿瘤联合作用，治疗结束后30天内没有观察到肿瘤再生（图6c6c）。

IAG933和YTP-75具有剂量依赖性抗肿瘤疗效[2]
在小鼠MSTO-211H细胞衍生异种移植物（CDX）模型中，通过口服灌胃给药，单次剂量为每公斤体重30至240毫克（mg kg−1），对IAG933进行了评估。在最大浓度（Tmax）下观察到剂量相关的血液暴露时间约为1~2小时，与给药后约2小时开始的剂量/暴露依赖性TEAD靶基因抑制相关（图3a，b）。靶基因抑制的体内血液IC50为64 nM，略高于MSTO-211H细胞的体外IC50 11-26 nM（图1c）。在原位胸膜MSTO-211H肿瘤中，使用TEAD反应元件下的萤光素酶表达进行的体内报告分析显示，单剂量IAG933后，生物发光迅速而严重地丧失（图（图3c），3c），随后由于IAG933在小鼠体内的半衰期相对较短，在几个小时内反弹到基线。对IAG933类似物YTP-75观察到类似的PK/PD结果（扩展数据图5a，b），表明这两种化合物在体内具有深度和快速的TEAD转录抑制作用。

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IAG933在耐受剂量下消除大鼠模型中的肿瘤[2]
将我们的体内研究扩展到小鼠以外，我们还在MSTO-211H大鼠皮下异种移植物模型中评估了IAG933。单剂量IAG933后的靶基因抑制动力学与小鼠模型中观察到的动力学相似（扩展数据图7a，b），而20 nM的平均CCN2/ANKRD1/CCN1 IC50约低三倍，与体外IC50值相似。在每日给药2周后，在10 mg kg−1的剂量下观察到肿瘤停滞，在30 mg/kg的剂量下，五只动物中有四只出现完全消退（图（图3g）.3g）。暴露量与剂量成正比，在每天治疗的12天内没有检测到化合物积聚（扩展数据图7c）。没有观察到体重减轻，治疗耐受性良好。比较大鼠和小鼠模型反应曲线，确定大鼠每天一次30mg kg−1和小鼠每天一次240mg kg−2的剂量等效性（扩展数据图7d7d）。

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间皮瘤和Hippo改变的异种移植物中的IAG933活性[2]
间皮瘤的发病机制通常涉及Hippo信号级联的肿瘤抑制基因的遗传改变，包括NF2和LATS1/LATS2，估计有32-50%的病例9,37-39。我们在每天用YTP-75治疗的九个人源性异种移植物（PDX）小鼠模型中探索了YTP在不同间皮瘤遗传背景下的抗肿瘤功效。在9个模型中，有7个观察到明显的肿瘤反应，3个NF2改变的模型出现深度肿瘤消退，另外4个模型出现持久的肿瘤停滞，但没有报告Hippo改变（图4a4a和扩展数据图7e）。7e）。有趣的是，两种没有反应的肿瘤模型显示TEAD靶基因的基础表达最低（图4a）。在其他实体瘤中也检测到NF2突变的低患病率（~1-2%）9,38,40。为了探索此类病例中的YTP活性，我们评估了三阴性乳腺癌症的NF2-替代PDX模型（5938-HX）中的IAG933和NF2-替代肺癌的CDX模型（NCI-H292）中的YTP-75。这两种模型都显示出对治疗的抗肿瘤反应，但5938-HX经历了肿瘤消退（图4b），而NCI-H292模型对肿瘤生长的抑制作用较小（图4c）。

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IAG933联合治疗提高RTK抑制剂疗效[2]
先前已证明，奥西咪替尼和VT104分别联合抑制EGFR和TEAD可增强非小细胞肺癌模型中的奥西咪替尼肿瘤反应43。HER2阳性癌症和复发性癌症的YAP活性升高3,8，YAP-TEAD激活与曲妥珠单抗耐药性有关8,44。此外，最近的数据表明，在RTK抑制剂治疗下，TEAD激活可以保持最小的残留疾病6,43。因此，共同抑制TEAD对于根除RTK介导的癌症和实现肿瘤消除至关重要。
与这一概念一致，IAG933联合奥西咪替尼显示出增强的抗肿瘤益处，导致EGFR突变的NCI-H1975 CDX NSCLC模型快速消退（图5a）。此外，IAG933加上MET抑制剂capmatinib在癌症的EBC-1 MET-放大CDX模型中诱导了严重的肿瘤收缩，而单独的IAG933没有活性（图（图5b）.5b）。尽管IAG933在来自各种癌症适应症的七个HER2扩增的细胞系中具有适度的单剂作用，但观察到IAG933与HER2抑制剂拉帕替尼的剂量依赖性组合活性（图（图5c），5c）；在更长的体外研究中观察到治疗结束后延长的组合活性（图图5d）.5d）。在体内，HER2扩增的NCI-N87胃癌异种移植物模型在YTP-75和曲妥珠单抗的组合下进行了完全的肿瘤消退（图（图5e）.5e）。因此，在由不同RTK驱动的癌症模型中观察到YTP的组合益处，这表明了共同的潜在机制，并提供了组合这些治疗剂的机会。

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IAG933联合治疗BRAFV600E改变的肿瘤显示出益处[2]
由于激活BRAF中的突变也会驱动对MAPK通路的致癌依赖，我们通过将IAG933与BRAF抑制剂dabrafenib、MEK1/MEK2抑制剂曲美替尼和/或ERK1/ERK2抑制剂LTT462联合使用，探索了YTPs在BRAFV600E突变疾病中的联合潜力。dabrafenib+IAG933、dabrafenib+LTT462+IAG933和dabrafenibi+曲美替尼+IAG93的组合在短期细胞存活率测定中显示出益处（图7a）。与TEAD活性对MAPK通路抑制的适应性作用相一致，在没有YTP的情况下，dabrafenib+曲美替尼治疗后，TEAD反应基因的表达增加，这可以通过IAG933类似物YTP-10同时抑制TEAD来预防（图7b）。在BRAFV600E突变的CRC CDX模型HT-29中，与单药治疗相比，dabrafenib+LTT462+IAG933的三重组合具有更强的抗肿瘤反应（图7c）。同样，在BRAFV600E突变的CRC异种移植物模型5238-HX中，dabrafenib+trametinib+YTP-75的三重组合显示出比dabrafenib+trametnib或dabrafenik+trametiib+西妥昔单抗更强的抗肿瘤活性，导致在21天的研究期间肿瘤持续消退（图（图7d7d）。 TEAD和RAF/MAPK阻断对非KRASG12C PDAC有益 除了临床上可靶向的G12C变体外，KRAS驱动的肿瘤发生的治疗抑制仍然具有挑战性52。为了解决非KRASG12C-突变肿瘤，有效抑制下游RAF、MEK和/或ERK效应器可能提供潜在的治疗选择。在此背景下，考虑到突变体特异性抑制剂所取得的令人鼓舞的组合结果，IAG933可能代表着一个有前景的组合机会（图10）（图66和77以及扩展数据图10）。我们在携带各种KRAS等位基因的PDAC细胞中研究了这一假设。在23个PDAC细胞系中，将YTP-75添加到曲美替尼和RAF抑制剂萘帕非尼中显著增强了生长抑制作用（图8a），这与小鼠临床试验53的结果一致，其中包括12个具有不同KRAS突变的PDAC PDX（7 G12D、2 G12V、2 Q61H和1 G12R），其中8个模型（66%）显示三重组合的肿瘤消退或接近停滞（图8b、c）。在SUIT-2 PDAC细胞中，基于萤光素酶的报告系统中观察到并通过YTP-13共处理，观察到曲美替尼+萘普生对TEAD转录活性的强烈诱导（图8d），并且这种三重组合被证明可以抑制三个PDAC系中DUSP6和TEAD反应性ANKRD1基因的表达（图8e8e）。

表面等离子体共振分析[2]
如前所述，使用人类TEAD1209-426、TEAD2221-447、TEAD3218-435和TEAD4217-434进行表面等离子体共振测定。用AviTag标记四种N-生物素化的TEAD蛋白并将其固定在传感器芯片上，在298 K下测量不同浓度YTP-3和YTP-32的结合。使用Biacore T200评估软件用1:1相互作用模型对数据进行全局拟合，以确定平衡时测得的解离常数（Kd）。

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TR-FRET检测[2]
如前所述，在TR-FRET测定中测试了不同的化合物24。靶向肉豆蔻酸/棕榈酰口袋的脂质粘合剂化合物（K-975和VT104）在TR-FRET中没有活性，因为该测定中使用的TEAD4蛋白完全酰化。

SF-268细胞克隆集落形成试验的选择性评估[2]
对SF-268细胞系进行工程改造，并按如下方式建立了TEAD1双突变克隆（V406A/E408A）。将TEAD1的靶向序列（gtgcattcgctgtttcaaat）克隆到pNGx_006载体中（pUC/ori，tracrRNA/嵌合体的U6启动子，SPyCas9和嘌呤霉素选择的CMV启动子）。使用具有以下参数的Neon转染系统，用1.5μg pNGx_006_sgTEAD1和0.5μg TEAD1V406A和TEAD1E408的单链寡核苷酸（ttaacaggtgtggtaaacaaacaggagaagaaactctctgcatggcctggatcgtgtgtgtgttcagaccacatcatatttacaggtgtaaaggactg）对SF-268细胞（2×105）进行电穿孔：电压1300 V，脉冲20 ms和脉冲数2。选择嘌呤霉素后接种单个克隆，并通过Sanger测序进行鉴定。对于集落形成试验，在处理前24小时以低密度（六孔板中每孔1000个细胞）接种SF-268克隆18和23。将试验化合物（IAG933）以最高浓度10μM的五点三倍连续稀释分配到测定板中。DMSO用作对照，DMSO含量标准化为所有化合物处理孔中的最高体积。含有化合物的培养基每周更新两次。在常规细胞培养条件下（37°C，5%CO2）孵育11天后，用3.7%甲醛固定细胞10分钟，并用结晶紫对菌落进行染色。

动物实验[2]
\n大多数化合物均以指定剂量通过灌胃法给药，具体配方如下。IAG933配制于含0.5%甲基纤维素和0.1% Tween-80的100 mM磷酸盐缓冲液（pH值调至8）中。VT104和K-975配制于100%玉米淀粉CC中。YTP-75配制于含30% PEG300的50 mM醋酸盐缓冲液（pH值调至5.5）中。YTP-13配制于含5% PEG300的50 mM醋酸盐缓冲液（pH值调至4.8）中。LTT462、达拉非尼和曲美替尼配制于20% MEPC4水溶液中。 JDQ443、TNO155、奥希替尼和卡马替尼均配制成含0.5%甲基纤维素和0.1%吐温-80的水溶液。其他化合物通过腹腔注射给药。曲妥珠单抗和西妥昔单抗抗体以及MRTX1133化合物均配制成Dexolve溶液。\n

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\n体内药效学研究[2]
\n动物按时间点和治疗分组，每组n=3-5只。采集血液、血浆和肿瘤样本用于药代动力学和药效学分析。血液样本在冰上采集，并储存于-20℃直至进一步处理。血浆和肿瘤样本在干冰上速冻，并储存于-80℃直至进一步处理。采用MSTO-211H STB-Luc原位胸膜间皮瘤肿瘤模型进行体内TEAD报告基因检测。每次测量前，小鼠均腹腔注射荧光素（150 mg kg−1）。20 分钟后，在小鼠清醒且固定时间不超过 1 分钟的条件下，使用 IVIS Spectrum 成像系统进行成像。\n

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\n体内疗效研究[2]
\n当移植到小鼠侧腹的肿瘤体积至少达到 100 mm3 时开始治疗，并采用随机分组。疗效研究、肿瘤反应和复发情况均以治疗开始时的肿瘤体积为指标进行报告。对于异位模型的疗效研究，根据肿瘤体积将动物随机分组。肿瘤大小使用游标卡尺测量，并使用公式“长 × 宽² × π/6”进行计算。为了评估疗效，有时会在实验结束时或达到最佳疗效时计算T/C百分比值，计算公式为（治疗组肿瘤体积变化量/对照组肿瘤体积变化量）× 100。对于肿瘤消退，则使用公式（治疗组肿瘤体积变化量/初始治疗组肿瘤体积）× 100来量化肿瘤反应。统计分析使用GraphPad Prism软件进行。对于胸膜原位移植模型的疗效研究，通过测量收集于EDTA抗凝微量采血管中的20 μl血液样本中的葡萄糖含量来评估活肿瘤负荷，样本储存于-20℃。向96孔白色板的每个孔中加入腔肠素（Nanolight）底物溶液（100 μl，100 mM），并加入5 μl血液，每个处理重复三次。使用 CentroXS LB960 发光仪测量生物发光，测量时间为 2 秒。\n

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\n血液、血浆和肿瘤中化合物的生物分析检测方法[2]
\n采用超高效液相色谱-串联质谱 (UPLC-MS/MS) 法测定全血、血浆和组织中 IAG933 和 YTP-75 的浓度。冷冻组织样品根据制造商说明使用 CryoPrep 研磨成粉末，或使用 Fast Prep-24 系统在等体积的 HPLC 水中匀浆。将血液、血浆或组织样品（粉末或匀浆形式，约 25 mg，精确称重）与 25 µl 内标（1 µg ml–1）混合，并加入 200 µl 乙腈进行提取以沉淀蛋白质。超声处理 5 分钟后，样品离心，取上清液 70 µl 与 60 µl HPLC 级水混合，然后取 5 µl 样品进行 UPLC-MS/MS 分析。样品注入反相色谱柱，流动相为甲酸水溶液和甲酸乙腈溶液。柱洗脱液直接导入三重四极杆质谱仪的离子源。采用电喷雾正离子多反应监测 (ESI-MRM) 模式进行 MS/MS 分析。使用非房室模型，通过线性梯形法则，根据平均值计算血管外给药的药代动力学 (PK) 参数。\n

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\n矩阵形式的组合分析[2]
\n使用 CellTiter-Glo 试剂通过 ATP 定量评估化合物组合对细胞增殖的影响。将细胞以每孔 300–700 个细胞的密度接种于白色壁、透明底的 384 孔板中，并在 37 °C 下孵育过夜。之后，使用 HP300 数字分液器以矩阵形式加入系列稀释的化合物或溶剂对照，每个处理均设置三个复孔。在化合物存在下孵育 5–7 天后，使用 CellTiter-Glo 试剂盒，按照供应商的说明监测细胞活力。数据使用内部开发的 Combination Analysis Module 程序进行分析。为了区分化合物的细胞毒性和细胞抑制作用，在化合物加入当天（第 0 天），还在单独的细胞培养板中评估了活细胞的数量，并用于计算细胞活力抑制程度。根据浓度矩阵中给定点的 CellTiter-Glo 信号值高于还是低于第 0 天（后者提示化合物处理导致细胞死亡），计算“生长抑制”（GI）值，计算方法如下：T < D0：GI = 100 × {1 – [(S – D0)/D0]}；T ≥ D0：GI = 100 × [1 – (S – D0)/(V – D0)]，其中 D0 为第 0 天，V 为溶剂对照，S 为信号值。该公式得到的数值范围为：0 表示与溶剂相比无化合物效应，100 表示生长停滞（即终点信号值等于第 0 天信号值），200 表示细胞完全死亡。在图 6a 中，对于 NSCLC 细胞系，使用 IAG933 进行三倍稀释，起始浓度为 5.595 µM，对于 CRC 细胞系，起始浓度为 3 µM；对于 JDQ443，使用四倍稀释，起始浓度为 1.6 µM，最高化合物浓度。

[1]. Preparation of biaryl derivatives as YAP/TAZ-TEAD protein-protein interaction inhibitors. World Intellectual Property Organization, WO2021186324 A1. 2021-09-23.

YAP-TEAD蛋白-蛋白相互作用介导YAP在Hippo信号通路下游的致癌功能。目前，已有的YAP-TEAD药物通过与TEAD的脂质口袋结合，以变构改变的方式间接靶向该相互作用。然而，直接药理学破坏YAP和TEAD之间界面所产生的后果仍未得到充分研究。本文介绍IAG933及其类似物，它们是首创的高效选择性YAP-TEAD蛋白-蛋白相互作用破坏剂，具有进入临床试验的适宜特性。药理学阻断与所有四个TEAD旁系同源蛋白的相互作用导致YAP从染色质中解离，并降低Hippo介导的转录和诱导细胞死亡。在动物模型中，在耐受剂量下，Hippo驱动的间皮瘤异种移植瘤以及Hippo改变的非间皮瘤相关癌症模型均观察到肿瘤深度消退。重要的是，IAG933 的疗效也扩展到了更广泛的肿瘤适应症，例如肺癌、胰腺癌和结直肠癌，并与 RTK、KRAS 突变选择性抑制剂和 MAPK 抑制剂联合使用，从而获得更有效且更持久的疗效。IAG933 的临床评估正在进行中。[2] Hippo 信号通路是一个高度保守的通路，在细胞增殖和凋亡的调控中发挥着重要作用。转录因子 TEAD1-4 和转录共调节因子 YAP/TAZ 是 Hippo 通路的下游效应因子，可以调节 Hippo 的生物学功能。该通路的失调与肿瘤发生和获得性耐药性密切相关。YAP/TAZ-TEAD 相互作用在癌症发展中的重要性日益凸显，使其成为潜在的治疗靶点。在过去的十年中，阻断 YAP/TAZ-TEAD 相互作用作为一种有效的癌症治疗方法，已取得了显著进展。该方法遵循着这样的发展轨迹：首先设计了肽模拟的YAP-TEAD蛋白-蛋白相互作用破坏剂（PPIDs），随后发现了变构小分子PPIDs，目前正致力于开发直接小分子PPIDs。YAP和TEAD形成三个相互作用界面。界面2和3适合直接设计PPID。一种靶向界面3的直接YAP-TEAD PPID（IAG933）已于2021年进入临床试验。然而，与变构抑制剂的开发相比，策略性地设计靶向TEAD界面2和3的有效小分子PPIDs总体上更具挑战性。本综述重点关注直接表面破坏剂的开发，并探讨了开发用于癌症治疗的高效YAP/TAZ-TEAD抑制剂所面临的挑战和机遇。[3]

C27H26CLF2N3O4

529.962852954865

529.157

2714434-21-4

156855755

White to off-white solid powder

3.7

92.7Ų

3

8

7

37

793

2

CNC(=O)C1=CN=C(C(=C1C2=C3C[C@@](OC3=CC(=C2Cl)F)([C@@H]4CCCN4)C5=CC=CC=C5)F)OCCO

HUVOYQMXUNTUAI-DCFHFQCYSA-N

InChI=1S/C27H26ClF2N3O4/c1-31-25(35)17-14-33-26(36-11-10-34)24(30)22(17)21-16-13-27(20-8-5-9-32-20,15-6-3-2-4-7-15)37-19(16)12-18(29)23(21)28/h2-4,6-7,12,14,20,32,34H,5,8-11,13H2,1H3,(H,31,35)/t20-,27-/m0/s1

4-[(2S)-5-chloro-6-fluoro-2-phenyl-2-[(2S)-pyrrolidin-2-yl]-3H-1-benzofuran-4-yl]-5-fluoro-6-(2-hydroxyethoxy)-N-methylpyridine-3-carboxamide

YAP-TEAD-IN-3; IAG933; 2714434-21-4; IAG-933; NVP-IAG933; SCHEMBL23834952; GTPL13367; IAG933?;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 125 mg/mL (235.87 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。