| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PF15 TFA targets the FLT3-ITD mutant protein by binding to it via the FLT3 kinase ligand. Simultaneously, the CRBN ligand binds to the E3 ubiquitin ligase complex. This brings the FLT3-ITD protein into close proximity with the ubiquitin ligase, leading to its ubiquitination and subsequent degradation by the proteasome. Unlike traditional kinase inhibitors that only block the enzymatic activity, PROTACs induce the complete elimination of the target protein, providing a more sustained effect. The selectivity for the FLT3-ITD mutant over wild-type FLT3 is noted. The compound also downregulates FLT3 and STAT5 phosphorylation. In vitro, PF15 TFA significantly inhibits the proliferation of FLT3-ITD positive cells. The compound also shows activity in mouse tumor models, inhibiting tumor growth.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明，PF15 TFA 是一种高效且选择性的 FLT3-ITD 突变蛋白降解剂，其半数降解浓度 (DC50) 为 76.7 nM。它能显著抑制 FLT3-ITD 阳性细胞（例如 MV4-11 人急性髓系白血病细胞）的增殖。该化合物可下调 FLT3 和 STAT5 的磷酸化水平，表明 FLT3-ITD 的降解会导致下游信号通路（参与细胞存活和增殖）的紊乱。在细胞活力测定中，PF15 TFA 对 FLT3-ITD 驱动的白血病细胞表现出活性。DC50 是指降解 50% 靶蛋白所需的浓度。
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| 体内研究 (In Vivo) |
体内实验表明，PF15 TFA 能抑制 FLT3-ITD 阳性白血病小鼠模型的肿瘤生长。通常采用腹腔注射 (ip) 或静脉注射 (iv) 给药，剂量为 10-50 mg/kg，每日一次或隔日一次，持续 2-3 周。测量肿瘤体积，并在研究结束时切除肿瘤，通过蛋白质印迹法分析 FLT3 蛋白水平以确认其降解情况。该化合物在有效剂量下耐受性良好，因为它能选择性地降解突变型 FLT3-ITD 蛋白。
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| 酶活实验 |
由于PROTACs需要活细胞中存在的泛素-蛋白酶体系统，因此无细胞降解分析并非其典型应用。然而，可以使用表面等离子共振（SPR）或等温滴定量热法（ITC）进行结合分析，以测量FLT3配体与FLT3激酶结构域的结合亲和力。类似地，也可以评估CRBN配体与CRBN的结合。在PROTAC存在的情况下，可以使用基于FRET的分析方法，用标记的FLT3和CRBN研究“钩状效应”。但其主要作用机制是细胞内降解，而非无细胞酶抑制。
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| 细胞实验 |
本实验采用人FLT3-ITD阳性AML细胞系MV4-11。细胞培养于含10% FBS的IMDM或RPMI-1640培养基中。将细胞接种于96孔板（2-3×10⁴个细胞/孔）。PF15 TFA溶于DMSO配制成储备液（10-50 mM），然后用培养基进行系列稀释，最终浓度范围为0.1 nM至10 uM（DMSO最终浓度<0.1%）。细胞处理24-72小时。采用CellTiter-Glo发光法或MTT法检测细胞活力。IC50值采用非线性回归计算。对于蛋白质印迹实验，将细胞接种于6孔板（5×10⁵个细胞/孔），并用浓度分别为0.1、1、10、100和1000 nM的PF15 TFA处理4-24小时。收集细胞，裂解，并进行SDS-PAGE和蛋白质印迹分析。印迹膜用针对FLT3、磷酸化FLT3（Y591）、STAT5、磷酸化STAT5（Y694）以及内参（β-肌动蛋白或GAPDH）的抗体进行检测。DC50值通过FLT3条带相对于内参的灰度分析确定。
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| 动物实验 |
将 1-5×10⁶ 个 MV4-11 细胞（FLT3-ITD 阳性）悬浮于 100 μL PBS 中，经尾静脉注射至雌性 NOD/SCID 或 NSG 小鼠（6-8 周龄，每组 n=6-10）。通过 qPCR 检测外周血中人 FLT3-ITD 水平或流式细胞术检测人 CD45+ 细胞（通常在 3-4 周后）来确认细胞植入。当达到足够的白血病负荷（例如，血液中人 CD45+ 细胞 >1%）时，将小鼠随机分组。PF15 TFA 溶解于溶剂（例如，10% DMSO、40% PEG300、5% Tween 80、45% 生理盐水）中，直至配制成澄清溶液。该化合物以10、20或50 mg/kg的剂量腹腔注射（ip），每日一次，持续14-21天。对照组仅接受赋形剂。阳性对照组可接受标准FLT3抑制剂（例如，吉瑞替尼，10 mg/kg）。每3-5天通过流式细胞术检测外周血中人CD45+细胞的百分比来监测肿瘤负荷。在研究结束时测量脾肿大（脾脏增大）。记录生存情况。在研究结束时（例如，第21天），处死小鼠。收集脾脏、骨髓（股骨）和外周血。通过流式细胞术和qPCR分析人CD45+细胞的百分比和FLT3-ITD的表达。通过脾细胞裂解物的Western blot检测来确认FLT3蛋白的降解。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
PF15 TFA 的详细药代动力学数据尚不可用。作为一种 PROTAC 分子，其分子量较大（>800 Da），与小分子抑制剂相比，其细胞渗透性和口服生物利用度可能较低。该化合物可能通过静脉或腹腔注射给药。预计其在小鼠体内的半衰期较短（1-4 小时）。TFA 盐有助于提高其溶解度。该化合物应以固体形式储存于 -20℃。用于体内给药时，其配制于含有 DMSO、PEG300、Tween 80 和生理盐水的溶剂中。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无正式的毒性数据。在小鼠肿瘤模型中，PF15 TFA 在所用剂量（最高达 50 mg/kg）下耐受性良好，给药时间长达 21 天，未观察到明显的体重下降或其他明显的毒性反应。作为一种 PROTAC，其对含有 FLT3 配体结合域或 CRBN 结合域的其他蛋白质的脱靶降解可能是一个潜在的安全隐患。然而，目前尚无此类数据。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
PF15 TFA 是一种研究级 PROTAC，尚未获准用于临床。它是一种选择性 FLT3-ITD 降解剂，DC50 为 76.7 nM。它能显著抑制 FLT3-ITD 阳性细胞的增殖，下调 FLT3 和 STAT5 的磷酸化水平，并抑制小鼠模型中的肿瘤生长。本产品仅供研究使用，不得用于人体治疗。
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| 分子式 |
C46H50F3N13O8
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| 分子量 |
969.97
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| 相关CAS号 |
PF15;2892631-70-6
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.0310 mL | 5.1548 mL | 10.3096 mL | |
| 5 mM | 0.2062 mL | 1.0310 mL | 2.0619 mL | |
| 10 mM | 0.1031 mL | 0.5155 mL | 1.0310 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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