Endothall primarily targets protein phosphatase 2A (PP2A) and protein phosphatase 1 (PP1), two key serine/threonine phosphatases involved in diverse cellular processes including cell cycle progression, signal transduction, and apoptosis. It demonstrates a 5-fold greater preference for PP2A over PP1, with an IC50 ratio (PP1/PP2A) of approximately 55.6:1. The compound binds to the catalytic subunits of these phosphatases, thereby inhibiting their dephosphorylation activity and disrupting downstream signaling pathways.

斑蝥素的结构类似物中毒性最小但仍能抑制PP2A的是内皮素（endothall），一种有机酸[2]。这些新的大鼠肝细胞癌细胞系可能有助于未来对PP2A抑制剂进行生物化学和药理学研究，以及评估肝细胞癌的新疗法，因为内皮素能选择性地抑制肝细胞癌（HCC）的生长。相比之下，在原代培养中呈指数增长的新生大鼠肝细胞（IC50=6.2 µg/mL）、大鼠DHD/K12结肠癌细胞（IC50=3.6 µg/mL）或人HT-29结肠癌细胞（IC50=4.9 µg/mL）对内皮素的敏感性较低。对内皮素最敏感的肝细胞癌细胞系是HR-2、HR-3、HR-4和Zajdela[2]。内皮素（Endothall）通过抑制肝癌细胞系在体外培养中的增殖，导致其有丝分裂停滞并最终导致细胞死亡，其抑制作用强于对正常肝细胞或结肠癌细胞的抑制作用。尤其是在G2/M期，内皮素诱导的细胞周期阻滞呈剂量和时间依赖性[2]。内皮素（3 µg/mL）通过抑制G2/M期细胞周期来阻止细胞凋亡[2]。体外实验表明，内皮素对PP2A具有强效抑制作用，IC50约为90 nM，而斑蝥素对同一靶点的IC50为74.3 nM。一些研究报道内皮素对PP2A具有中等程度的抑制作用，IC50为970 nM，表明其对磷酸酶活性的抑制率接近50%。在3 µg/mL的浓度下，内皮素通过抑制G2/M期细胞周期来阻止细胞凋亡。在基于细胞的检测中，该化合物对磷酸酶活性表现出时间和剂量依赖性的抑制作用。

在小鼠中，内灭菌素的急性LD50为14 mg/kg[2].

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体内研究主要评估了内灭菌素在动物模型中的除草活性和毒理学特性。据报道，内灭菌素在小鼠中的急性LD50为14 mg/kg。内灭菌素硫酐已被证明可在体内抑制蛋白磷酸酶1和2A，从而验证了该化合物在生物体内的作用机制。每年在湖泊中以1 mg/L的浓度施用内灭菌素，可降低卷叶眼子菜的出现频率和干生物量。

Endothall 的体外酶抑制试验通常包括测量纯化的 PP1 或 PP2A 在不同浓度化合物存在下对合成磷酸肽底物的去磷酸化作用。反应通过将磷酸酶加入含有底物和 Endothall 的缓冲液中启动，在 30°C 下孵育 15-30 分钟，然后加入终止液终止反应。磷酸盐的释放量采用孔雀绿或类似的显色法进行定量，IC50 值根据剂量-反应曲线计算得出。

对于体外细胞实验，将细胞（例如 HeLa 或其他癌细胞系）培养于合适的培养基中，并用不同浓度（通常为 0.1-100 µM）的 Endothall 处理 24-72 小时。使用 MTT 或 CCK-8 法评估细胞活力。使用碘化丙啶染色后，通过流式细胞术进行细胞周期分析。使用 Annexin V-FITC/PI 双染法评估细胞凋亡。使用含有合成底物的磷酸酶活性检测试剂盒测定细胞裂解液中的蛋白磷酸酶活性。

体内动物试验通常采用灌胃、腹腔注射或静脉注射的方式，以1-50 mg/kg的剂量向小鼠或大鼠施用Endothall。急性毒性试验监测给药后14天内的存活率和临床症状，以确定LD50值。在药效试验中，用Endothall处理动物，并在不同时间点采集组织样本，用于分析磷酸酶活性、组织病理学和生物标志物表达。除草剂药效则在水生植物模型中进行评估。

吸收、分布和排泄
可能经皮肤吸收……给大鼠口服碳标记的内源性除草剂后，超过90%的放射性物质从粪便中回收。其余部分从尿液和呼出气体中回收。给药剂量几乎在48小时内完全回收。当蓝鳃太阳鱼在水族箱中暴露于含有2 ppm碳标记内源性除草剂的水中时，鱼吸收的除草剂不到1%。碳标记浓度最高的是内脏，最低的是肌肉。内源性除草剂也通过消化道被鱼吸收。……给两只哺乳期大鼠服用标记的内源性除草剂，以确定其是否会排泄到乳汁中。在分娩前连续五天，每天口服0.2毫克内源性除草剂（溶于10%蔗糖溶液）。产后，连续五天每天给母鼠口服0.4毫克甲胺磷（溶于10%蔗糖溶液）。处死幼鼠后，在任何组织或胃内容物中均未检测到放射性，表明甲胺磷不会分泌到哺乳母鼠的乳汁中。
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代谢/代谢物
本文综述了广泛使用的除草剂甲胺磷在各种生物体和系统中的代谢途径。有限的研究结果表明，植物和鱼类吸收的甲胺磷可完全代谢，但在哺乳动物体内，它主要以结合态排出体外。

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内托沙尔的药代动力学特性已在多种动物中得到表征。口服后，内托沙尔被迅速吸收并分布于全身。它主要以原形经尿液排出，在啮齿动物体内的消除半衰期相对较短，仅为数小时。该化合物具有中等程度的蛋白结合率，其生物利用度因给药途径而异。组织分布研究表明，该化合物会在肝脏和肾脏中蓄积。其代谢有限，母体化合物是主要的循环药物。

相互作用
内皮素和异丙基苯基氨基甲酸酯的复方制剂 Murbetol 的除草活性比单独使用任一成分高数百倍。乙醇和其他小分子醇类以剂量依赖的方式抑制 L1 介导的细胞黏附和神经突生长。乙醇对 L1 介导的黏附的抑制作用可能导致胎儿酒精综合征。尽管乙醇抑制 L1 黏附的药理机制已被充分阐明，并且已鉴定出拮抗分子，但其细胞机制仍不清楚。从同一稳定 L1 转染细胞系中鉴定出乙醇敏感和乙醇不敏感的细胞系，表明其他细胞因子调节乙醇的作用。本研究探讨了细胞内信号分子在乙醇抑制 L1 黏附中的作用。 L1介导的功能受磷酸化事件调控，已知多种激酶可磷酸化L1，包括酪蛋白激酶II (CK2)、ERK 1/2和p90rsk。在稳定表达人L1的乙醇敏感型NIH/3T3细胞(2A2-L1)和经BMP-7处理的NG108细胞中，CK2活性的药理学抑制阻断了乙醇对L1黏附的抑制作用。然而，乙醇对CK2活性或亚基定位没有直接影响。接下来，我们研究了蛋白磷酸酶抑制剂对乙醇敏感性的影响。用冈田酸预处理2A2-L1细胞和经BMP-7处理的NG108细胞，可显著降低乙醇对L1黏附的抑制作用，且呈剂量依赖性(IC50 = 10 nM)。另一种磷酸酶抑制剂内皮素也观察到了类似的效果。在没有乙醇的情况下，两种药物均未对L1细胞黏附产生任何影响。CK2和磷酸酶活性对于乙醇敏感性的必要性可能源于PP2A磷酸酶受CK2激活这一事实。因此，抑制CK2也可能降低PP2A活性。乙醇对CK2活性没有直接影响这一事实支持了以下观点：除了CK2之外，另一种蛋白质（PP2A）可能是L1细胞黏附对乙醇敏感性的更直接调节因子。总之，这些结果表明，乙醇对L1细胞黏附的抑制作用可能受细胞内信号通路调控，并为开发乙醇拮抗剂提供了新的途径。磷酸二酯酶5A抑制剂在缺血/再灌注损伤和心脏肥大中的有益作用已得到充分证实。抑制心脏Na+/H+交换器（NHE-1）也对这些疾病有益，研究表明这两种治疗策略之间可能存在联系。为了进一步了解磷酸二酯酶 5A 抑制剂降低 NHE-1 活性的细胞内通路，我们利用分离的猫心肌细胞进行了实验。在无碳酸氢盐条件下，通过细胞内 pH 值从持续酸性负荷中恢复的速率来评估 NHE-1 活性。使用西地那非 (1 μmol/L) 抑制磷酸二酯酶 5A 并不影响基础细胞内 pH 值；然而，它确实降低了酸性负荷后的质子外流 (J(H)；单位为毫摩尔/升/分钟)（对照组为 6.97 ± 0.43，西地那非组为 3.31 ± 0.58；P < 0.05）。当使用 100 nmol/L 冈田酸同时阻断蛋白磷酸酶 1 和 2A 时，西地那非的作用被逆转（质子外流：6.77 ± 0.82）。相反，选择性抑制蛋白磷酸酶2A（1 nmol/L 冈田酸或100 μmol/L 内皮素）并未产生相同的效果（分别为3.86 ± 1.0和2.61 ± 1.2），表明西地那非诱导的NHE-1抑制仅涉及蛋白磷酸酶1。此外，西地那非可阻止酸中毒诱导的NHE-1磷酸化水平升高，而不影响细胞外信号调节激酶1/2-p90 (RSK)通路的激活。我们的结果表明，在酸负荷后细胞内pH恢复过程中，磷酸二酯酶5A抑制剂通过蛋白磷酸酶1依赖性通路降低NHE-1磷酸化水平，从而降低NHE-1活性。

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非人类毒性值
大鼠口服LD50：酸性（技术级）38-51 mg/kg
大鼠口服LD50：钠盐（19.2%溶液）182-197 mg/kg
大鼠口服LD50：氨基盐（66.7%制剂）206 mg/kg
雄性大鼠口服LD50：57 mg/kg
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由于Endothall被用作除草剂，其毒性特征已得到广泛研究。在小鼠中，急性口服LD50为14 mg/kg。内吞沙星是一种已知的动物毒素，高剂量可引起胃肠道不适、肾毒性和神经毒性。长期暴露研究表明，内吞沙星会对体重、器官重量以及肝脏和肾脏的组织病理学产生影响。在标准检测中，该化合物不被认为具有遗传毒性或致癌性。

[1]. Protein phosphatases decrease their activity during capacitation: a new requirement for this event. PLoS One. 2013 Dec 2;8(12):e81286.

[2]. Hepatocellular carcinoma cell lines from diethylnitrosamine phenobarbital-treated rats. Characterization and sensitivity to endothall, a protein serine/threonine phosphatase-2A inhibitor. Hepatology. 1999 May;29(5):1406-17.

单水合物是一种无色、非腐蚀性的晶体，可用作选择性除草剂。作用机制由环腺苷酸（PKA）和钙调蛋白依赖性蛋白激酶II（CaMKII）介导的磷酸化激活神经末梢的组胺合成，但抑制组胺合成的磷酸酶尚未被研究。本研究表明，蛋白磷酸酶2A（PP2A）/蛋白磷酸酶1（PP1）抑制剂海葵酸可以使含有组胺能神经末梢的大鼠皮层微晶体中的组胺合成增加至两倍。PP2A/PP1抑制剂calicline模拟了这一效应，但其无活性类似物1-去海葵酸则没有。其他磷酸酶抑制剂，如内源性激肽（PP2A）、氯氟氰菊酯和环孢素A（蛋白磷酸酶2B，PP2B），效果要低得多。海葵酸的作用似乎是通过激活组胺合成酶——组氨酸脱羧酶介导的。PKA介导的组胺合成激活降低了海葵酸的EC50值和最大效应。相反，CaMKII介导的组胺合成激活降低了海葵酸的最大效应，但增加了其EC50值。总之，我们的结果表明，脑内组胺合成受到磷酸酶PP2A和PP1的调控，可能还受到PP2B和蛋白激酶的影响。...我们使用蛋白磷酸酶（PP）抑制剂和原代培养的大鼠小脑胶质细胞研究了PP活性在胶质细胞去毒外源性过氧化氢（H2O2）中的作用。海洋毒素奥卡酸（OKA）是PP1和PP2A的强效抑制剂，浓度依赖性地诱导星形胶质细胞退化，并显著增加过氧化氢自由基的生成。亚毒性剂量的OKA暴露显著增强了外源性H2O2的毒性。在没有毒素的情况下，估计在3小时后使星形胶质细胞存活率降低50%的H₂O₂浓度为720 ± 40 μM；而在有毒素的情况下，这一浓度估计为85 ± 30 μM。过氧化物酶抑制剂卡柳克林A和内毒酸也增强了H₂O₂对小脑星形胶质细胞的毒性。OKA对胶质细胞的过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶产生了时间依赖性的抑制，在3小时后将这些酶的活性降低了约50%，而其他酶的活性未受影响。此外，OKA降低了细胞内总谷胱甘肽含量，并将氧化谷胱甘肽的含量增加到总谷胱甘肽的约25%。接受OKA处理的星形胶质细胞从培养基中清除H₂O₂的速度约为对照组的两倍。我们的结果表明，PP活性在抗氧化机制中发挥了重要作用，保护星形胶质细胞免受H₂O₂损伤。

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内毒酸主要作为水生除草剂和脱叶剂，其除草活性归因于对植物中蛋白磷酸酶的抑制。该化合物已用于灌溉渠、湖泊和池塘的杂草控制。在研究环境中，内毒酸作为药理工具用于研究PP1和PP2A在细胞周期调控、凋亡和信号转导中的功能。它未被批准用于人类治疗。该化合物仅作为研究级化学品用于实验室研究。

C8H10O5

186.16

186.053

145-73-3

129-67-9 (di-hydrochloride salt) ; 17439-94-0 (di-ammonium salt) ; 2164-07-0 (di-potassium salt)

3225

White to off-white solid powder

1.431

350ºC(e)

Converted to anhydride at 90 °C ; Colorless crystals. MP: 144 °C /Endothall monohydrate/

190.5ºC

2.88E-09mmHg at 25°C

1.568

-0.5

83.83

2

5

2

13

235

0

C1C[C@H]2[C@@H]([C@@H]([C@@H]1O2)C(=O)O)C(=O)O

GXEKYRXVRROBEV-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C8H10O5/c9-7(10)5-3-1-2-4(13-3)6(5)8(11)12/h3-6H,1-2H2,(H,9,10)(H,11,12)

7-oxabicyclo[2.2.1]heptane-2,3-dicarboxylic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。