Acetylcholinesterase

盐酸普托品（10-40 μM，24-96 小时）抑制肝癌细胞（HepG2、Huh7）的 EMT 过程、迁移、侵袭和活力 [2]。盐酸普托品（10-40 μM，24 h）抑制 PI3K/Akt 信号通路，增加 HepG2 和 Huh7 细胞中 caspase-3 和 caspase-9 的产生，从而诱导细胞凋亡 [2]。在 HepG2 和 Huh7 细胞中，盐酸丙哌平（10–40 μM，6 小时）会导致 ROS 生成 [2]。盐酸普托品 (0–10 μg/mL) 会降低 N1 细胞中去甲肾上腺素 (NE) 的吸收和 S6 细胞中血清素转运蛋白 (SERT) 的吸收 [3]。

腹腔注射0.1和1 mg/kg盐酸普托品可改善1 mg/kg东莨菪碱引起的小鼠记忆障碍[1]。盐酸普托品（5–20 mg/kg，腹膜内注射）可抑制异种移植 BALB/c 小鼠（皮下注射 Huh-7 或 HepG2 细胞）的肿瘤生长、PI3K/Akt 和 caspase-3 裂解[2]。在小鼠 HTR 和 TST 测试中，盐酸普托品（5-20 mg/kg，腹腔注射）表现出类似于抗抑郁药的作用[3]。局灶性脑缺血损伤大鼠腹腔注射盐酸普托品（1-4mg/kg，每天一次，连续3天）反应较好[4]。

Protopine是一种异喹啉生物碱，具有多种生物活性，包括抗肿瘤活性。然而，普罗托品对肝癌细胞的影响仍然难以捉摸。本研究旨在检测普罗托品对肝癌细胞的体外和体内作用。 方法：采用MTT法测定细胞活力。进行伤口愈合和transwell检测以评估细胞的运动能力。流式细胞术检测细胞凋亡和ROS水平。Western印迹法用于测量蛋白质的变化。还评估了普罗托品在异种移植物小鼠中的细胞毒性。 结果：Protopine以半胱天冬酶依赖的方式通过内在途径抑制肝癌细胞的存活并触发凋亡。此外，普罗托品还诱导细胞内ROS的积累，进一步导致PI3K/Akt信号通路的抑制。最后，体内研究表明，普罗托品也抑制了异种移植物小鼠的肿瘤生长，没有明显的毒性。 结论：Protopine可作为治疗肝癌的潜在药物[2]。

蛋白质印迹分析[2]
细胞类型： HepG2、Huh7
测试浓度： 10、20、40 μM
孵育时间： 24小时
实验结果：诱导caspase-3和caspase-9的裂解。 Bcl-2 和 Bcl-xl 水平降低。诱导线粒体蛋白细胞色素 c 释放到细胞质中。

动物/疾病模型： 5-羟基-DL-色氨酸 (5-HTP) 诱导的小鼠模型 [3]
剂量： 5、10、20 mg/kg
给药途径： 腹腔注射 (ip)
实验结果： 5-HTP 诱导的头部半球抽搐反应 (HTR) 次数增加。尾悬吊试验 (TST) 中不动时间缩短。

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从中药 Dactylicapnos scandens Hutch 中分离得到的原阿片碱在体外试验中被鉴定为血清素转运体和去甲肾上腺素转运体的抑制剂。本研究采用5-羟基-DL-色氨酸（5-HTP）诱导的头部抽搐反应（HTR）和悬尾试验，以氟西汀和地昔帕明为阳性对照，探讨原阿片碱是否具有抗抑郁作用。在HTR试验中，5、10和20 mg/kg剂量的原阿片碱均呈剂量依赖性地增加5-HTP诱导的HTR次数。在悬尾试验中，3.75 mg/kg、7.5 mg/kg和30 mg/kg剂量的原阿片碱也呈剂量依赖性地减少小鼠的静止不动时间。这些结果为原阿片碱在治疗轻度至中度抑郁症等情绪障碍方面的应用开辟了新的可能性。[3] 原阿片碱是一种异喹啉生物碱，已知具有多种作用，例如血管舒张、下调脑内谷氨酸水平和降低细胞内钙离子浓度。然而，目前尚无关于原阿片碱对脑缺血作用的报道。本研究旨在探讨原阿片碱对大鼠局灶性脑缺血的影响。雄性Sprague-Dawley大鼠被随机分为五组：假手术组、溶剂对照组和三个不同剂量的原阿片碱治疗组（0.98、1.96和3.92 mg/kg）。在缺血前3天，每天一次腹腔注射原阿片碱，溶剂对照组则以相同方式注射0.9%生理盐水。假手术组大鼠仅注射0.9%生理盐水，不进行缺血处理。采用管腔内穿刺法阻断大脑中动脉24小时，诱导局灶性脑缺血。结果表明，原阿片碱预处理可降低脑梗死面积和血清乳酸脱氢酶活性，并以剂量依赖的方式改善缺血引起的神经功能缺损评分和脑组织学改变。进一步研究表明，原阿片碱可提高血清超氧化物歧化酶活性，并降低大脑中动脉闭塞大鼠缺血脑组织中的总钙离子浓度和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）阳性细胞数量。这些结果提示，原阿片碱可能通过钙拮抗、抗氧化和抑制细胞凋亡等多种作用机制，对局灶性脑缺血造成的损伤发挥有效的保护作用。[4]

吸收、分布和排泄
香附四物汤（XFSWD）在临床上广泛用于治疗原发性痛经已有数百年历史，疗效显著。XFSWD的一个组分，即用60%乙醇水提取液经大孔吸附树脂洗脱得到的洗脱产物（XFSWE），具有显著的镇痛作用。本研究旨在探讨痛经症状大鼠口服XFSWE后，其中四种主要活性成分（小檗碱、原阿片碱、四氢黄连碱和四氢巴马汀）的药代动力学和组织分布情况，并比较正常大鼠和痛经症状大鼠之间的差异。本研究采用苯甲酸雌二醇和催产素建立痛经症状大鼠模型，实验周期为7天。在实验期的最后一天，正常大鼠和痛经症状大鼠均经口给予XFSWE，并在不同时间点采集血液和组织样本。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血液和组织样本中的小檗碱、原阿片碱、四氢黄连碱和四氢巴马汀的含量。利用非房室模型，根据血浆浓度-时间数据计算药代动力学参数。采用单因素方差分析（ANOVA）检验各组间药代动力学参数的差异。结果显示，经口给予相同剂量XFSWE的正常大鼠和痛经症状大鼠的Cmax、Tmax、AUC(0-t)、AUC(0-∞)、MRT(0-t)、MRT(0-∞)和CL/F均存在统计学差异（P<0.05）。组织分布研究结果显示，总体趋势为：脾脏 > 肝脏 > 肾脏 > 子宫 > 心脏 > 肺脏 > 卵巢 > 脑 > 胸腺，M-60 min > M-120 min > M-30 min > C-60 min > C-120 min > C-30 min。痛经症状大鼠肝脏、脾脏和子宫中的原阿片碱含量高于其他组织。与正常大鼠相比，痛经症状大鼠不同时间点各组织中化合物的含量存在显著差异（P<0.05）。本研究首次报道了痛经症状动物的药代动力学和组织分布情况。结果表明，在痛经综合征大鼠中，小檗碱、原阿片碱、四氢黄连碱和四氢巴马汀的吸收率较高，消除速度较慢，提示痛经综合征大鼠的药物代谢速率和程度发生了改变。结果还显示，正常大鼠和痛经症状大鼠在某些器官和时间点的小檗碱、原阿片碱和四氢巴马汀浓度存在明显差异，提示痛经症状动物的器官血流量和灌注率发生了改变。PMID:24837303

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代谢/代谢物
加州罂粟制剂被用作植物药和草药。本文描述了利用气相色谱-质谱联用技术对加州罂粟生物碱加州罂粟碱和原阿片碱在大鼠尿液中的代谢和毒理学分析。……原阿片碱……首先发生广泛的2,3-亚甲二氧基脱甲基化，随后发生儿茶酚-O-甲基化。所有酚羟基代谢物均部分结合。作者采用酸水解、液液萃取和微波辅助乙酰化后，结合全扫描气相色谱-质谱联用技术，建立了一套系统的毒理学分析方法，能够检测到大鼠尿液中加州罂粟碱和原阿片碱的主要代谢物，所用剂量应与吸毒者剂量相当。因此，根据作者的系统毒理学分析程序，加州罂粟制剂的使用也应能在人尿中检测到。

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香附四物汤（XFSWD）在临床上广泛用于治疗原发性痛经已有数百年历史，并显示出良好的疗效。XFSWD的一个组分，即用60%乙醇水提取液经大孔吸附树脂洗脱的产物（XFSWE），显示出显著的镇痛作用。本研究旨在探讨痛经症状大鼠口服XFSWE后，四种主要生物活性成分（小檗碱、原阿片碱、四氢黄连碱和四氢巴马汀）的药代动力学和组织分布情况，并比较正常大鼠和痛经症状大鼠之间的差异。本研究使用苯甲酸雌二醇和催产素构建痛经症状大鼠模型。实验周期为7天。在实验期的最后一天，分别对正常大鼠和痛经症状大鼠口服XFSWE，并在不同时间点采集血液和组织样本。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血液和组织样本中的小檗碱、原阿片碱、四氢黄连碱和四氢巴马汀的含量。利用非房室模型，根据血浆浓度-时间数据计算药代动力学参数。采用单因素方差分析（ANOVA）检验各组间药代动力学参数的差异。结果显示，口服相同剂量XFSWE的正常大鼠和痛经症状大鼠的Cmax、Tmax、AUC(0-t)、AUC(0-∞)、MRT(0-t)、MRT(0-∞)和CL/F均存在统计学差异（P<0.05）。组织分布研究结果显示，总体趋势为：脾脏 > 肝脏 > 肾脏 > 子宫 > 心脏 > 肺脏 > 卵巢 > 脑 > 胸腺，M-60 min > M-120 min > M-30 min > C-60 min > C-120 min > C-30 min。痛经症状大鼠肝脏、脾脏和子宫中的原阿片碱含量高于其他组织。与正常大鼠相比，痛经症状大鼠不同时间点各组织中化合物的含量存在显著差异（P<0.05）。本研究首次报道了痛经症状动物的药代动力学和组织分布情况。结果表明，痛经大鼠体内小檗碱、原阿片碱、四氢黄连碱和四氢巴马汀的吸收率较高，消除速度较慢，提示痛经大鼠体内药物代谢的速率和程度发生了改变。结果还显示，正常大鼠和痛经大鼠在某些器官和时间点的体内小檗碱、原阿片碱和四氢巴马汀浓度存在明显差异，提示痛经大鼠体内相关器官的血流量和灌注率发生了改变。

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加州罂粟制剂被用作植物药和草药。本文采用气相色谱-质谱联用技术，对加州罂粟生物碱加州罂粟碱和原阿片碱在大鼠尿液中的代谢和毒理学进行了研究。原阿片碱首先发生广泛的2,3-亚甲二氧基脱甲基化，随后发生儿茶酚-O-甲基化。所有酚羟基代谢物均部分结合。作者采用酸水解、液液萃取和微波辅助乙酰化后，结合全扫描气相色谱-质谱联用技术，建立了一套系统的毒理学分析方法，能够在大鼠尿液中检测到加州罂粟碱和原阿片碱的主要代谢物，其剂量应与吸毒者的剂量相当。因此，采用作者的系统毒理学分析方法，也应能在人尿液中检测到加州罂粟制剂的使用。

毒性概述
鉴别与用途：原阿片碱为固体，用作药物。人体暴露与毒性：利用瞬时转染HepG2细胞的基因报告检测，证实原阿片碱诱导CYP1A1表达与芳烃受体的轻微或可忽略不计的激活相关。原阿片碱在HepG2细胞和人肝细胞中诱导的CYP1A mRNA水平并未导致CYP1A蛋白或活性水平升高。动物研究：体外放射性标记研究表明，原阿片碱能够增强γ-氨基丁酸与大鼠脑突触膜受体的结合。原阿片碱具有抗心律失常作用，并可能直接抑制心肌细胞的快速电活动。
研究发现，原阿片碱能够抑制组胺H1受体和血小板聚集，并具有镇痛作用。原阿片碱是一种具有类似阿片类生物活性的化合物，作用于阿片受体。其特性包括诱导镇痛或麻醉。原阿片碱可选择性地与组胺H1受体结合，但不激活该受体，从而阻断内源性组胺的作用。经典的抗组胺药主要拮抗或阻止组胺在速发型超敏反应中的作用。它们作用于支气管、毛细血管和其他一些平滑肌，用于预防或缓解晕动病、季节性鼻炎和过敏性皮炎，以及诱导嗜睡。原阿片碱还可以作为血小板聚集抑制剂，拮抗或抑制任何导致血小板聚集的机制，无论是在激活和形态改变阶段，还是在致密颗粒释放反应和前列腺素-血栓素系统刺激之后。原阿片碱能抑制离体心肌乳头肌的收缩以及内皮素诱导的血管平滑肌细胞增殖。它还能缩短豚鼠心肌乳头肌的动作电位时程，延长有效不应期。原阿片碱对大鼠心脏缺血再灌注损伤的保护作用以及其诱导的大鼠胸主动脉舒张作用，与抑制电压门控和受体门控钙离子通道的钙离子内流有关。原阿片碱一直是众多生物学研究的焦点，研究表明，与其他异喹啉生物碱相比，它具有抗寄生虫活性，且细胞毒性较弱。体外实验发现，原阿片碱对氧化应激诱导的细胞死亡具有细胞保护作用。动物模型研究表明，该生物碱具有抗心律失常、抗血栓、抗炎和保肝作用。原阿片碱的生物活性可能与其抑制钙、钠和钾通道的能力有关。(PMID:15588728; PMID:21419197; L2104)

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相互作用
本研究在多种动物中探讨了原阿片碱对实验性心律失常的抗心律失常作用。原阿片碱可提高大鼠诱发室性心动过速 (VP)、室性心动过速 (VT) 和室颤 (VF) 所需的乌头碱剂量，并增加豚鼠诱发室性心动过速 (VP) 所需的毒毛旋花子苷 (毒毛旋花子苷K) 剂量。此外，原阿片碱还能缩短大鼠乌头碱诱发的中枢性心律失常的持续时间以及苯肾上腺素（肾上腺素）诱发的心律失常的持续时间。它还能预防大鼠和小鼠分别发生由静脉注射氯化钙和吸入氯仿诱发的心律失常。在兔中，该药物可提高室颤 (VFT) 的发生率。研究结论表明，原阿片碱具有抗心律失常作用，并可能直接抑制心肌细胞的快速电活动。Lu Z 等；中国药学杂志；30：81-84（参考文献 9）（1995）

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解毒剂和急救处理
/SRP:/ 立即急救：确保已进行充分的去污处理。如果患者停止呼吸，应立即开始人工呼吸，最好使用按需呼吸机、球囊面罩或简易呼吸面罩，并按照培训内容进行操作。必要时进行心肺复苏。立即用流动清水冲洗受污染的眼睛。不要催吐。如果发生呕吐，应将患者身体前倾或置于左侧卧位（如果可能，头部向下），以保持呼吸道通畅并防止误吸。保持患者安静并维持正常体温。就医。

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非人类毒性值
豚鼠腹腔注射LD50：116 mg/kg
豚鼠口服LD50：237 mg/kg
小鼠腹腔注射LD50：482 mg/kg

[1]. Protopine from Corydalis ternata has anticholinesterase and antiamnesic activities. Planta Med. 1999 Apr;65(3):218-21.

[2]. Protopine triggers apoptosis via the intrinsic pathway and regulation of ROS/PI3K/Akt signalling pathway in liver carcinoma. Cancer Cell Int. 2021 Jul 27;21(1):396.

[3]. Protopine inhibits serotonin transporter and noradrenaline transporter and has the antidepressant-like effect in mice models. Neuropharmacology. 2006 Jun;50(8):934-40.

[4]. Protective effect of protopine on the focal cerebral ischaemic injury in rats. Basic Clin Pharmacol Toxicol. 2007 Aug;101(2):85-9.

作用机制
氯化钙（0.2克/千克，静脉注射）可诱发大鼠心室颤动2秒，并导致动物死亡。盐酸原阿片（10毫克/千克）可将心室颤动延长至186秒。此外，在所有接受治疗的动物中，给药后3分钟内，原阿片均可恢复窦性心律。

C20H20CLNO5

389.8295

389.103

6164-47-2

Protopine;130-86-9

22543

PRISMS FROM ALC

547.5ºC at 760 mmHg

208ºC

284.9ºC

3.297

57.23

1

6

0

27

542

0

Cl.CN1CCC2=CC3OCOC=3C=C2C(=O)CC2=C(C3OCOC=3C=C2)C1

NWNVDSJZGYDVQW-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C20H19NO5.ClH/c1-21-5-4-13-7-18-19(25-10-24-18)8-14(13)16(22)6-12-2-3-17-20(15(12)9-21)26-11-23-17;/h2-3,7-8H,4-6,9-11H2,1H3;1H

15-methyl-7,9,19,21-tetraoxa-15-azapentacyclo[15.7.0.04,12.06,10.018,22]tetracosa-1(17),4,6(10),11,18(22),23-hexaen-3-one;hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。