Quemliclustat (AB-680) ammonium

Ki: 4.9 pM (hCD73)[1]

AB-680 ammium 可降低人、小鼠 CD8+ T 细胞和 hPBMC 中的 CD73，IC50 分别为 0.070、0.008、0.66 和 0.011 nM。它还在 CHO 细胞中抑制可溶性 hCD73，IC50 为 0.043 nM[1]。

基于AB680在体外的非凡效力和在临床前物种中良好的药代动力学特征，AB680被推进到健康志愿者的I期临床研究。这项安慰剂对照研究评估了AB680的安全性、耐受性和PK/PD特征。在这里，我们给出了AB680在人体内的初始药代动力学数据。AB680单次静脉给药在0.1 - 25mg范围内耐受性良好（6个队列）。所有治疗中出现的不良事件的严重程度均为轻度或中度，在这些剂量水平下没有明确的毒性模式。AB680在静脉输注16或25毫克30-60分钟后显示出低清除率和较长的半衰期（67-74小时）。AB680的人体PK谱与预期的Q2W给药计划一致，并验证了用于发现静脉给药的长效药物的设计策略。[1]

CYP抑制过程：[1] 测试化合物在体外评估其抑制细胞色素P450家族主要人类药物代谢酶的潜力。在0.1 mg/mL人肝微粒体蛋白悬浮液中，以0.1 M磷酸钾缓冲液（pH 7.4, NADPH 1 mM）和探针底物(非那西丁（CYP1A2），双氯芬酸（CYP2C9）， s -美苯妥英（CYP2C19），右美沙芬（CYP2D6）和咪达唑仑（CYP3A4），分别在0至40µM的浓度范围内孵育测试化合物。每个底物在37°C下孵育5至20分钟，按照之前的实验验证定义。收集每个底物的样品，并与其他底物孵育的样品混合，用LC-MS/MS测定产物形成。采用变斜率（4参数）模型计算IC50值。以呋喃茶碱（1A2）、磺胺苯唑（2C9）、(+)- n -3-苄基硝基醇（2C19）、奎尼丁（2D6）、酮康唑（3A4）作为对照。

细胞人CD73测定。[1] 人CD73稳定CHO细胞系的生成与扩增Lake Pharma使用标准方案将携带人NT5E （CD73）基因的pcDNA3.1（+）载体转化CHO细胞，生成稳定的细胞系。在含有5 μg / mL purromycin和200 μg / mL潮霉素b的CD OptiCHO细胞培养基中进行抗生素选择，收集存活的CHO-CD73细胞池，在CD OptiCHO细胞培养基中7.5% DMSO冷冻。冷冻保存的细胞在37°C的水浴中通过搅拌小瓶解冻，直到细胞完全解冻。然后将细胞转移到15ml Falcon管中，以225 × g离心5分钟使细胞成球。将细胞颗粒重悬于添加2 mM谷氨酰胺的新鲜温CD OptiCHO生长培养基中，并转移到T175瓶中。两天后，在达到~80%的合流度（~ 2000万个细胞/烧瓶）时，细胞以1:3的比例分成三个新鲜的T175烧瓶。再过三天，将细胞转移到15 mL的Falcon试管中，在250 × g离心5分钟至成球。将细胞以每mL 300万个细胞的密度重新悬浮在CellBanker2低温保存培养基中，并将其放入低温小瓶中。细胞等分液在-80°C保存直至需要。

临床研究[1] 这项I期临床研究是一项首次在人体中进行的双盲、随机、安慰剂对照的单次递增剂量（SAD）和多次递增剂量（MAD）联合研究，旨在评估AB680在健康志愿者中的安全性、耐受性、药代动力学（PK）和潜在药效学（PD）效应。受试者被随机分配到SAD部分的七个剂量组中，分别接受AB680（n = 6）或匹配的安慰剂（n = 2）治疗；在MAD部分，受试者被随机分配到一个单剂量组。在SAD部分，受试者接受单次静脉输注0.1、0.6、2、4、8、16或25 mg的AB680或安慰剂。在 MAD 研究部分，参与者在 3 天（第 1、8 和 15 天）内每天接受一次 8 毫克 AB680 或安慰剂的静脉输注。

[1]. Discovery of AB680: A Potent and Selective Inhibitor of CD73. J Med Chem . 2020 Oct 22;63(20):11448-11468.

[2]. Discovery and Characterization of AB680, a Potent and Selective Small-Molecule CD73 Inhibitor for Cancer Immunotherapy.

Quemliclustat 是一种小分子竞争性抑制剂，可抑制胞外酶 CD73（分化簇 73；5'-胞外核苷酸酶；5'-NT；胞外 5'-核苷酸酶），具有潜在的免疫调节和抗肿瘤活性。给药后，quemliclustat 靶向并结合 CD73，导致 CD73 聚集和内吞。这可阻止 CD73 介导的腺苷单磷酸 (AMP) 转化为腺苷，并降低肿瘤微环境 (TME) 中游离腺苷的含量。这可阻止腺苷介导的淋巴细胞抑制，并增强 CD8 阳性效应细胞和自然杀伤 (NK) 细胞的活性。此外，它还能激活巨噬细胞，并降低髓源性抑制细胞 (MDSC) 和调节性 T 淋巴细胞 (Treg) 的活性。 CD73通过消除对免疫系统的抑制作用并增强细胞毒性T细胞介导的抗癌细胞免疫反应，从而抑制肿瘤细胞生长。此外，CD73的聚集和内化可减少癌细胞的迁移并阻止转移。CD73是一种属于5'-核苷酸酶（NTase）家族的质膜蛋白，在多种癌细胞类型中表达上调，它催化胞外核苷酸（如AMP）转化为膜通透性核苷（如腺苷）；它在肿瘤微环境（TME）中腺苷介导的免疫抑制中发挥关键作用。

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肿瘤微环境（TME）中高浓度的胞外腺苷（ADO）通过抑制T细胞和NK细胞的活化来抑制免疫功能。肿瘤内腺苷甲硫氨酸（ADO）的生成依赖于两种胞外核苷酸酶CD39（ATP→AMP）和CD73（AMP→ADO）对ATP的顺序分解代谢。抑制CD73可阻断肿瘤微环境（TME）中ADO生成的主要途径，并逆转ADO介导的免疫抑制。通过对构效关系（SAR）、基于结构的药物设计以及药代动力学性质的优化进行深入研究，最终发现了AB680，一种高效（Ki = 5 pM）、可逆且选择性的CD73抑制剂。AB680在临床前动物模型中还表现出极低的清除率和较长的半衰期，使其具有适合长效肠外给药的药代动力学特征。AB680目前正在进行I期临床试验。初步数据显示，AB680 耐受性良好，其药代动力学特征适合每两周（Q2W）静脉给药。[1]

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引言。细胞外腺苷 (ADO) 通过抑制 T 细胞和 NK 细胞活化来抑制免疫功能，并在肿瘤微环境 (TME) 中高浓度存在。肿瘤内 ADO 的生成依赖于两种胞外核苷酸酶 CD39 (ATP→AMP) 和 CD73 (AMP→ADO) 对 ATP 的顺序分解代谢。抑制 CD73 可消除 TME 中 ADO 生成的主要且不可替代的途径，并可逆转 ADO 介导的免疫抑制。本文介绍了 AB680 的特性，AB680 是一种新型、高效、可逆且选择性的 CD73 小分子抑制剂，目前正处于临床前开发阶段，有望成为一种抗肿瘤药物。
方法。采用孔雀绿法测定CHO-CD73细胞对AMP的水解情况，评估CD73抑制剂的效力。同时，也使用人T细胞和可溶性重组CD73测定了效力。此外，还评估了对相关胞外核苷酸酶的选择性。在人血清存在下，通过发光法定量AMP水解来测定CD73抑制情况。通过在抗CD3/CD28/CD2磁珠激活T细胞的过程中添加外源性AMP，确定AB680逆转AMP介导的人CD4+/CD8+ T细胞免疫抑制的能力。在多种临床前动物模型中评估了AB680的药代动力学特性。通过异速缩放法确定了AB680的预计人体给药方案。
结果。 AB680 是一种高效、可逆且选择性的 CD73 抑制剂（对人 CD8+ T 细胞的 IC50 < 0.01 nM），即使在人血清存在下仍保持高效活性。AB680 对相关胞外核苷酸酶以及大量不相关的酶、受体和离子通道的选择性超过 10,000 倍。AB680 对主要的 CYP450 同工酶或 hERG 钾通道没有显著的抑制作用。AB680 能有效逆转体外 AMP 和 ADO 介导的免疫功能抑制。在高浓度 AMP 存在的情况下，AB680 能显著恢复人 CD4+ 和 CD8+ T 细胞的 CD25 表达、IFN-γ 产生和增殖。AB680 的药代动力学 (PK) 已在啮齿类动物和非啮齿类动物中进行了评估。 AB680 的药代动力学 (PK) 特性表现为在临床前动物模型中清除率极低、半衰期长，预计其在人体内的 PK 特性适合采用与典型单克隆抗体 (mAb) 给药周期一致的静脉 (iv) 给药方案。临床前动物模型中，高剂量 AB680 输注耐受性良好。
结论：AB680 是一种高效且选择性的 CD73 小分子抑制剂，可通过强效阻断肿瘤微环境 (TME) 中腺苷的产生，从而减轻 AMP 和 ADO 介导的肿瘤免疫反应。AB680 具有良好的预计人体 PK 特性，适合肠外给药，预计将于 2018 年进入临床开发阶段。[2]

C20H30CLFN6O9P2

614.12220

AB-680;2105904-82-1

162642790

Typically exists as solid at room temperature

204Ų

VVDIOJBTSCUIEW-AJLCLCFCSA-N

InChI=1S/C20H24ClFN4O9P2.2H3N/c1-10(11-4-2-3-5-13(11)22)24-14-6-16(21)25-19-12(14)7-23-26(19)20-18(28)17(27)15(35-20)8-34-37(32,33)9-36(29,30)31;;/h2-7,10,15,17-18,20,27-28H,8-9H2,1H3,(H,24,25)(H,32,33)(H2,29,30,31);2*1H3/t10-,15+,17+,18+,20+;;/m0../s1

diazanium;[(2R,3S,4R,5R)-5-[6-chloro-4-[[(1S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl]amino]pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl]-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-[[hydroxy(oxido)phosphoryl]methyl]phosphinate

AB-680 (ammonium); AB-680 ammonium

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。