K+ channel[1]

apimin (0.5-2 μg/mL) 处理 24 小时可显着抑制 HSC-T6 细胞中 TGF-β1 诱导的 α-SMA 表达。服用 apimin 可消除 TGF-β1 产生的 p-Smad2/3 和 Smad4 的激活 [1]。

---

Apamin通过Smad信号通路抑制HSC的激活[1]
TGF-β1是Smad家族成员，已知可刺激HSC的激活。接下来，我们研究了apamin对TGF-β1激活HSC的抑制作用是否是通过Smad信号通路实现的。TGF-β1可增加HSC-T6细胞中α-SMA和I型胶原的表达，而apamin处理可降低其表达（图7A）。此外，免疫荧光显示TGF-β1通过增加α-SMA表达诱导HSC-T6细胞活化（图7C）。然而，apamin治疗显著降低了TGF-β1诱导的HSC-T6细胞中α-SMA的表达。Western blot分析显示，2ng/ml TGF-β1刺激Smad2/3和Smad4的磷酸化（图7B）。阿帕明治疗消除了TGF-β1诱导的p-Smad2/3和Smad4的激活。这些结果表明，apamin可能通过抑制Smad信号通路来减弱TGF-β1激活的HSC。

用 apamin 治疗（0.1 mg/kg；每周两次；腹腔注射；4 周；C57BL/6 雄性小鼠）引起肝损伤并降低促炎细胞因子水平。在给予 3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢可力丁 (DDC) 的小鼠中，Apamin 可抑制纤维化基因的表达、BEC 增殖和胶原沉积 [1]。

---

Apamin改善肝损伤和炎症性肝损伤[1]
为了研究阿帕明治疗对肝纤维化的影响，使用DDC饮食喂养诱导的小鼠模型。当用DDC饮食挑战4周时，NC组的肝小叶结构清晰（图1A），DDC喂养组有大量胆管增殖，伴有炎性细胞浸润，如H&E染色所示（图1C）。此外，与DDC喂养组相比，apamin治疗组的上述病理变化有所减少（图1D）。Masson三色染色显示DDC喂养组增殖胆管周围有胶原沉积（图2C）。相比之下，阿帕明治疗导致纤维化和胶原沉积减少（图2D）。 在胆道疾病中，胆管的炎症和反应性增殖与胆管纤维化的发展密切相关。ELISA和蛋白质印迹分析表明，与NC组相比，DDC喂养组的IL-6、IFN-γ、TNF-α和IL-1β的表达水平显著升高（图3）。然而，与DDC喂养组相比，apamin治疗减弱了炎症细胞因子的表达，包括IL-6、IFN-γ、TNF-α和IL-1β。综上所述，这些数据证实了apamin对DDC喂养的小鼠的抗炎和中度抗纤维化作用。

---

Apamin对DDC喂养小鼠BEC增殖的影响[1]
接下来，我们通过CK19表达的免疫荧光法确定了apamin对DDC喂养小鼠导管反应的影响。先前已证明，小鼠慢性DDC喂养会导致胆管炎和针对BEC的免疫反应，并破坏胆管和小导管（18）。CK19被认为是胆汁上皮细胞的标志（19）。免疫荧光染色显示，CK19在扩大的门静脉束胆管中的BEC中高度表达（图4）。与NC组相比，DDC喂养组CK19的表达显著增加。相比之下，阿帕明治疗显著降低了胆管的活化和增殖，CK19染色证明了这一点，表明胆管反应存在缺陷。此外，PCNA的免疫荧光染色显示，与DDC喂养组相比，apamin治疗抑制了BECs的增殖。这些结果表明，apamin可能通过抑制DDC饮食诱导的BEC增殖和导管反应来抑制胆汁淤积性肝纤维化。

---

Apamin抑制DDC喂养小鼠肝脏中的ECM沉积[1]
为了研究apamin对DDC喂养小鼠ECM沉积的抗纤维化作用，我们使用蛋白质印迹分析、免疫组织化学和免疫荧光分析来确定该化合物对ECM分子的影响。DDC诱导的肝纤维化通过诱导纤维化基因、FSP-1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和I型胶原的表达得到证实。在DDC喂养组中，α-SMA在增殖胆管周围的肌成纤维细胞和HSC中强烈表达，在apamin治疗组中表达明显（图5）。此外，DDC喂养组中I型胶原的表达显著增加，尤其是在门静脉束中。与DDC组相比，apamin治疗抑制了I型胶原的表达。在肝纤维化的组织重塑过程中，FSP-1被认为是纤维化肝脏中成纤维细胞的标志物。DDC喂养增加了FSP-1表达阳性的细胞数量（图6C）。相比之下，apamin治疗导致FSP-1阳性细胞减少（图6D）。此外，蛋白质印迹结果显示，与DDC喂养组相比，DDC喂养组TGF-β1、I型胶原和纤维连接蛋白的表达水平显著升高，而apamin治疗显著降低了TGF-β1，I型胶原以及纤维连接蛋白水平（图6F）。综上所述，这些数据表明，apamin可能通过抑制纤维化基因表达来保护DDC喂养期间的肝纤维化。

蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： HSC-T6 细胞
测试浓度： 0.5 µg/mL、1 µg/mL 和 2 µg/mL
孵育时间：24小时
实验结果：显着降低TGF-β1诱导的HSC-T6细胞中α-SMA的表达。消除 TGF-β1 诱导的 p-Smad2/3 和 Smad4 的激活。

---

HSC-T6细胞是一种永生化的大鼠肝星状细胞系，具有稳定的表型和生化特征，由S.L.Friedman博士提供。细胞在37°C的加湿培养箱中，在5%的CO2气氛下培养。将HSC-T6细胞接种在完全培养基中24小时。将细胞换成含有指定浓度Apamin（0.5、1和2µg/ml）的新鲜无血清培养基。24小时后，用含有2ng/ml TGF-β1的新鲜无血清培养基替换细胞24小时[1]。

Animal/Disease Models: 8weeks old C57BL/6 male mice (20-25 g) with DDC feeding[1]
Doses: 0.1 mg/kg
Route of Administration: intraperitoneal (ip)injection; twice a week; for 4 weeks
Experimental Results: Resulted in diminished liver injury and proinflammatory cytokine levels. Suppressed the deposition of collagen, proliferation of BECs and expression of fibrogenic genes in the DDC-fed mice.

---

DDC-induced mouse model of biliary fibrosis [1]
For induction of liver injury, 8-week-old C57BL/6 male mice (20–25 g) were selected. Male C57BL/6 mice were fed a control diet or a DDC supplemented diet (0.1%) for 4 weeks to induce advanced biliary fibrosis as previously described. The mice received an intraperitoneal injection of Apamin (0.1 mg/kg) dissolved in saline twice a week. Mice were sacrificed after 4 weeks from the first DDC diet administration.
Apamin was dissolved in 4 mM HCl containing 0.1% bovine serum albumin (BSA).

16133797 mouse LD50 intraperitoneal 3800 ug/kg Toxicon., 22(308), 1984 [PMID:6145236]
16133797 mouse LD50 subcutaneous 2900 ug/kg BEHAVIORAL: ATAXIA European Journal of Biochemistry., 56(35), 1975 [PMID:1175625]
16133797 mouse LD50 intravenous 4 mg/kg BEHAVIORAL: EXCITEMENT; BEHAVIORAL: CHANGES IN MOTOR ACTIVITY (SPECIFIC ASSAY) Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology., 300(189), 1977 [PMID:593441]
16133797 mouse LD50 intracrebral 1800 ng/kg Toxicon., 22(308), 1984 [PMID:6145236]
16133797 mouse LD50 parenteral 600 mg/kg Toxicon., 20(157), 1982

[1]. Apamin suppresses biliary fibrosis and activation of hepatic stellate cells. Int J Mol Med. 2017 May;39(5):1188-1194.

A highly neurotoxic polypeptide from the venom of the honey bee (Apis mellifera). It consists of 18 amino acids with two disulfide bridges and causes hyperexcitability resulting in convulsions and respiratory paralysis.

---

Cholestatic liver disease is characterized by the progressive destruction of biliary epithelial cells (BECs) followed by fibrosis, cirrhosis and liver failure. Activated hepatic stellate cells (HSCs) and portal fibroblasts are the major cellular effectors of enhanced collagen deposition in biliary fibrosis. Apamin, an 18 amino acid peptide neurotoxin found in apitoxin (bee venom), is known to block Ca2+-activated K+ channels and prevent carbon tetrachloride-induced liver fibrosis. In the present study, we aimed to ascertain whether apamin inhibits biliary fibrosis and the proliferation of HSCs. Cholestatic liver fibrosis was established in mouse models with 3,5-diethoxycarbonyl-1,4-dihydrocollidine (DDC) feeding. Cellular assays were performed on HSC-T6 cells (rat immortalized HSCs). DDC feeding led to increased hepatic damage and proinflammtory cytokine levels. Notably, apamin treatment resulted in decreased liver injury and proinflammatory cytokine levels. Moreover, apamin suppressed the deposition of collagen, proliferation of BECs and expression of fibrogenic genes in the DDC-fed mice. In HSCs, apamin suppressed activation of HSCs by inhibiting the Smad signaling pathway. These data suggest that apamin may be a potential therapeutic target in cholestatic liver disease. [1]
The principal finding of this study is the anti-fibrotic effects of apamin. Apamin suppressed the proliferation of BECs and activation of HSCs. In the present study, apamin significantly inhibited bile duct proliferation and reduced ECM deposition in the DDC-fed mice. Furthermore, apamin suppressed the protein expression of p-Smad2/3 and Smad4 induced by TGF-β1 in the HSCs. These results suggest that apamin inhibits the proliferation of BECs and activation of HSCs by suppressing the TGF-β1 signaling pathway in hepatic fibrosis. [1]

C81H132F3N31O26S4

2141.36

2139.87947

Apamin;24345-16-2

CNCKAPETALCARRCQQH-NH2 (Disulfide bridge: Cys1-Cys11;Cys3-Cys15); H-Cys(1)-Asn-Cys(2)-Lys-Ala-Pro-DL-Glu-Thr-Ala-Leu-Cys(1)-Ala-Arg-Arg-Cys(2)-Gln-Gln-His-NH2.TFA; L-cysteinyl-L-asparagyl-L-cysteinyl-L-lysyl-L-alanyl-L-prolyl-DL-alpha-glutamyl-L-threonyl-L-alanyl-L-leucyl-L-cysteinyl-L-alanyl-L-arginyl-L-arginyl-L-cysteinyl-L-glutaminyl-L-glutaminyl-L-histidinamide (1->11),(3->15)-bis(disulfide) trifluoroacetic acid

CNCKAPETALCARRCQQH

White to off-white solid powder

1060 Ų

C[C@H]1C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N3CCC[C@H]3C(=O)NC(C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N2)CC(=O)N)N)C(=O)N1)CC(C)C)C)[C@@H](C)O)CCC(=O)O)C)CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC4=CN=CN4)C(=O)N)CCCNC(=N)N)CCCNC(=N)N.C(=O)(C(F)(F)F)O

GUBJIBRYPCCYMV-AHHFRWINSA-N

InChI=1S/C79H131N31O24S4.C2HF3O2/c1-35(2)26-49-70(127)107-51-31-136-135-30-41(81)63(120)105-50(28-57(84)114)71(128)108-53(73(130)99-42(12-7-8-22-80)64(121)96-38(5)77(134)110-25-11-15-54(110)75(132)102-47(18-21-58(115)116)69(126)109-59(39(6)111)76(133)95-37(4)62(119)104-49)33-138-137-32-52(106-66(123)44(14-10-24-92-79(88)89)98-65(122)43(13-9-23-91-78(86)87)97-61(118)36(3)94-72(51)129)74(131)101-45(16-19-55(82)112)67(124)100-46(17-20-56(83)113)68(125)103-48(60(85)117)27-40-29-90-34-93-40;3-2(4,5)1(6)7/h29,34-39,41-54,59,111H,7-28,30-33,80-81H2,1-6H3,(H2,82,112)(H2,83,113)(H2,84,114)(H2,85,117)(H,90,93)(H,94,129)(H,95,133)(H,96,121)(H,97,118)(H,98,122)(H,99,130)(H,100,124)(H,101,131)(H,102,132)(H,103,125)(H,104,119)(H,105,120)(H,106,123)(H,107,127)(H,108,128)(H,109,126)(H,115,116)(H4,86,87,91)(H4,88,89,92);(H,6,7)/t36-,37-,38-,39+,41-,42-,43-,44-,45-,46-,47?,48-,49-,50-,51-,52-,53-,54-,59-;/m0./s1

3-[(1R,4S,7S,13S,19S,22S,25S,28R,31S,34S,37S,40R,47S,50R)-50-amino-40-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-1-amino-3-(1H-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]carbamoyl]-4-(4-aminobutyl)-47-(2-amino-2-oxoethyl)-34,37-bis(3-carbamimidamidopropyl)-19-[(1R)-1-hydroxyethyl]-7,22,31-trimethyl-25-(2-methylpropyl)-2,5,8,14,17,20,23,26,29,32,35,38,46,49-tetradecaoxo-42,43,52,53-tetrathia-3,6,9,15,18,21,24,27,30,33,36,39,45,48-tetradecazatricyclo[26.16.10.09,13]tetrapentacontan-16-yl]propanoic acid;2,2,2-trifluoroacetic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O :~50 mg/mL (~23.35 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。