p53-MDM2

通过抑制p53-MDM2相互作用来恢复p53活性被认为是癌症治疗的一种有吸引力的方法。然而，疏水性蛋白质相互作用表面对开发具有理想药理学特征的小分子抑制剂来说是一个重大挑战。RG7112是临床开发的第一个小分子p53-MDM2抑制剂。在这里，我们报告了第二代临床MDM2抑制剂RG7388的发现和特征，该抑制剂具有优异的效力和选择性[1]。

RG7388诱导的细胞凋亡相对于药物暴露延迟，不需要持续治疗。在初步疗效测试中，RG7388的每日剂量为30mg/kg，每周两次剂量为50mg/kg，在我们的肿瘤模型中具有统计学上的等效性。此外，每周给药50mg/kg相当于每天给药10mg/kg。对这些数据进行建模和模拟表明了几种可能的间歇临床给药方案。进一步的临床前分析证实了这些时间表是可行的选择[2]。
结论：如模型和模拟所预测的那样，除了慢性给药外，RG7388的间歇给药也可以实现抗肿瘤活性。这些替代方案可能会改善长期服用RG7112的耐受性问题，同时提供临床益处。因此，RG7388临床试验选择了每周（qw）和每天五天（5天开/23天关，qd）的时间表[2]。

p53-MDM2 HTRF 测定使用 50 mM Tris-HCl、pH 7.4、100 mM NaCl、1 mM DTT 和 0.02 或 0.2 mg/ml BSA 缓冲液。小分子抑制剂的等分试样作为 10 mM DMSO 的储备溶液保存在 96 深孔板中 4°C。在测试之前，将其解冻并混合。将生物素化的 p53 肽和 GST-MDM2 与该物质在 37°C 下孵育一小时。添加 Eu-8044-链霉亲和素和 Phycolink 山羊抗 GST（1 型）别藻蓝蛋白后，需要在室温下孵育一小时。使用 Envision 荧光读数器读取板。板之间一式两份或一式三份的数据集用于计算 IC50 值。 XLfit4 (Microsoft) 使用具有 4 参数 Logistic 模型的 Sigmoidal 剂量响应模型和方程 Y= (A+ ((BA)/ (1+ ((C/x)^D)))) 分析数据，其中 A B 和 B 分别是在不存在或存在无限抑制剂化合物的情况下的酶活性，C 是 IC50，D 是 Hill 系数。

四唑染料测定用于评估细胞增殖。浓度与抑制百分比对数图的线性回归得出细胞增殖被抑制 50% (IC50) 或 90% (IC90) 时的浓度。[1]

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癌症细胞系的体外试验[2]
RG7388在DMSO中以1和10 mmol/L的浓度制备，并在-20°C下等分储存。SJSA、RKO、HCT116、H460、A375、SK-MEL-5、SW480、MDA435和HeLa细胞购自ATCC。细胞系通过Promega认证服务通过短串联重复分析进行认证。对于体外研究，细胞在ATCC指定的培养基中培养。培养基中补充了10%FBS和1%200 nmol/L L-谷氨酰胺。为了评估细胞活力，在正常生长培养基中的96孔板中，以确定的最佳生长密度接种细胞，进行5天的测定。从300μmol/L开始，将RG7388的连续稀释液（在新鲜培养基中为1-3）分三次应用于孔（1-10），最终浓度范围为0.01至30μmol/L，对照孔用0.3%的DMSO处理，相当于最高RG7388浓度的DMSO。如前所述，通过MTT还原为甲赞来测量细胞呼吸，作为细胞存活率的指标。
按照Tovar及其同事的描述确定凋亡百分比。对于蛋白质印迹分析，细胞在T-75培养瓶中培养（总体积4 mL，5×105个细胞/孔），并在37°C、5%CO2下孵育过夜。细胞用0.3或1.8μmol/L的RG7388或0.1%的DMSO处理作为对照。处理时间为16小时，在RG7388洗脱前和洗脱后4、8、24和48小时制备裂解物。

MDM2拮抗剂RG7112已证实具有抗肿瘤临床活性，但患者对每日所需给药的耐受性较差。本研究利用具有更高选择性和效力的第二代nutlin类药物RG7388，探讨间歇给药方案的可行性，以指导I期临床试验的初始给药方案选择。\n\n实验设计：基于临床前数据，我们建立了药代动力学-药效学（PKPD）模型，以确定RG7388诱导最佳抗肿瘤活性所需的替代给药方案。该PKPD模型用于研究RG7388的药代动力学及其在小鼠骨肉瘤异种移植模型中抗肿瘤作用的时间进程。这些数据用于预测间歇和连续给药方案，以期在同一模型系统中实现肿瘤抑制。[2]口服MDM2抑制剂RG7388在SJSA人骨肉瘤异种移植模型中的疗效[1]
荷瘤雌性裸鼠每日口服RG7388，并在首次给药（急性药代动力学）或末次给药（慢性药代动力学）后，于每组每时间点（1、2、4、8和24小时）采集2只动物的血液样本，置于EDTA抗凝管中。制备血浆和肿瘤样本，并采用LC/MS/MS分析RG7388。计算每组每时间点2只动物的平均血浆浓度。 S-9 口服MDM2抑制剂RG7388在SJSA人骨肉瘤异种移植模型中的疗效 Tovar等人¹报道，RG7388在SJSA1模型中的抗肿瘤疗效已在雌性裸鼠中测定。在本研究中，小鼠被随机分为若干治疗组，每组10只，平均肿瘤体积相近，为190-230 mm³。RG7388通过灌胃给药，剂量为12.5-50 mg/kg/天，持续两周。

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\n\n口服MDM2抑制剂RG7388在SJSA人骨肉瘤异种移植模型中的疗效[1]
\n如Tovar等人1报道，RG7388在SJSA1模型中的抗肿瘤疗效已在雌性裸鼠中测定。在本研究中，小鼠被随机分为治疗组，每组10只，平均肿瘤体积相近，为190-230 mm3。RG7388通过灌胃给药，剂量为12.5-50 mg/kg/天，持续两周。

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\n\n药代动力学分析[2]
\n为了测定RG7388的血浆浓度，在体内抗肿瘤研究期间采集了雌性小鼠的血液样本。在每个治疗组中，于首次和/或末次给药日，于末次给药后0.5至24小时的不同预定时间点采集血样（通常每个时间点n=2）。采用Watson v7.4软件进行非房室模型药代动力学评估，基于各治疗组和采样日的综合浓度-时间数据计算各项参数。采样时间以标称时间表示，排除低于定量限的浓度值。报告的参数包括血浆半衰期（t1/2）、Cmax、Tmax以及从给药结束至末次出血时间点的血浆浓度-时间曲线下面积（AUC0-24小时）。AUC采用线性梯形法则计算。 Cmax 和 Tmax 值直接取自血浆浓度-时间曲线，未进行外推。

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\n\n异种移植肿瘤模型体内活性研究[2]
\n无胸腺雌性裸鼠 (Crl:NU-Foxn1nu) 购自 Charles River Laboratories。所有动物的健康状况均通过每日肉眼观察和哨兵动物血样分析进行监测。所有动物实验均按照本机构动物护理和使用委员会批准的方案进行，本机构已获得实验动物评估和认证协会 (AAALAC) 的认证。
\n\n10 至 12 周龄的小鼠被植入 1:1 混合的人类 SJSA 骨肉瘤细胞 (ATCC)，该细胞悬浮于无酚 Matrigel 和 PBS 中。细胞浓度为 5 × 10⁶ 个，总体积为 0.2 mL，植入小鼠右侧腹部。大约在第10天，根据肿瘤体积对动物进行随机分组，使所有10只随机分组的小鼠的初始平均肿瘤体积相似，为100至250 mm³。每周测量肿瘤体积和重量两到三次。肿瘤生长指数（TGI）根据平均肿瘤体积与对照组相比的百分比变化计算得出。平均重量变化百分比被用作实验耐受性的替代终点。每组动物在治疗结束后持续随访，以观察肿瘤是否复发。在第二阶段的分析中，以1500 mm³的个体肿瘤体积作为死亡率的替代指标来计算生存率。寿命延长率 (ILS) 以百分比形式计算，公式为：[(治疗组荷瘤小鼠死亡中位数) − (对照组荷瘤小鼠死亡中位数)]/对照组荷瘤小鼠死亡中位数 × 100。统计分析方法如前所述。
\n\nRG7388 以无定形固体分散体微量沉淀粉末的形式给药，其中包含 30% 的药物成分和 70% 的羟丙基甲基纤维素乙酸琥珀酸酯聚合物。给药前，将粉末用 Klucel/Tween 复溶成悬浮液，给药后丢弃剩余悬浮液。

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药代动力学[3]
伊达沙努林口服给药后，通常在空腹状态下6至8小时达到血药浓度峰值，随后逐渐下降，末端半衰期约为30小时（图2A）。首次给药后（即第1天）以及重复给药后（即每日一次×3方案的第3天，每日一次×5方案的第5天），药物暴露量与剂量呈近似正比关系。然而，当剂量超过600 mg时，药物暴露量的增加似乎低于剂量比例，提示在此剂量水平下肠道吸收已达到饱和（图2B）。但是，所有给药方案的患者间药物暴露量差异均较大（图2B）。与首次给药相比，每日一次×3和每日一次×5给药方案的最后一天药物暴露量约为两倍（图2B），但每周一次×3给药方案未观察到药物蓄积（数据未显示）。对于特定的每日剂量，在整个 28 天给药周期内，每日一次（QD）× 5 方案的累积伊达沙努林暴露量最高，这反映了更高的总给药剂量（即 5 天给药，而非 3 天给药或 3 次单次给药）。

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食物对伊达沙努林药代动力学的影响[3]
10 名患者分别接受了 800 mg 剂量的伊达沙努林，分别在高脂肪/高热量餐后或空腹状态下服用。给药采用半重复交叉设计，最终从 10 名患者中获得了 15 对餐后与空腹数据。平均而言，与食物同服时，idasanutlin 的暴露量更高（平均最大血浆浓度高出 14%，曲线下面积外推至无穷大时高出 43%），但变异性较大，且 90% 置信区间包含 1，因此得出结论：食物对 idasanutlin 的暴露量没有临床意义上的影响（在线资源表 S7；图 2C）。

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药效学分析[3]
idasanutlin 给药后，循环巨噬细胞抑制细胞因子 1 (MIC-1) 水平通常以剂量依赖的方式增加（图 2D）。因此，MIC-1 对治疗的反应趋势与 idasanutlin 暴露量的趋势相一致，如群体药代动力学/药效学分析部分所述。
在接受 idasanutlin 治疗的 31 例患者中，有 16 例（51.6%）通过正电子发射断层扫描分析评估了肿瘤增殖率的变化，结果显示，在第 1 个治疗周期中，其最佳最大标准化摄取值 (SUVmax) 变化百分比较基线值下降 ≥ 25%（在线资源图 S2），达到部分增殖反应。

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群体药代动力学/药效学分析 [3]
使用间接 PK/MIC-1 模型（在线资源补充方法）进行的模拟表明，尽管存在一定的变异性，但 idasanutlin 治疗后 MIC-1 的释放与浓度相关；idasanutlin 浓度越高，MIC-1 的释放量也越高。与每日给药方案（相同剂量）相比，每周一次的idasanutlin给药方案虽然最大释放量较低，但在28天的治疗周期内对MIC-1的影响更为持久（图3）。

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Idasanutlin (RG7388) 是一种MDM2（鼠双微体2）抑制剂，目前正在研究其抗癌作用，尤其是在TP53野生型肿瘤（例如，急性髓系白血病、实体瘤）中。以下是基于现有临床前和临床数据的药代动力学(PK)概述：
1. 吸收
给药途径：口服（片剂）。
生物利用度：数据有限，但口服吸收率中等（临床前模型中约为30-50%）。
食物影响：高脂肪食物可能显著增加吸收（在临床试验中观察到）。因此，通常与食物同服以提高生物利用度。
2. 分布
蛋白结合：高度蛋白结合（>99%，主要与白蛋白结合）。
分布容积 (Vd)：尚未充分表征，但由于蛋白结合率高，可能为中等。
组织渗透：临床前数据表明可分布到肿瘤组织，但中枢神经系统渗透可能有限。
3.代谢
主要途径：肝脏代谢，主要通过CYP3A4（主要）和UGT1A1/UGT1A3（葡萄糖醛酸化）进行代谢。
代谢产物：多种氧化和结合代谢产物（大多无活性或活性较弱）。
药物相互作用（DDI）：
CYP3A4诱导剂（例如利福平）→可能降低伊达沙努林的暴露量。
CYP3A4抑制剂（例如酮康唑）→可能增加伊达沙努林的暴露量。
UGT抑制剂（例如阿扎那韦）→可能增加暴露量。
4.消除
半衰期 (t½)：约 4–8 小时（患者间差异较大）。
清除：主要经肝脏清除，部分经胆汁排泄。
排泄：主要经粪便排泄 (约 70-80%)，肾脏排泄极少 (<5%)。
5. 药代动力学变异性
患者间变异性：高，可能由于 CYP3A4/UGT 活性差异、食物影响和蛋白结合所致。
剂量比例性：高剂量时呈非线性药代动力学（吸收或代谢饱和）。
6. 特殊人群
肝功能损害：预计会显著增加暴露量（研究尚不充分）。
肾功能损害：不太可能产生重大影响（肾脏排泄极少）。
儿童/老年人：数据有限；相关研究正在进行中。
7.临床意义
最佳剂量：通常每日一次或间歇给药（例如，用药5天/停药2天）以控制毒性（例如，胃肠道反应、血小板减少症）。
治疗药物监测 (TDM)：由于药代动力学变异性较高，TDM 可能很有用。
伊达沙努林药代动力学汇总表
参数 特征
给药途径 口服（与食物同服）
生物利用度 中等 (~30-50%)
蛋白结合率 >99%（白蛋白）
代谢 CYP3A4、UGT1A1/1A3
半衰期 ~4-8 小时
排泄 粪便 (~70-80%)、尿液 (<5%)
关键药物 CYP3A4诱导剂/抑制剂
正在进行的研究
临床试验正在不断完善药代动力学特征，尤其是在联合疗法中（例如，与维奈托克治疗急性髓系白血病）。

安全性和耐受性[3]
所有患者的中位治疗持续时间为36天（范围：1-726天），其中15例患者（15.2%）的治疗时间超过91天（在线资源表S3）。QW×3、QD×3和QD×5组患者每日总剂量的中位数（范围）分别为10.5（2-72）、9.0（6-42）和10.0（1-130）。所有99例患者均纳入安全性分析人群；在所有队列中，78 例患者（78.8%）接受了 ≤ 2 个治疗周期。
每周一次（QW）× 3 次给药方案的最大耐受剂量（MTD）为 3200 mg（每日两次，每次 1600 mg），剂量限制性毒性（DLT）包括恶心、血小板减少症和呕吐（见在线资源表 S4），所有这些不良反应均在每日总剂量达到或超过 1600 mg 时出现。每日一次（QD）× 3 次给药方案的最大耐受剂量为 1000 mg（每日两次，每次 500 mg），剂量限制性毒性包括血小板减少症、发热性中性粒细胞减少症、中性粒细胞减少症和全血细胞减少症。每日一次（QD）× 5 次给药方案的最大耐受剂量为 500 mg（每日一次），剂量限制性毒性包括血小板减少症、中性粒细胞减少症、发热性中性粒细胞减少症和腹泻。所有队列（n = 99）共报告了31例剂量限制性毒性（DLT），其中21例患者（21.2%；剂量递增队列n = 20；凋亡队列n = 1）出现≥1种DLT。最常见的DLT是血小板减少症，99例患者中有16例（16.2%）发生。其他DLT包括中性粒细胞减少症（5例[5.1%]）、发热性中性粒细胞减少症（3例[3.0%]）、恶心（2例[2.0%]），以及白细胞减少症、全血细胞减少症、腹泻和呕吐（各1例[1.0%]）。在剂量递增队列中，每日给药方案（QD × 3 组为 40%，QD × 5 组为 32.4%）的剂量限制性毒性（DLT）发生率高于每周给药方案（8.3%），且每日给药方案中与血液系统和淋巴系统疾病相关的 DLT 发生率更高（在线资源表 S4）。
所有 99 例患者均出现 ≥ 1 例研究者认为与研究治疗相关的不良事件（AE）（表 1）。最常见的治疗相关不良事件为腹泻（74.7%）、恶心（71.7%）、呕吐（50.5%）、食欲下降（43.4%）和血小板减少症（39.4%；在线资源表 S5）。总体而言，QD × 3 方案的治疗相关不良事件发生率最高； QD × 5 方案的不良事件发生率最低（见在线资源表 S5）。
63 例患者（63.6%）发生 ≥ 3 级任何原因引起的不良事件，且 QD 给药方案的发生率更高（见表 1）。最常见的 ≥ 3 级任何原因引起的不良事件为血小板减少症（29.3%）、贫血（20.2%）、中性粒细胞减少症（16.2%）、恶心（11.1%）和腹泻（7.1%）。所有研究组中共有 32 例患者（32.3%）报告了严重不良事件（SAE）（见表 1；在线资源表 S6）。其中 25 例患者（25.3%）报告了与治疗相关的严重不良事件；最常报告的疾病（25 例患者中有 24 例）与血液和淋巴系统疾病有关：血小板减少症/血小板计数降低（14 例）、发热性中性粒细胞减少症（5 例）、中性粒细胞减少症/中性粒细胞计数降低（4 例）、白细胞减少症/白细胞计数降低（3 例）和贫血（2 例）。与每周一次（QD）给药方案（36例患者中有4例[11.1%]）相比，每日一次（QD）给药方案（3次）和每日一次（QD）给药方案（5次）报告的治疗相关严重不良事件（SAE）更为常见（QD × 3，15例患者中有7例[46.7%]；QD × 5，34例患者中有13例[38.2%]）（见在线资源表S6）。
大多数患者（99例患者中有81例[81.8%]）因非安全性原因停止治疗：疾病进展（n = 77）、患者撤回知情同意（n = 3）和其他未指明原因（n = 1）。18例患者（18.2%）因不良事件（AE）退出治疗，其中8例被认为是严重不良事件。与接受每周一次（QW×3）方案治疗的患者（不包括食物影响组）相比，接受每日给药方案治疗的患者（不包括凋亡成像组）中，因不良事件（AE）导致的停药率更高（QD×3组为20.0%，QD×5组为29.4%，而QW×3组为11.1%）。所有患者中导致研究药物停用的最常见不良事件为中性粒细胞减少症、血小板减少症和肺栓塞（均为3.0%）。与研究退出相关的不良事件更可能为血液学性质，且严重程度≥3级。
44例患者（44.4%）报告了因不良事件导致的剂量调整/中断，每周给药方案和每日给药方案的发生频率相似（表1）。其中，36例接受每周一次（QW）× 3次给药方案的患者中有16例（44.4%）需要调整剂量，15例接受每日一次（QD）× 3次给药方案的患者中有7例（46.7%）需要调整剂量，34例接受每日一次（QD）× 5次给药方案的患者中有18例（52.9%）需要调整剂量。导致剂量调整的最常见不良事件是血小板减少症（24.2%）和中性粒细胞减少症（9.1%）。
总体而言，治疗期间或末次给药后28天内共发生7例死亡：5例死于疾病进展，2例死于严重不良事件（SAE）（表1）。1例死亡（QW × 3组）死于腹腔内出血和肺栓塞，均被确定与研究治疗无关。另1例死亡（QD × 5组）死于肺栓塞，可能与研究治疗相关。

[1]. Discovery of RG7388, a potent and selective p53-MDM2 inhibitor in clinical development. J Med Chem. 2013 Jul 25;56(14):5979-83.

[2]. Preclinical optimization of MDM2 antagonist scheduling for cancer treatment by using a model-based approach. Clin Cancer Res. 2014, 20(14), 3742-3752.

[3]. Phase I study of daily and weekly regimens of the orally administered MDM2 antagonist idasanutlin in patients with advanced tumors. Invest New Drugs . 2021 Dec;39(6):1587-1597. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34180037/

伊达沙努林已用于研究肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、白血病、髓系白血病、急性复发性浆细胞骨髓瘤以及肿瘤、白血病、急性髓系白血病的治疗。
伊达沙努林是一种口服小分子MDM2（鼠双微体2；MDM2 p53结合蛋白同源物）拮抗剂，具有潜在的抗肿瘤活性。伊达沙努林与MDM2结合，阻断MDM2蛋白与肿瘤抑制蛋白p53转录激活结构域之间的相互作用。通过阻止MDM2-p53相互作用，p53不会被酶促降解，其转录活性得以恢复。这可能导致p53介导的肿瘤细胞凋亡。 MDM2是一种锌指核磷蛋白，也是p53通路负调控因子，在癌细胞中常过度表达，并与癌细胞增殖和存活密切相关。

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药物适应症
治疗所有恶性肿瘤（神经系统、造血和淋巴组织肿瘤除外）
治疗急性淋巴细胞白血病，治疗急性髓系白血病

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通过抑制p53-MDM2相互作用来恢复p53活性被认为是一种有吸引力的癌症治疗方法。然而，疏水性的蛋白质-蛋白质相互作用表面给开发具有理想药理学特性的小分子抑制剂带来了巨大挑战。RG7112是首个进入临床开发的小分子p53-MDM2抑制剂。本文报道了第二代临床MDM2抑制剂RG7388的发现和表征，该抑制剂具有更高的效力和选择性。[1]

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目的：MDM2拮抗剂RG7112已证实具有抗肿瘤临床活性，但患者对每日给药的耐受性较差。本文利用第二代营养抑制剂RG7388（具有更高的选择性和效力），探讨间歇给药方案的可行性，以指导I期临床试验的初始给药方案选择。实验设计：基于临床前数据，我们建立了药代动力学-药效学（PKPD）模型，以确定RG7388诱导最佳抗肿瘤活性所需的替代给药方案。该PKPD模型用于研究RG7388的药代动力学及其在小鼠骨肉瘤异种移植模型中抗肿瘤作用的时间进程。这些数据用于前瞻性地预测间歇和持续给药方案，以期在同一模型系统中实现肿瘤抑制。结果：RG7388 诱导的细胞凋亡相对于药物暴露时间有所延迟，且无需持续治疗。在初步疗效测试中，每日 30 mg/kg 和每周两次 50 mg/kg 的 RG7388 给药方案在我们的肿瘤模型中具有统计学等效性。此外，每周 50 mg/kg 的给药方案与每日 10 mg/kg 的给药方案疗效相当。基于这些数据的建模和模拟提出了几种可能的间歇性临床给药方案。进一步的临床前分析证实了这些方案的可行性。结论：除长期给药外，如建模和模拟预测的那样，RG7388 的间歇给药方案也能达到抗肿瘤活性。这些替代方案可能有助于改善 RG7388 长期给药的耐受性问题，同时带来临床获益。因此，RG7388 的临床试验选择了每周一次 (qw) 和每日一次，连续五天（5 天用药/23 天停药，qd）两种给药方案。[2]

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目的：口服 MDM2 拮抗剂 idasanutlin 可抑制 p53-MDM2 相互作用，从而激活 p53，抑制肿瘤生长，并提高异种移植模型中的生存率。方法：我们开展了一项 idasanutlin（微沉淀散装粉末制剂）的 I 期研究，旨在确定其在晚期恶性肿瘤患者中的最大耐受剂量 (MTD)、安全性、药代动力学、药效学、食物影响和临床活性。研究的给药方案包括每周一次，连续 3 周 (QW × 3)、每日一次，连续 3 天 (QD × 3) 或每 28 天一次，连续 5 天 (QD × 5)。我们还分析了 p53 激活和 idasanutlin 的抗增殖作用。结果：剂量递增阶段共纳入85例患者（每周一次，共3次，n = 36；每日一次，共3次，n = 15；每日一次，共5次，n = 34）。每日最大耐受剂量（MTD）分别为：每周一次，共3次，3200 mg；每日一次，共3次，1000 mg；每日一次，共5次，500 mg。最常见的不良事件为腹泻、恶心/呕吐、食欲下降和血小板减少。剂量限制性毒性为恶心/呕吐和骨髓抑制；每日一次给药方案的骨髓抑制发生率更高，且与药代动力学暴露量相关。低剂量时，伊达沙努林暴露量与剂量大致成正比，但剂量>600 mg时，暴露量与剂量不成正比。尽管所有给药方案的患者间暴露量差异均较大，但每日一次，共5次给药方案在整个28天周期内的伊达沙努林累积暴露量最高。食物对药物动力学暴露量无显著影响。每日一次给药方案下MIC-1水平较高，且呈暴露量依赖性增加。最佳疗效为30.6%的患者病情稳定，其中2例肉瘤患者的病情稳定期超过600天。结论：伊达沙努林表现出剂量和给药方案依赖性的p53激活作用，并在部分患者中实现了持久的病情稳定。基于这些发现，选择每日一次×5的给药方案进行进一步开发。[3]

C31H29CL2F2N3O4

616.48

615.15

C, 60.40; H, 4.74; Cl, 11.50; F, 6.16; N, 6.82; O, 10.38

Idasanutlin;1229705-06-9

118703721

Typically exists as solid at room temperature

7.1

114.94

3

8

8

42

1040

4

CC(C)(C)C[C@@H]1[C@@]([C@@H]([C@H](N1)C(=O)NC2=C(C=C(C=C2)C(=O)O)OC)C3=C(C(=CC=C3)Cl)F)(C#N)C4=C(C=C(C=C4)Cl)F

TVTXCJFHQKSQQM-LJQIRTBHSA-N

InChI=1S/C31H29Cl2F2N3O4/c1-30(2,3)14-24-31(15-36,19-10-9-17(32)13-21(19)34)25(18-6-5-7-20(33)26(18)35)27(38-24)28(39)37-22-11-8-16(29(40)41)12-23(22)42-4/h5-13,24-25,27,38H,14H2,1-4H3,(H,37,39)(H,40,41)/t24-,25-,27+,31-/m0/s1

4-[[(2S,3R,4S,5R)-3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-4-(4-chloro-2-fluorophenyl)-4-cyano-5-(2,2-dimethylpropyl)pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methoxybenzoic acid

Idasanutlin (enantiomer); RG7388 (enantiomer); IDASANUTLIN ENANTIOMER; 4-((2S,3R,4S,5R)-3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-4-(4-chloro-2-fluorophenyl)-4-cyano-5-neopentylpyrrolidine-2-carboxaMido)-3-Methoxybenzoic acid;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。