| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
EC50: 5 nM (GLP-1 receptor)[2]
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在 HEK293A 细胞中，TT-OAD2 (0-10 μM) 浓度依赖性抑制 GLP-1 和胃酸调节素介导的 cAMP、钙、pERK1/2 和 β-arrestin 反应 [1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
用 TT-OAD2（3 mg/kg；静脉注射；雄性人 GLP-1 受体敲入和敲除小鼠）治疗的人源化 GLP-1R 敲入 (KI) 和 GLP-1R 敲除 (KO) 小鼠产生血浆急性 IVGTT 中的胰岛素[1]。
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| 酶活实验 |
NanoBRET配体结合[1]
用Nluc-hGLP-1R瞬时转染HEK293A细胞。转染后48小时，收集细胞并提取质膜，如前所述31。细胞膜（每孔1μg）在测定缓冲液（1×HBSS、10 mM HEPES、0.1%（w/v）BSA、1×P8340蛋白酶抑制剂混合物、1 mM DTT和0.1 mM PMSF，pH 7.4）中与呋马嗪（从储备中稀释1:1000）一起孵育。罗丹明X-Ex4（Rox-Ex4）在NanoBRET结合试验中用作荧光配体。使用PHERAstar以10秒的间隔（25°C）测量Nluc-hGLP-1R和Rox-Ex4之间的BRET信号，在添加Rox-Ex4之前取2分钟的基线（Kd浓度3.16nM，先前确定），测量持续15分钟，然后添加浓度逐渐增加的TT-OAD2或未标记的Ex4作为对照。对基线和车辆处理样本的数据进行了校正。 cAMP动力学研究[1] HEK293A细胞（确认支原体阴性）以优化的比例用Epac cAMP传感器和人GLP-1R转染。转染后48小时测量配体介导的cAMP产生。简而言之，用测定缓冲液（1×HBSS，10 mM HEPES，0.1%BSA，pH 7.4）代替培养基。在配体浓度增加或不存在的情况下，使用PHERAstar平板读数器（BMG LabTech）以1分钟的间隔测量BRET信号。毛喉素（100μM）用作阳性对照，数据归一化为毛喉素反应。 ERK1/2磷酸化测定[1] 将稳定表达GLP-1R的HEK293细胞（确认支原体阴性）以每孔30000个细胞的密度接种到96孔培养板中，并在37°C、5%CO2中孵育过夜。如前所述，使用AlphaScreen ERK1/2 SureFire方案测定受体介导的pERK1/2。将数据归一化为6分钟时测定的10%FBS引起的最大反应。在一系列实验中，在肽反应测定前30分钟加入赋形剂或浓度逐渐增加的TT-OAD2。 |
| 细胞实验 |
Ca2+动员试验[1]
将稳定表达GLP-1R的HEK293细胞（经确认支原体阴性）以每孔30000个细胞的密度接种到96孔培养板中，在37°C的5%CO2中孵育过夜，并如前所述测定受体介导的细胞内钙动员65。加入配体后立即测定荧光，激发波长设置为485 nm，发射波长设置为520 nm，每1.36秒读取一次读数，持续120秒。峰值用于绘制浓度响应曲线。数据被标准化为100μM ATP引发的最大反应。在一系列实验中，在肽反应测定前30分钟加入载体或浓度逐渐增加的TT-OAD2。 β-arrestin募集试验[1] HEK293细胞（确认支原体阴性）以1:4的比例用GLP-1R-Rluc8和β-arrestin1-Venus瞬时转染，以每孔30000个细胞的密度接种到96孔培养板中，并在含有5%FBS的DMEM中在37°C和5%CO2中孵育48小时。如前所述，进行β-arrestin招募66。在一系列实验中，在肽反应测定前30分钟加入载体或浓度逐渐增加的TT-OAD2。 cAMP积累测定[1] 将HEK293细胞（确认支原体阴性）以每孔30000个细胞的密度接种到96孔培养板中，并在含有5%FBS的DMEM中在37°C和5%CO2中孵育过夜。如前所述，在磷酸二酯酶抑制剂3-异丁基-1-甲基黄嘌呤65的存在下进行cAMP检测。使用平行进行的cAMP标准曲线将所有值转换为cAMP浓度，随后将数据归一化为每个细胞系中100μM毛喉素的反应。在一系列实验中，在肽反应测定前30分钟加入载体或浓度逐渐增加的TT-OAD2。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 雄性人GLP-1受体敲入和敲除小鼠（6-11月龄），进行静脉（iv）葡萄糖耐量试验[1]
剂量： 3 mg/kg 给药途径： 静脉（iv）注射（单次给药） 实验结果： 诱导血浆胰岛素水平。 体内静脉葡萄糖耐量试验[1] 对雄性人GLP-1受体敲入和敲除小鼠（均为C57/BL6背景）进行静脉葡萄糖耐量试验。将导管置于6-11月龄小鼠的右侧颈动脉和左侧颈静脉。约一周后，小鼠（每组n=4-5）禁食过夜，待小鼠适应试验笼后取出导管。在葡萄糖负荷（0.5 g kg−1）前 1 分钟，分别静脉注射载体（5% DMSO、20% Captisol 溶于 NaHPO4，pH 2，1 ml kg−1）、GLP-1(7-36)NH2（10 μg kg−1）、GIP(1-42)（25 μg kg−1）或 OAD2（3 mg kg−1）。分别于 -10、0、2、4、6、10、20 和 30 分钟采集血样，通过血糖仪测定血糖浓度并测定血浆胰岛素水平。[1] |
| 参考文献 |
[1]. Zhao P, et al. Activation of the GLP-1 receptor by a non-peptidic agonist. Nature. 2020 Jan;577(7790):432-436.
[2]. Transtech Pharma, et al. Substituted azoanthracene derivatives, pharmaceutical compositions, and methods of use thereof. WO2010114824A1. |
| 其他信息 |
B类G蛋白偶联受体是治疗包括糖尿病和肥胖症在内的慢性疾病的主要靶点1。活性受体的结构显示，肽类激动剂与受体核心深处结合，导致胞外环3和跨膜螺旋6、7的顶部向外移动，跨膜螺旋1向内移动，胞外环2发生重组，跨膜螺旋6的胞内侧向外移动，最终导致G蛋白相互作用和激活2-6。本文解析了非肽类激动剂TT-OAD2与胰高血糖素样肽-1 (GLP-1) 受体结合的结构。我们的结构发现了一个未曾预料到的非肽类激动剂结合口袋，在该口袋中，胞外环3和跨膜螺旋6、7的重组独立于配体与深层跨膜结构域口袋的直接相互作用而发生。 TT-OAD2 表现出偏向性激动作用，其 G 蛋白激活和信号传导动力学与肽类激动剂截然不同。在结构中，TT-OAD2 突出于受体核心之外，与脂质或去垢剂相互作用，这解释了其独特的激活动力学，而这种动力学可能有助于该系列化合物的临床疗效。这项工作改变了我们对驱动 B 类受体激活事件的理解。[1]
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| 分子式 |
C50H47CL2N3O6
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|---|---|
| 分子量 |
856.830691576004
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| 精确质量 |
855.284
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| CAS号 |
1246826-07-2
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| 相关CAS号 |
TT-OAD2;2382719-60-8
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| PubChem CID |
58327143
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| LogP |
8.2
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| tPSA |
110Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
13
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| 重原子数目 |
61
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| 分子复杂度/Complexity |
1400
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| 定义原子立体中心数目 |
4
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| SMILES |
CC[C@@H](C1=CC=CC=C1)N2CC3=CC4=C(C=C3C[C@H]2C(=O)N[C@@H](CC5=CC=C(C=C5)C6=C(C(=NC=C6)C)C)C(=O)O)OC[C@@H](O4)C7=CC=C(C=C7)OCC8=CC(=C(C=C8)Cl)Cl
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| InChi Key |
DEDPYBWOUXWMOX-ZTAAISNPSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C50H47Cl2N3O6/c1-4-44(35-8-6-5-7-9-35)55-27-38-26-47-46(60-29-48(61-47)36-15-17-39(18-16-36)59-28-33-12-19-41(51)42(52)22-33)25-37(38)24-45(55)49(56)54-43(50(57)58)23-32-10-13-34(14-11-32)40-20-21-53-31(3)30(40)2/h5-22,25-26,43-45,48H,4,23-24,27-29H2,1-3H3,(H,54,56)(H,57,58)/t43-,44-,45-,48+/m0/s1
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| 化学名 |
(2S)-2-[[(3S,8S)-3-[4-[(3,4-dichlorophenyl)methoxy]phenyl]-7-[(1S)-1-phenylpropyl]-3,6,8,9-tetrahydro-2H-[1,4]dioxino[2,3-g]isoquinoline-8-carbonyl]amino]-3-[4-(2,3-dimethylpyridin-4-yl)phenyl]propanoic acid
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| 别名 |
(S)-2-((3S,8S)-3-(4-((3,4-Dichlorobenzyl)oxy)phenyl)-7-((S)-1-phenylpropyl)-2,3,6,7,8,9-hexahydro-[1,4]dioxino[2,3-g]isoquinoline-8-carboxamido)-3-(4-(2,3-dimethylpyridin-4-yl)phenyl)propanoic acid; TT-OAD2 free base; GLP-1 receptor agonist 5; SCHEMBL539630; CHEMBL3950796;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.1671 mL | 5.8355 mL | 11.6709 mL | |
| 5 mM | 0.2334 mL | 1.1671 mL | 2.3342 mL | |
| 10 mM | 0.1167 mL | 0.5835 mL | 1.1671 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
GEP12
Glucagon receptor antagonist-9
Glucagon receptor antagonist-11
Glucagon receptor antagonist-10
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