GLP-1; glucagon receptor/GLP-1 receptor (GCGR/GLP-1R)

Survodutie（BI-456906）是一种强效、选择性的体外GCGR/GLP-1R双重激动剂[1]
为了确定肽修饰对Survodutie（BI-456906）与GCGR和GLP-1Rs结合的影响，我们应用了一系列功能测定来体外表征BI 456906。BI 456906在CHO-K1细胞中对GLP-1R和GCGR的功能效力（EC50）分别为0.33和0.52 nM，与天然配体GLP-1（60 pM）和胰高血糖素（20 pM）相比，效力低约10倍（图1B）。在胰岛素瘤细胞系MIN6中评估了内源性小鼠GLP-1R的EC50（图1B）；BI 456906的EC50为0.36nM，GLP-1为60pM。基于原代大鼠肝细胞中cAMP的累积测量和糖原合成的功能抑制，在原代小鼠、大鼠、食蟹猴和人肝细胞中确定了BI 456906激活内源性GCGR的能力（图1B）。
在0.5%或100%人或小鼠血浆存在的情况下，白蛋白结合半衰期延长对Survodutide（BI-456906）受体效力的影响得到了表征，并与内源性受体配体和其他肠促胰岛素激动剂进行了比较（图1C）。在0.5%的人和小鼠血浆中，BI 456906显示出与内源性GLP-1相似的效力。对于GCGR，在0.5%的人和小鼠血浆中，BI 456906的效力比内源性胰高血糖素（分别为47和30 pM）低6倍（分别为0.29和0.17 nM）（图1C）。当在100%人和小鼠血浆存在的情况下评估效力时，BI 456906对人GLP-1R和人GCGR的效力分别为1.0和1.6 nM，8.3和16 nM。与100%人血浆相比，100%小鼠血浆中的效力变化更高，表明BI 456906与人类相比对小鼠血浆蛋白的亲和力更强。BI 456906和长效GLP-1R激动剂semaglutide在小鼠血浆中的药代动力学特征支持了对小鼠血浆蛋白亲和力的增加，与semaglutid相比，BI 4569006的终末半衰期更长（表S1）。
BI 456906作用的功能相关性已被证实可增强小鼠和大鼠胰岛中的GSIS，这与天然GLP-1和长效GLP-1R激动剂利拉鲁肽相似（图1D、E、S1a和b）。在移植的人胰岛中，BI 456906显示出与利拉鲁肽相似的第一和第二阶段胰岛素分泌反应（图1F）。

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Survodutide（BI-456906）驱动肝细胞的转录变化，为胰高血糖素受体激动作用提供了新的机制见解[1]
图3所示研究中的肝脏进行了大量mRNA测序，以鉴定受Survodutide（BI-456906）剂量依赖性调节的基因，但不受semaglutide的调节，因此不被认为是体重减轻程度的次要因素。总共有93个mRNAs符合这些标准（图5A和S7）。当根据其功能和生化相关性进行分组时，与甲硫氨酸循环（图5B和C）、G蛋白偶联受体（GPCR）信号传导（图5D-F）、氧化磷酸化（图5G和H）、胆固醇代谢（图5I-K）以及细胞周期和分化（图5L-N）相关的mRNA出现了转录变化。
GCGR的激活由于其分解代谢作用而改变了血浆氨基酸浓度。因此，我们测量了GLP-1R KO小鼠样本中的血浆氨基酸浓度（图2C）和亚慢性体重降低研究（图3）。在这两项研究中，与赋形剂和semaglutide相比，使用Survodutide（BI-456906）治疗导致血浆氨基酸水平呈剂量依赖性降低（图6A-G和S8），表明GCGR参与。这种效应对丙氨酸、瓜氨酸、谷氨酰胺、鸟氨酸、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸都有显著影响。此外，氨基酸代谢酶的转录物在BI 456906治疗下呈剂量依赖性变化（下调Ddah1，上调Asns、Ass1、Gls2、Got1和Sds；图6H-M）。我们将基因Sds、Gls2和Got1的转录变化与丝氨酸和谷氨酰胺的血浆浓度相关联（图6N-P），并将93个基因集与肝脏胆固醇和甘油三酯浓度相关联。这些分析显示了显著的负相关，而塞马谷肽没有观察到这种负相关，这加强了血浆氨基酸变化归因于BI 456906在肝脏中的GCGR激动活性的结论（图6N-P）。

单次给药后，Survodutide（BI-456906）在体内与胰高血糖素样肽-1受体结合，以减少食物摄入，提高葡萄糖耐量，抑制胃排空[1]
在单次给药后，在瘦小鼠中测试了BI 456906与GLP-1R结合的急性效力；将BI 456906减少食物摄入、改善葡萄糖耐量和抑制胃排空的能力与semaglutide进行比较。BI 456906（图2A）和semaglutide（图2B）在WT中剂量依赖性地减少了急性食物摄入量，但在GLP-1R KO小鼠中没有减少（图2C），表明BI 45-906的效力较低（图2I）。同样，BI 456906和semaglutide都改善了WT的腹腔内和口服葡萄糖耐量（图2D、E和S2），但在GLP-1R KO小鼠中没有改善（腹腔内，图2F、S2c；口服，图S2h）。BI456906（图2G）和semaglutide（图2H）均观察到对乙酰氨基酚偏移减少，这是抑制胃排空的一种措施，与BI 456906相比，semaglutid的效力更高，BI 4569006仅在100和300 nmol/kg的较高剂量下有效。
总体而言，BI 456906在减少食物摄入、改善葡萄糖耐量和延迟胃排空方面的疗效与塞马谷肽相似，但在GLP-1R上的效力低约10至20倍（图2I）。这与BI 456906在100%小鼠血浆中CRE-Luc细胞中测定的人GLP-1R和GCGR的体外效力较低（1.6 nM与0.098 nM相比；图1C）相一致，表明BI 45-906在小鼠血浆中的血浆蛋白结合明显更高。

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Survodutide（BI-456906）在饮食诱导的肥胖小鼠中，与最大有效剂量的semaglutide相比，具有更大的减肥功效[1]
对DIO小鼠重复QD SC给药BI 456906或semaglutide后，在第28天，BI456906以30 nmol/kg的剂量将体重从基线剂量依赖性地降低了32%（图3A）。在最大有效剂量为20 nmol/kg（25%）和100 nmol/kg时，30 nmol/kg BI 456906的减肥功效大于塞马谷肽，与20 nmol/千克剂量相比，差异具有显著性，但与100 nmol/千克相比没有差异。与赋形剂治疗的小鼠相比，BI 459906和塞马谷胺治疗后体重的显著降低反映在食物摄入的立即抑制上，在第1天和第2天之间出现了最大的厌食作用（图3B）。然而，尽管等摩尔剂量，BI 456906的急性食物摄入量减少与semaglutide相比并不明显，这表明在治疗28天后，另一种机制推动了更优的减肥效果。BI 456906和semaglutide的食物摄入量逐渐恢复到基线水平，并在第15天左右开始正常化。

Survodutide（BI-456906）和semaglutide剂量依赖性地减少了脂肪量，这两种化合物分别在10、20和30 nmol/kg以及20和100 nmol/kg的剂量下显著减少（图S3a）。BI 456906在20和30 nmol/kg的剂量下显著降低了瘦体重，semaglutide在20 nmol/kg剂量下显著减少了瘦体重（图S3b）。BI 456906对肝脏甘油三酯以及肝脏和血浆胆固醇的剂量依赖性降低（与赋形剂相比）与塞马谷肽的效果相似（图3C-E）。与赋形剂相比，血浆甘油三酯显著降低了30 nmol/kg BI 456906（图3F）。与赋形剂相比，在所有研究剂量下，BI 456906和semaglutide均显著降低了ALT浓度，30 nmol/kg BI 459906、20 nmol/kg和100 nmol/kg semaglutid显著降低了AST浓度（图3G和H）。尽管与20 nmol/kg塞马谷肽相比，体重减轻幅度较小，但3和10 nmol/kg BI 456906的剂量显著降低了肝脏甘油三酯、血浆胆固醇和ALT水平（图3C、E和g）。此外，与赋形剂相比，BI 456906剂量依赖性地显著降低了血浆胰岛素和瘦素（图3I和J），与semaglutide相似。在研究结束时，当食物摄入量恢复到赋形剂治疗动物的水平时，100 nmol/kg semaglutide治疗的小鼠显示出与赋形剂相比，促食欲激素ghrelin的血浆水平显著升高，这一不显著的趋势也随着BI 456906剂量的增加而观察到（图3K）。
Survodutide（BI-456906）剂量依赖性地降低血浆胰高血糖素，而semaglutide没有观察到这种作用（图3L）。BI 456906对GCGR的参与得到了血浆FGF-21剂量依赖性增加的支持（图3M）。
研究终止后，对血浆样本进行了离体生物活性测定，以确定药物暴露量和人类GLP-1R和GCGR的相对生物活性（图3N；表S2），以支持对这两种肽的药代动力学和药效学特征的解释（表S1）。稀释的血浆样本用于测定GLP-1R（图S4）和GCGR（图S5）处BI 456906和semaglutide的nM活性和相对生物活性分数（EC50）。如图3O所示，离体生物活性允许确定与治疗暴露相关的各个受体的生物活性（表S2）；BI 456906在GLP-1R上的相对生物活性低于semaglutide（图3O）。塞马谷肽在血浆中的离体活性超过其在100%小鼠血浆中的EC50 1000倍以上，表明GLP-1R在所研究的两种剂量下都完全参与（图3N和O）。BI 456906在最大剂量为30 nmol/kg时，GLP-1R和GCGR的生物等效性分别小于1000倍和100倍（图3N）。综上所述，这些分析支持了这样一个结论，即与semaglutide不同，BI 456906的减肥功效与两种受体的结合有关。

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Survodutide（BI-456906）在维持血糖控制和增加饮食诱导肥胖小鼠的能量消耗的同时降低体重[1]
为了证明BI 456906在DIO小鼠中的减肥作用可以在不影响血糖控制的情况下实现，进行了一项亚慢性给药研究，比较了BI 456900、semaglutide和LA-GCG在治疗10天后预期会产生类似体重减轻的剂量。BI 456906将体重从基线与车辆相比（图4A）降低到与semaglutide相似的水平（图4A。与赋形剂相比，BI 456906和semaglutide在第1天和第3天显著降低了血糖，而LA-GCG在第5天显著升高了血糖（图4B）。与赋形剂相比，BI 456906和LA-GCG在第8天之前观察到血浆胰高血糖素降低，而semaglutide导致胰高血糖蛋白最初下降，在亚慢性给药后恢复到赋形剂水平（图4C）。用LA-GCG治疗后，血浆酰基饥饿素水平没有变化，但在第3天和第5天，分别用BI 456906和semaglutide治疗后，其水平与赋形剂相比显著升高（图4D）。
单次给药后，Survodutide (BI-456906)在体内与胰高血糖素受体结合，增加肝脏烟酰胺N-甲基转移酶mRNA，降低血浆丝氨酸和谷氨酰胺[1]
BI 456906剂量依赖性和特异性上调Nnmt基因的肝脏表达，但不上调semaglutide，这意味着肝脏中的GCGR激动作用（图5B）。与这些发现一致，单次给药BI 456906而非塞马谷肽的瘦小鼠肝脏中Nnmt mRNA表达呈剂量依赖性增加（图7A），与赋形剂相比，在100和300 nmol/kg BI 45-906时达到显著性。此外，血浆氨基酸被测量为GCGR靶点参与的循环生物标志物；与对照组和semaglutide治疗组相比，BI 456906单次给药的小鼠在10nmol/kg的剂量下显著降低了血浆谷氨酰胺和丝氨酸水平（图7B和C）。

体外功能受体效力[1]
在表达人GLP-1R和GCGR cDNA的中国仓鼠卵巢（CHO）-K1细胞、小鼠胰岛素瘤MIN6细胞以及原代人、食蟹猴、小鼠和大鼠肝细胞中，测定了Survodutide（BI-456906）的功能效力。这些测定用于支持结构-活性关系和刺激环AMP生成的各自效力，这些效力是在0.1%BSA存在下测定的。细胞接种在100μL生长培养基中的96孔微量滴定板中；24小时后（原代肝细胞为4小时）取出生长培养基，用Krebs-Ringer碳酸氢盐HEPES缓冲液（KRBH，200μL）洗涤细胞。移除缓冲液，将细胞在室温下在10μL KRBH（KRBH+10 mM HEPES，5 mM NaHCO3，0.1%W/V牛血清白蛋白[BSA]）和0.1 mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤中孵育15分钟。通过在室温下加入裂解缓冲液（0.1%W/V BSA、5 mM HEPES、0.3%V/V吐温®20）10分钟来停止反应。将裂解物转移到384孔板上，在室温下在黑暗中与10μL受体/供体珠混合物一起孵育1小时，然后根据制造商的说明使用AlphaScreen™cAMP功能检测试剂盒测定cAMP含量。
为了表征血浆蛋白结合对脂肪酸延长肽的影响，应用了cAMP反应元件（CRE）诱导的萤光素酶活性测定法，并在低（0.5%）和高（100%）水平的小鼠和人血浆中测定了受体效力。表达重组GLP-1R和GCGR的人HEK293 CRE-luc2P细胞在添加了10%胎牛血清、50μg/mL潮霉素和400μg/mL Geneticin™的Dulbecco改良Eagle培养基（含高糖/l-谷氨酰胺）中培养。在检测中，细胞被重新悬浮在含有0.5%人或小鼠血浆的KRBH中，或100%人或小鼠等离子体中。细胞在37°C下用不同的肽处理4小时（所有n=3；所有测试的肽都是在内部生产的，作为二甲亚砜中的1 mM储备溶液处理，并在0.2 pM至1μM的最终浓度范围内进行测试）。使用Bright Glo™萤光素酶测定系统评估体外效力，通过CRE控制的萤光素酶测量cAMP的产生。计算每种血浆状况的效力（EC50）、血浆偏移和GLP-1R/GCGR比值。

体外抑制大鼠肝细胞糖原合成和葡萄糖刺激的原代胰岛胰岛素分泌[1]
为了测定原代大鼠肝细胞中糖原合成的抑制作用，将细胞在37°C和5%CO2的培养基（含200 mM谷氨酰胺、1 mg/mL庆大霉素、地塞米松0.1μM、胰岛素转铁蛋白亚硒酸钠补充剂0.017μM的Williams E培养基）中放置在24孔板中。24小时后，移除培养基，用PBS洗涤细胞一次，加入含有0.1%BSA、22.5 mM葡萄糖、相应肽浓度和40μCi/mL D-[U-14C]-葡萄糖的180μL KRBH（134 mM NaCl、3.5 mM KCl、1.2 mM KH2PO4、0.5 mM MgSO4、1.5 mM CaCl2、5 mM NaHCO3、10 mM HEPES，pH 7.4）。180分钟后，吸出培养缓冲液；用冰冷的PBS洗涤细胞一次，并在室温下用1mol/l NaOH裂解30分钟。将裂解物转移到96孔滤板上，在4°C下孵育120分钟，然后用冰冷的乙醇（70%）洗涤四次，从而沉淀糖原。将沉淀物过滤至干燥，并通过在顶部计数闪烁计数器中计数过滤器上的放射性量（掺入的14C-葡萄糖）来测定合成的糖原。每个细胞板包含含有载体对照（KRBH中0.1%DMSO）的孔作为非抑制糖原合成（100%CTL）的参考，以及不含D-[U-14C]-葡萄糖的孔作为非特异性背景的对照，从所有值中减去。
如前所述，在静态条件下，在小鼠和大鼠胰岛中评估了增加葡萄糖刺激胰岛素分泌（GSIS）的效力。大鼠和小鼠胰岛用GLP-1、Survodutide（BI-456906）或利拉鲁肽治疗。将未处理的细胞暴露于1.0 mM葡萄糖中，并与在处理条件下保存的细胞进行比较。加入葡萄糖（大鼠胰岛8.3 mM，小鼠胰岛16.7 mM），测量胰岛素分泌并表示为总胰岛素的百分比
使用Perifusion系统测定应用10 nMSurvodutide（BI-456906）、30 nM利拉鲁肽或缓冲液（含0.1%BSA的KRBH）后人胰岛的动态胰岛素分泌。使用了六个腔室，每个腔室包含50个胰岛细胞。在120分钟内测量胰岛素分泌（ng/mL），20分钟后施加1mM葡萄糖，35分钟后施加8.3mM葡萄糖，75分钟后施加1 mM葡萄糖，105分钟后施加60mM KCl。

Survodutide (BI-456906)的药代动力学特性[1]
\n为进行药代动力学分析，雄性C57BL/6NRj小鼠单次静脉注射(IV)或皮下注射(SC) Survodutide (BI-456906)（20 nmol/kg；每组3只）。此外，雄性比格犬分别接受静脉注射或皮下注射5 nmol/kg或10 nmol/kg的Survodutide (BI-456906)（n = 3）。在给药后不同时间点采集血浆样本，并储存于-20 °C直至进一步分析。使用液相色谱/串联质谱法 (LC/MS/MS) 在 QTRAP 6500+ 上测定血浆中 Survodutide (BI-456906) 的浓度，校准范围为 0.5–1000 nM。分析前，样品用乙醇预处理以沉淀蛋白质。\n

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\n\nNMRI 近交系小鼠急性摄食抑制 [1]
\n从 Janvier Labs（法国 Le Genest-Saint-Isle）获得三周龄雄性瘦型 NMRI 近交系小鼠（野生型 [WT] 和 GLP-1R 敲除型 [KO]），每笼饲养四只，光照周期为 12 小时/12 小时（15:00 关灯）。室温控制在 21 °C ± 1 °C，湿度为 60% ± 20%。动物可自由摄取常规啮齿动物饲料和自来水。根据食物摄入量和体重，将 6 周龄雄性小鼠随机分为各治疗组（每组 n = 8–10）。小鼠在随机分组前禁食 6 小时，并在黑暗期前 1 小时皮下注射 Survodutide (BI-456906)、semaglutide 或赋形剂。使用全自动 Herdsman-2 食物摄入量监测系统测量 24 小时的食物摄入量。给药后 24 小时采集血液样本，并测定氨基酸水平（详见后文）。使用 GraphPad Prism 9 的非线性拟合工具计算 ED50 值。\n

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\n瘦小鼠急性葡萄糖耐量试验 [1]
\n通过腹腔注射和口服葡萄糖耐量试验评估了 Survodutide (BI-456906) 对急性葡萄糖耐量的影响。10-12 周龄的雄性野生型 (WT) 和 GLP-1R KO 瘦型 C57BL6/J 小鼠随机分组（每组 n = 7），并在研究开始前禁食 12 小时。在 -5 小时测量预处理血糖。小鼠在 -4 小时皮下注射 Survodutide (BI-456906) 或索玛鲁肽。在 -1 小时测量基线血糖，然后在 0 小时腹腔注射 2 g/kg 葡萄糖。分别于 0、15、30、60 和 120 分钟测量血糖水平，并于 140 分钟测量化合物暴露量。\n
\n6-7 周龄的雄性野生型 (WT) 和 GLP-1R 敲除型 (KO) C57BL6/J 瘦小鼠（每组 n = 6-7）于 -24 小时皮下注射赋形剂、Survodutide (BI-456906) 或索玛鲁肽。小鼠从 -10 小时开始禁食，并在 0 小时快速口服葡萄糖（2 g/kg）。分别于 0、15、30、60 和 120 分钟测量血糖水平，并于 120 分钟测量化合物暴露量。在两项实验中，均使用市售血糖仪和试纸测量全血中的葡萄糖水平。数据以均值±标准误（SEM）表示，并使用GraphPad Prism 9软件进行双因素方差分析（ANOVA），随后采用Dunnett法进行与载体对照组的多重比较。显著性差异的判定标准为p < 0.05。\n

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\n瘦鼠急性胃排空[1]
\n8-10周龄雄性瘦B6J小鼠在研究开始前禁食12小时，并在-4小时皮下注射载体、Survodutide (BI-456906)或索玛鲁肽。在0小时，小鼠快速吞服对乙酰氨基酚（100 mg/kg）-葡萄糖（2 g/kg）混合物，并在10、30和60分钟时通过面静脉采集血浆样本测量对乙酰氨基酚浓度。 60 分钟后，进行离体试验，评估对乙酰氨基酚、血糖和终末暴露量。使用自动分析仪测定对乙酰氨基酚。AUC 由 0 至 60 分钟之间测得的对乙酰氨基酚浓度计算得出。ED50 值使用 GraphPad Prism 9 中的非线性拟合工具计算。\n
\n肝脏中烟酰胺 N-甲基转移酶基因表达 [1]
\n6-7 周龄雄性 WT C57BL6/J 小鼠（每组 n = 5）于 -18 小时皮下注射载体、索玛鲁肽或 Survodutide (BI-456906)。小鼠从-12小时禁食至0小时，随后处死。取一叶肝组织，置于4℃的RNAlater™稳定液中保存，并使用TaqMan基因表达分析法，通过实时PCR检测肝脏中烟酰胺N-甲基转移酶（NNMT）mRNA的表达。\n\n

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\n\ncAMP反应元件-荧光素酶转基因小鼠的成像研究[1]
\n获得12-13周龄的雄性cAMP反应元件（CRE）-荧光素酶（Luc）转基因小鼠。小鼠饲喂经辐照处理的Teklad 2918.15啮齿动物饲料，并自由饮水。根据体重和第-1天获得的基线图像，将小鼠分为若干研究组（每组n=5）。所有小鼠均根据其体重分别皮下注射赋形剂、索玛鲁肽、舒沃杜肽（BI-456906）或长效胰高血糖素（LA-GCG）类似物（各100 nmol/kg），或腹腔注射异丙肾上腺素（10 mg/kg）。分别于给药前（第-1天）和给药后（第0天，给药后4、8和12小时）进行体内生物发光成像。生物发光成像在1-2%异氟烷气体麻醉下使用IVIS Spectrum成像系统进行。小鼠颈部皮下注射250 mg/kg（25 mg/mL）D-荧光素，注射后10分钟分别在俯卧位、仰卧位和左侧卧位进行成像。图像使用Living Image软件进行分析。在最后一次成像时间点后 12 小时，所有小鼠均通过过量暴露于二氧化碳处死，以便采集血液和组织。通过心脏穿刺采集全血，并用于制备血浆。为了研究各化合物的剂量-反应效应，在体外测定了荧光素酶活性。本研究中，根据小鼠的体重，分别给予皮下注射载体、索玛鲁肽、Survodutide (BI-456906) 或 LA-GCG。4 小时后，取出肝脏和胰腺并进行匀浆处理。使用荧光素酶检测系统测定荧光素酶活性。\n\n

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\n\n饮食诱导肥胖小鼠的生物标志物研究[1]
\n从杰克逊实验室获得预先喂食 60% 高脂饮食 (HFD) 的雄性 C57BL6/J 小鼠，年龄 >16 周（每组 n = 11）。所有动物均饲养于10:00–22:00光暗循环环境中。连续10天，小鼠于08:00接受慢性重复皮下注射（SC）给药，分别给予赋形剂（每日两次[BID]）、Survodutide (BI-456906)（7.5 nmol/kg，每日一次[QD]）、semaglutide（10 nmol/kg，QD）或LA-GCG（30 nmol/kg，BID）。每日测量体重和食物摄入量。在治疗的第1、3、5、8和10天，每日同一时间采集血液样本，并测量血糖（n = 11）以及血浆活性胃饥饿素和胰高血糖素（n = 6）水平。数据以平均值±标准误（SEM）表示，并使用GraphPad Prism 9软件进行双因素方差分析（ANOVA），随后采用Dunnett法进行多重比较。在 p < 0.05 水平上检测到显著差异。\n\n

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\n\n饮食诱导肥胖小鼠的能量消耗研究[1]
\n雄性 C57BL/6J 小鼠购自 Charles River Laboratories，年龄为 6-7 周。小鼠以 5 只为一组，饲养于独立通风笼中，光照/黑暗周期为 12 小时（06:00-18:00），并自由采食适应 1 周。之后，小鼠喂食 45% 高脂饮食 (HFD) 18 周或 30 周，然后在第 -1 天随机分组，分组时各组小鼠的平均体重相近。动物每日皮下注射载体（25 mM 磷酸盐缓冲液）或 Survodutide (BI-456906)（5、10 或 20 nmol/kg），连续 9 天，每日测量能量代谢、活动和核心体温。第 10 天，通过穿刺眼后静脉丛进行最后一次放血后，采用颈椎脱臼法处死小鼠。\n

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\n\n饮食诱导肥胖小鼠的亚慢性重复给药研究[1]
\n从杰克逊实验室获得 16 周龄以上的雄性 C57BL6/J 小鼠，这些小鼠预先喂食 60% 高脂饮食。小鼠到达后单独饲养，以便准确测量每只动物的食物摄入量。在整个研究期间，动物可自由摄取食物和自来水。在研究开始前，根据治疗开始前1周测量的体重，将动物随机分组（每组n=11）。研究开始时，小鼠的年龄为22周。小鼠每日皮下注射载体、Survodutide (BI-456906)（3、10、20或30 nmol/kg）或semaglutide（20或100 nmol/kg），持续30天，并每日测量体重和食物摄入量。在第29天，进行EchoMRI™ 4in1-900扫描。在研究结束时（第30天），测量给药后7小时（Cmax）和24小时（Cmin）的药物暴露量，以及多种生化指标。抽取血液样本，测定血浆甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)、丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、胰高血糖素、成纤维细胞生长因子-21 (FGF-21)、氨基酸以及离体生物活性。将肝脏组织匀浆，测定甘油三酯和胆固醇浓度。使用全自动生化分析仪测定血浆和肝脏组织中的甘油三酯、胆固醇、血浆淀粉酶和脂肪酶。使用酶联免疫吸附试验和比色试剂盒测定血浆胰高血糖素和 FGF-21。使用 MILLIPLEX® 小鼠代谢激素多重检测法测定胰岛素、瘦素和活性胃饥饿素。采用酶联免疫吸附比色法试剂盒测定EDTA血浆中的游离脂肪酸。\n
\n为测定索玛鲁肽和舒沃杜肽（BI-456906）的活性，从安乐死的动物中获取肝素血浆。将血浆稀释于100%小鼠血浆中，并使用表达重组人GLP-1R和人GCGR以及CRE诱导型荧光素酶的人胚肾细胞，在体外测定诱导荧光素酶活性的相应浓度。使用人GLP-1-(7–36)酰胺（含1 μM利格列汀）和人胰高血糖素，在100%小鼠血浆中绘制标准曲线。基于GLP-1和胰高血糖素的标准曲线，计算了每个样本和动物的索玛鲁肽和舒沃杜肽（BI-456906）体外对GLP-1R和GCGR的生物活性，以每种分子和剂量下的实际效价（EC50）的相对活性表示，并与分子暴露量相关联。对于舒沃杜肽（BI-456906），GLP-1R和GCGR的体外相对效价比值由体外观察到的内源性GLP-1和胰高血糖素的活性得出。

与健康受试者相比，Child-Pugh A、B 或 C 级肝硬化患者的苏沃度肽 AUC0-∞ 和 Cmax 值相似，调整后的几何平均比值的 90% 置信区间包含 1（表 2）。其他药代动力学参数值也相似（表 S2）。25.0% 的健康受试者和 0%、25.0% 或 0% 的 Child-Pugh A、B 或 C 级受试者发生了药物相关不良事件。所有不良事件均不严重、不致命或不导致试验终止，也未发生肝损伤（表 3）。[2] 在单剂量组（n = 41）中，肝硬化患者与健康个体的平均 AUC0-∞ 和 Cmax 值相似（调整后的几何平均比值的 90% 置信区间包含 1）。单次给药后，健康受试者和肝硬化患者的药物相关不良事件发生率分别为25.0%和≤25.0%；在28周的多剂量给药组（n=41）中，健康受试者和肝硬化患者的药物相关不良事件发生率分别为82.4%和87.5%。28周的苏沃度肽治疗后，肝脏脂肪含量、肝脏硬度、肝脏体积、体重以及其他肝脏和代谢疾病标志物普遍降低。结论：苏沃度肽在代偿期或失代偿期肝硬化患者中总体耐受性良好，无需根据药代动力学调整剂量，并且可能改善肝脏相关的非侵入性检查结果，支持其在MASH相关肝硬化中的应用研究。影响和意义：Survodutide 是一种胰高血糖素受体/胰高血糖素样肽-1受体双重激动剂，目前正在开发用于治疗代谢功能障碍相关性脂肪性肝炎 (MASH)，该病约 20% 的病例会发展为肝硬化。本试验阐明了 survodutide 在代偿期或失代偿期肝硬化患者中的药代动力学和安全性特征，并揭示了肝脏脂肪含量、肝纤维化标志物和体重的降低。这些发现对 MASH 患者（包括通常被排除在试验药物临床试验之外的失代偿期肝硬化患者）具有潜在意义。基于这项研究，有必要对 survodutide 治疗 MASH 相关肝硬化进行进一步研究。[2]

开放标签治疗在肝硬化患者中的耐受性、安全性和有效性[2]
在为期 28 周的苏沃度肽治疗期间（24 周剂量递增，从 0.3 mg 递增至 6.0 mg，然后维持最大剂量 4 周），8 名未提前终止试验药物的非肝硬化患者中有 3 名出现剂量减少，11 名 Child-Pugh A 级肝硬化患者中有 2 名出现剂量减少，6 名 Child-Pugh B 级肝硬化患者中无剂量减少。17 名非肝硬化患者中有 14 名 (82.4%) 出现药物相关不良事件，16 名 Child-Pugh A 级肝硬化患者中有 14 名 (87.5%) 出现药物相关不良事件，8 名 Child-Pugh B 级肝硬化患者中有 7 名 (87.5%) 出现药物相关不良事件（表 3）。分别有 0 名、5 名 (31.3%) 和 3 名 (37.5%) 患者出现严重不良事件（表 S3）。除一名受试者出现肝性脑病外，所有不良事件均非致命或与药物相关；该事件为轻微肝性脑病，未导致停用苏沃杜肽或阻止受试者完成试验（详见补充数据）。导致试验药物停用的不良事件分别发生在8名（47.1%）无肝硬化受试者、3名（18.8%）Child-Pugh A级肝硬化受试者和2名（25.0%）Child-Pugh B级肝硬化受试者中——主要由恶心或呕吐等胃肠道疾病引起，这些也是所有三个队列中最常见的不良事件类型。呕吐或腹泻的受试者中未发生急性肾损伤。
28周时，无肝硬化受试者、Child-Pugh A级肝硬化受试者和Child-Pugh B级肝硬化受试者的平均心率变化分别为每分钟+4.1次、+8.5次和+7.6次。所有参与者均未出现 QTcF >500 ms 的发生或较基线变化 >60 ms，也未发现提示心律失常风险增加或 QTcF 延长的安全信号。
所有三个队列在第 28 周时，通过 MRI-PDFF 测量的肝脏脂肪含量均有所降低（无肝硬化者降低 43.29%，Child-Pugh A 级者降低 51.59%，Child-Pugh B 级者降低 0.48%），通过磁共振弹性成像测量的肝脏硬度也分别降低 0.13 kPa、1.12 kPa 和 1.02 kPa，ELF 评分分别降低 0.149、0.369 和 0.522，血浆 Pro-C3 水平也分别降低 35.79%、22.59% 和 22.67%（图 3）。同样，在第28周，FibroScan测量的肝脏脂肪含量（无肝硬化组、Child-Pugh A级组和Child-Pugh B级组分别下降17.9%、18.9%和9.9%）和硬度（分别下降3.85%、11.62%和2.63%）、MRI测量的肝脏体积（分别下降15.24%、17.36%和22.00%）以及体重（分别下降14.80%、10.40%和8.69%）普遍降低（表4）。各组肝酶水平普遍降低，胆红素和国际标准化比值（INR）的变化较小且不一致。

[1]. BI 456906: Discovery and preclinical pharmacology of a novel GCGR/GLP-1R dual agonist with robust anti-obesity efficacy. Mol Metab. 2022 Dec:66:101633.

[2]. Efficacy, tolerability and pharmacokinetics of survodutide, a glucagon/glucagon-like peptide-1 receptor dual agonist, in cirrhosis. J Hepatol. 2024 Nov;81(5):837-846.

目的：肥胖及其相关合并症构成全球性的健康挑战，亟需耐受性良好、疗效显著且作用机制多样的药物干预措施。胃泌素调节素是一种肠道肽，可激活胰高血糖素受体 (GCGR) 和胰高血糖素样肽-1受体 (GLP-1R)，并通过增加能量消耗和减少能量摄入来降低人体体重。本文描述了新型胰高血糖素受体 (GCGR)/GLP-1受体 (GLP-1R) 双重激动剂BI 456906的药理学特征。方法：采用基于细胞的体外实验对BI 456906进行表征，以确定其功能性激动作用。采用急性及亚慢性给药方案进行体内药理学研究，以验证其对GCGR和GLP-1R的靶点结合能力及其减重功效。结果：BI 456906 是一种强效酰化肽，其含有 C18 脂肪酸，可延长半衰期，从而支持每周一次的给药方案。与最大有效剂量的 GLP-1R 激动剂索玛鲁肽相比，药理剂量的 BI 456906 可使小鼠体重显著降低。BI 456906 的卓越疗效源于能量消耗增加和食物摄入减少。通过葡萄糖耐量试验、食物摄入试验和胃排空试验证实了 GLP-1R 受体的体内活性，并通过肝脏烟酰胺 N-甲基转移酶 mRNA 表达和循环生物标志物（氨基酸、成纤维细胞生长因子-21）检测证实了 GCGR 受体的体内活性。利用 GLP-1R 基因敲除小鼠和转基因报告小鼠以及离体生物活性测定，进一步证实了 BI 456906 对 GLP-1R 和 GCGR 的双重活性。结论：BI 456906 是一种强效的 GCGR/GLP-1R 双重激动剂，通过增加能量消耗和减少食物摄入，具有显著的抗肥胖功效。[1]

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总之，BI 456906 是一种强效且平衡的 GCGR 和 GLP-1R 激动剂，它通过 GLP-1R 和 GCGR 双重激动作用，抑制食物摄入、促进胃排空并增加能量消耗，从而降低肥胖、胰岛素抵抗动物的体重，同时维持血糖正常。BI 456906 的临床前特性及其作用机制支持其在超重/肥胖（NCT04667377）、糖尿病（NCT04153929）和非酒精性脂肪性肝炎（NASH）（NCT041771273）患者中开展 II 期临床试验。[1]

C192H288N47O61NA

4261

Survodutide;2805997-46-8

White to off-white solid powder

Survodutide; BI-456906; 2805997-46-8; BI 456906 sodium

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Note: Please refer to the "Guidelines for Dissolving Peptides" section in the 4th page of the "Instructions for use" file (upper-right section of this webpage) for how to dissolve peptides.

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H2O :≥ 100 mg/mL

Note: 如何溶解多肽产品？请参考本产品网页右上角“产品说明书”文件，第4页。

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注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。