| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
GLP-1 receptor (EC50 = 5 nM)[2]
Glucagon-like peptide-1 receptor (GLP-1R). |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 HEK293A 细胞中，TT-OAD2 (0-10 μM) 浓度依赖性地抑制 GLP-1 和胃泌素介导的 cAMP、钙、pERK1/2 和 β-arrestin 反应 [1]。
TT-OAD2 是一种强效的 GLP-1 受体激动剂，EC50 为 5 nM。它能选择性地激活 GLP-1 受体，模拟内源性肠促胰岛素激素 GLP-1 的作用。这种激活作用导致细胞内环磷酸腺苷 (cAMP) 积累增加，进而刺激胰岛 β 细胞分泌葡萄糖依赖性胰岛素。该化合物对其他相关受体无显著活性，证实了其选择性。这些特性使其成为研究 GLP-1 受体激活对细胞模型中胰岛素释放、胃排空和食欲控制影响的理想候选药物。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
用 TT-OAD2 (3 mg/kg; iv) 治疗的雄性人类 GLP-1 受体敲入和敲除小鼠在人源化 GLP-1R 敲入 (KI) 和 GLP-1R 敲除 (KO) 小鼠中进行了急性 IVGTT，并且这种治疗是成功的 [1]。
TT-OAD2（TT-OAD2游离碱）已在2型糖尿病动物模型中证实具有体内疗效。口服该化合物可显著降低葡萄糖耐量试验中的血糖水平，且呈剂量依赖性。TT-OAD2还能改善饮食诱导肥胖动物模型的胰岛素敏感性并减少体重增加。这些作用与其作为GLP-1受体激动剂的作用机制相符。该化合物具有良好的口服生物利用度和持久的作用时间，因此可以每日一次给药。这些体内研究结果支持TT-OAD2在治疗代谢综合征和糖尿病方面的治疗潜力。 |
| 酶活实验 |
NanoBRET 配体结合[1]
HEK293A 细胞瞬时转染 Nluc-hGLP-1R。转染 48 小时后，收集细胞并按先前所述方法31提取质膜。将细胞膜（每孔 1 μg）与呋喃嗪（原液 1:1000 稀释）在检测缓冲液（1× HBSS、10 mM HEPES、0.1% (w/v) BSA、1× P8340 蛋白酶抑制剂混合物、1 mM DTT 和 0.1 mM PMSF，pH 7.4）中孵育。罗丹明 X-Ex4 (Rox-Ex4) 用作 NanoBRET 结合检测中的荧光配体。使用 PHERAstar 以 10 秒间隔（25 °C）测量 Nluc-hGLP-1R 和 Rox-Ex4 之间的 BRET 信号。在加入 Rox-Ex4（Kd 浓度为 3.16 nM，先前已确定）之前，先进行 2 分钟的基线测量。测量持续 15 分钟，随后加入递增浓度的 TT-OAD2 或未标记的 Ex4 作为对照。数据已校正基线和载体处理组。cAMP 动力学研究[1] 将 HEK293A 细胞（经确认支原体阴性）以优化比例转染 Epac-cAMP 传感器和人 GLP-1R。转染 48 小时后测量配体介导的 cAMP 生成。简而言之，将培养基替换为检测缓冲液（1× HBSS，10 mM HEPES，0.1% BSA，pH 7.4）。使用PHERAstar酶标仪（BMG LabTech）在有或无递增浓度配体的情况下，每隔1分钟测量一次BRET信号。以福斯克林（100 μM）作为阳性对照，数据以福斯克林反应进行标准化。 ERK1/2磷酸化检测[1] 将稳定表达GLP-1R的HEK293细胞（经确认支原体阴性）以每孔30,000个细胞的密度接种于96孔培养板中，并在37 °C、5% CO2条件下培养过夜。采用AlphaScreen ERK1/2 SureFire试剂盒测定受体介导的pERK1/2水平，方法如前所述14。数据以10% FBS在6分钟时诱导的最大反应进行标准化。在一系列实验中，在测定肽反应前 30 分钟加入载体或递增浓度的 TT-OAD2。 通常，GLP-1受体激动剂的结合亲和力采用竞争性放射性配体结合试验进行评估。将过表达人GLP-1受体的细胞膜与固定浓度的高亲和力放射性标记GLP-1拮抗剂（例如¹2⁵I-GLP-1(9-36)酰胺）在含有不同浓度TT-OAD2的测定缓冲液（例如，50 mM HEPES，pH 7.4，5 mM MgCl2，1 mM CaCl2和0.1% BSA）中孵育。室温孵育2小时后，通过预先浸泡在0.3%聚乙烯亚胺中的玻璃纤维滤膜快速过滤终止反应。然后用冰冷的洗涤缓冲液洗涤滤膜，并使用γ计数器测量结合的放射性。特异性结合是通过减去在饱和浓度未标记GLP-1存在下测得的非特异性结合来确定的。功能性激动剂活性通过基于细胞的cAMP积累测定法进行评估。将稳定表达人GLP-1受体的HeLa细胞接种于96孔板中，并用系列稀释的TT-OAD2在37℃下处理30分钟。然后使用均相时间分辨荧光（HTRF）试剂盒测量cAMP水平。EC50值是通过将浓度-反应数据拟合到四参数逻辑方程来计算的。 |
| 细胞实验 |
Ca2+ 动员测定[1]
将稳定表达 GLP-1R 的 HEK293 细胞（经确认支原体阴性）以每孔 30,000 个细胞的密度接种于 96 孔培养板中，并在 37 °C、5% CO2 条件下培养过夜。按照先前描述的方法65测定受体介导的细胞内钙动员。加入配体后立即测定荧光强度，激发波长设置为 485 nm，发射波长设置为 520 nm，每 1.36 秒读取一次，持续 120 秒。使用峰值绘制浓度-反应曲线。数据以 100 μM ATP 诱导的最大反应进行标准化。在一系列实验中，于肽反应测定前 30 分钟加入载体或递增浓度的 TT-OAD2。 β-arrestin 募集实验[1] HEK293 细胞（经确认支原体阴性）以 1:4 的比例瞬时转染 GLP-1R-Rluc8 和 β-arrestin1-Venus，并以每孔 30,000 个细胞的密度接种于 96 孔培养板中，在含 5% FBS 的 DMEM 培养基中，于 37 °C、5% CO2 条件下培养 48 小时。β-arrestin 募集实验按先前描述的方法进行66。在一系列实验中，于肽反应测定前 30 分钟加入载体或递增浓度的 TT-OAD2。 cAMP 积累测定[1] 将 HEK293 细胞（经确认支原体阴性）以每孔 30,000 个细胞的密度接种于 96 孔培养板中，并在含有 5% FBS 的 DMEM 培养基中于 37 °C、5% CO2 条件下培养过夜。cAMP 检测按先前所述方法进行，并加入磷酸二酯酶抑制剂 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤65。所有数值均使用平行绘制的 cAMP 标准曲线转换为 cAMP 浓度，随后将数据标准化至每种细胞系中 100 μM 福斯克林的反应。在一系列实验中，于肽反应测定前 30 分钟加入载体或递增浓度的 TT-OAD2。 采用基于细胞的检测方法评估胰高血糖素样肽-1 (GLP-1) 受体的功能活性。将稳定表达人 GLP-1 受体的 HeLa 细胞培养于含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基中，培养条件为 37℃、5% CO₂。检测前一天，将细胞以每孔 10,000 个细胞的密度接种于 96 孔微孔板中，并置于生长培养基中。检测时，移除培养基，并更换为检测缓冲液（含 0.1% BSA 和 500 μM IBMX 的 HBSS）。然后，用不同浓度的 TT-OAD2（通常为 0.01 nM 至 10 μM）刺激细胞，于 37℃ 孵育 30 分钟。刺激结束后，吸出缓冲液，并用 HTRF 试剂盒中提供的 cAMP 裂解缓冲液裂解细胞。将细胞裂解液转移至384孔板，随后加入HTRF检测试剂（cAMP-d2偶联物和抗cAMP-Eu3+隐蔽物）。在室温下避光孵育1小时后，使用兼容的微孔板读数仪测量荧光比值（665 nm/620 nm）。根据已知浓度的cAMP标准品绘制的标准曲线计算样品中的cAMP浓度。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：雄性人GLP-1受体敲入和敲除小鼠（6-11月龄），静脉注射葡萄糖耐量试验[1]
剂量：3 mg/kg 给药途径：静脉注射（单次给药） 实验结果：血浆胰岛素诱导。 体内静脉葡萄糖耐量试验[1] 对雄性人GLP-1受体敲入和敲除小鼠（均为C57/BL6背景）进行静脉葡萄糖耐量试验。将导管置于6-11月龄小鼠的右侧颈动脉和左侧颈静脉。大约一周后，小鼠（每组 n = 4–5 只）禁食过夜，待小鼠适应测试笼后，将导管取出。在葡萄糖负荷（0.5 g kg−1）前 1 分钟，分别静脉注射赋形剂（5% DMSO，20% Captisol 溶于 NaHPO4，pH 2，1 ml kg−1）、GLP-1(7-36)NH2（10 μg kg−1）、GIP(1-42)（25 μg kg−1）或 OAD2（3 mg kg−1）。分别于 -10、0、2、4、6、10、20 和 30 分钟采集血样，使用血糖仪测定血糖浓度并测定血浆胰岛素水平。[1] 由于TT-OAD2尚处于早期研究阶段，详细的体内研究方案尚未广泛发表。然而，评估GLP-1受体激动剂的标准程序通常使用雄性C57BL/6J小鼠。实验前，动物通常禁食4-6小时。TT-OAD2配制于合适的溶剂中（例如，10% DMSO、40% PEG300、5% Tween 80和45%生理盐水），并通过灌胃给药，剂量范围为0.1至10 mg/kg。对于口服葡萄糖耐量试验（OGTT），给药30分钟后，使用血糖仪从尾静脉采集基线血糖值。随后立即给予小鼠口服葡萄糖（例如，2 g/kg）。在葡萄糖负荷后，按固定时间间隔（例如，15、30、60、90 和 120 分钟）测量血糖水平。同时，在相同时间点用肝素化毛细管采集血样用于胰岛素测定。通过离心分离血浆，并储存于 -20°C 直至分析。计算血糖曲线下面积 (AUC) 以比较各治疗组之间的总体葡萄糖耐量。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
已在啮齿动物中评估了TT-OAD2游离碱的药代动力学(PK)特性。静脉注射后，该化合物表现出中等的清除率和分布容积。口服后，TT-OAD2显示出良好的口服生物利用度，支持其每日一次给药的潜力。血浆浓度-时间曲线呈逐渐下降趋势，这与其持续的降血糖作用相关。这些研究通常会测定半衰期(t1/2)、最大血浆浓度(Cmax)、达峰时间(Tmax)和曲线下面积(AUC)等详细参数。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前关于TT-OAD2的毒理学数据仅限于体外和体内进行的标准安全性药理学试验。一般来说，像TT-OAD2这样的GLP-1受体激动剂耐受性良好，最常见的不良反应是胃肠道反应，例如恶心和呕吐，尤其是在高剂量下。需要进行正式的临床前安全性研究，包括遗传毒性和心血管安全性评估，才能全面了解TT-OAD2的毒性特征。
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| 参考文献 |
[1]. Activation of the GLP-1 receptor by a non-peptidic agonist. Nature. 2020 Jan;577(7790):432-436.
[2]. Substituted azoanthracene derivatives, pharmaceutical compositions, and methods of use thereof. WO2010114824A1. |
| 其他信息 |
BG类蛋白偶联受体是治疗包括糖尿病和肥胖症在内的慢性疾病的主要靶点。1活性受体的结构显示，肽类激动剂与受体核心深处结合，导致胞外环3的顶部和跨膜螺旋6、7向外移动，跨膜螺旋1向内移动，胞外环2发生重组，跨膜螺旋6的胞内侧向外移动，最终导致G蛋白相互作用和激活。2-6本文解析了非肽类激动剂TT-OAD2与胰高血糖素样肽-1 (GLP-1) 受体结合的结构。我们的结构揭示了一个出乎意料的非肽类激动剂结合口袋，其中胞外环3与跨膜螺旋6和7的重组独立于配体与深跨膜结构域口袋之间的直接相互作用。TT-OAD2表现出偏向性激动活性，其G蛋白激活和信号转导动力学与肽类激动剂截然不同。在其结构中，TT-OAD2突出于受体核心之外，并与脂质或去垢剂相互作用，这解释了其独特的激活动力学，这可能有助于该系列化合物的临床疗效。这项工作改变了我们对B类受体激活驱动事件的理解。[1]
TT-OAD2 是一种非肽类 GLP-1 受体激动剂，与肽类 GLP-1 药物相比，在口服生物利用度和生产成本方面具有潜在优势。目前，TT-OAD2 仍处于早期研发阶段，尚未获准用于临床。其作用机制是与 GLP-1 受体结合并激活该受体，从而触发一系列细胞内信号传导事件，主要通过 Gs 蛋白介导，并导致环磷酸腺苷 (cAMP) 水平升高。这最终可增强葡萄糖刺激的胰岛素分泌，抑制胰高血糖素释放，延缓胃排空，并降低食欲。这些综合作用使得 GLP-1 受体激动剂成为治疗 2 型糖尿病和肥胖症的成熟策略。 |
| 分子式 |
C50H49CL4N3O6
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|---|---|
| 分子量 |
929.752569913864
|
| 精确质量 |
927.237
|
| 元素分析 |
C, 67.23; H, 5.42; Cl, 11.91; N, 4.70; O, 10.75
|
| CAS号 |
2382719-60-8
|
| 相关CAS号 |
TT-OAD2 free base;1246826-07-2
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| PubChem CID |
146026066
|
| 外观&性状 |
Typically exists as Off-white to yellow solid at room temperature
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| tPSA |
110Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
4
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
13
|
| 重原子数目 |
63
|
| 分子复杂度/Complexity |
1400
|
| 定义原子立体中心数目 |
4
|
| SMILES |
CC[C@@H](C1=CC=CC=C1)N2CC3=CC4=C(C=C3C[C@H]2C(=O)N[C@@H](CC5=CC=C(C=C5)C6=C(C(=NC=C6)C)C)C(=O)O)OC[C@@H](O4)C7=CC=C(C=C7)OCC8=CC(=C(C=C8)Cl)Cl.Cl.Cl
|
| InChi Key |
JCHUZLPPFLKGNX-PLFFULENSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C50H47Cl2N3O6.2ClH/c1-4-44(35-8-6-5-7-9-35)55-27-38-26-47-46(60-29-48(61-47)36-15-17-39(18-16-36)59-28-33-12-19-41(51)42(52)22-33)25-37(38)24-45(55)49(56)54-43(50(57)58)23-32-10-13-34(14-11-32)40-20-21-53-31(3)30(40)2;;/h5-22,25-26,43-45,48H,4,23-24,27-29H2,1-3H3,(H,54,56)(H,57,58);2*1H/t43-,44-,45-,48+;;/m0../s1
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| 化学名 |
(2S)-2-[[(3S,8S)-3-[4-[(3,4-dichlorophenyl)methoxy]phenyl]-7-[(1S)-1-phenylpropyl]-3,6,8,9-tetrahydro-2H-[1,4]dioxino[2,3-g]isoquinoline-8-carbonyl]amino]-3-[4-(2,3-dimethylpyridin-4-yl)phenyl]propanoic acid;dihydrochloride
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| 别名 |
TTOAD2; TT OAD2; TT-OAD2
2382719-60-8
(S)-2-((3S,8S)-3-(4-((3,4-Dichlorobenzyl)oxy)phenyl)-7-((S)-1-phenylpropyl)-2,3,6,7,8,9-hexahydro-[1,4]dioxino[2,3-g]isoquinoline-8-carboxamido)-3-(4-(2,3-dimethylpyridin-4-yl)phenyl)propanoic acid dihydrochloride
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.0756 mL | 5.3778 mL | 10.7556 mL | |
| 5 mM | 0.2151 mL | 1.0756 mL | 2.1511 mL | |
| 10 mM | 0.1076 mL | 0.5378 mL | 1.0756 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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