| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 10mg | ||
| 50mg | ||
| 100mg | ||
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
c-Met (IC50 = 4 nM)
Tepotinib hydrochloride targets c‑Met (mesenchymal‑epithelial transition factor, also known as MET/HGFR), a receptor tyrosine kinase that is dysregulated in various cancers. It is approved for the treatment of non‑small cell lung cancer (NSCLC) harboring MET exon 14 (METex14) skipping mutations. It also has potential activity in other MET‑driven cancers. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
盐酸替波替尼对IRAK4、TrkA、Axl、IRAK1、Mer和TrkA的抑制IC50值分别为615、1017、1566、2037、2272和5716 nM[1]。盐酸替波替尼对A549细胞中HGF诱导的c-Met磷酸化具有抑制作用，平均IC50值为6 nM[1]。盐酸替波替尼（0.01 nM-30 μM）可抑制体外肿瘤细胞的增殖和迁移[1]。
盐酸替泊替尼（0.01 nM～30 uM）在体外可抑制肿瘤细胞增殖和迁移。它是一种高选择性、可逆的ATP竞争性c-Met抑制剂，IC50值为3 nM。它对其他激酶的选择性超过200倍，并能诱导癌细胞自噬。它通过阻断c-Met磷酸化及其下游信号通路发挥作用。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
盐酸替泊替尼可诱导异种移植模型中的肿瘤消退，并在体内抑制 c-Met 磷酸化 [1]。
盐酸替泊替尼在异种移植模型中可诱导肿瘤消退，并在体内抑制c-Met磷酸化。它已在多种MET驱动的癌症模型中显示出抗肿瘤疗效。该化合物对METex14突变型非小细胞肺癌（NSCLC）患者具有临床活性，并在临床试验中观察到持久的疗效。推荐的每日口服剂量为500毫克。 |
| 酶活实验 |
EMD 1214063 和 EMD 1204831 选择性地抑制 c-Met 受体酪氨酸激酶活性。与它们对 242 种人类激酶的影响相比，它们的抑制活性强效（半数抑制浓度 (IC50) 分别为 3 nmol/L 和 9 nmol/L），且具有高度选择性。EMD 1214063 和 EMD 1204831 均以剂量依赖的方式抑制 c-Met 磷酸化及其下游信号传导，但抑制活性的持续时间不同[1]。
c-Met 体外激酶活性测定[1] 使用 242 种不同的激酶，在体外评估了 EMD 1214063 或 EMD 1204831（1 和 10 μmol/L）的激酶抑制作用。生化活性通过闪板法测定。将His6标签的重组人c-Met激酶结构域（Aa 974端；20 ng）和生物素标记的聚Ala-Glu-Lys-Tyr（6:2:5:1；500 ng）与待测化合物在室温下于100 μL缓冲液中孵育90分钟，该缓冲液含有0.3 μCi 33P-ATP、2.5 μg聚乙二醇20,000和1%二甲基亚砜（DMSO），具体方法如前所述。使用TopCount微孔板闪烁计数器和发光计数器测量放射性。使用RS/1软件程序通过非线性回归分析计算半数抑制浓度（IC50）。 [1] 磷酸化c-Met捕获ELISA[1] 采用Nunc-Immuno MicroWell 96孔实心板，通过c-Met捕获ELISA检测总c-Met磷酸化水平。A549人肺癌细胞在处理前2天接种，血清饥饿20小时，并在第3天用不同浓度的EMD 1214063或EMD 1204831或0.2% DMSO在37°C、5% CO2条件下处理45分钟。用100 ng/mL HGF刺激5分钟后，每孔加入70 μL冰冷的裂解缓冲液[20 nmol/L HEPES，pH 7.4；10% (V/V) 甘油；150 nmol/L NaCl； 1% (V/V) Triton-X-100；2 nmol/L EDTA] 并补充蛋白酶和磷酸酶抑制剂。在洗脱实验中，A549 细胞用 EMD 1214063 或 EMD 1204831 处理 45 分钟，洗涤后在无血清培养基中孵育 14 小时，然后用 HGF (100 ng/mL) 刺激。在 ELISA 中，捕获抗体特异性识别 c-Met 胞外结构域，而检测则使用抗磷酸酪氨酸生物素标记抗体。酪氨酸磷酸化通过链霉亲和素-过氧化物酶偶联物和化学发光法进行检测。 生化分析[1] 通过 Western blot 分析检测 EBC-1 细胞中 c-Met、Gab-1、Akt 和 Erk1/2 的磷酸化情况。简而言之，将细胞以每孔 3 × 10⁶ 个细胞的密度接种，在无血清培养基中培养 20 小时，并在与 EMD 1214063 孵育后第 3 天裂解细胞。蛋白质经 SDS-PAGE 电泳分离后转移至硝酸纤维素膜上。膜用 Tris 缓冲盐溶液封闭，并在 4°C 下与一抗溶液（抗 pMet、抗 pAkt、抗 pERK1/2、抗 Gab1）孵育过夜。使用配备 Quantity One 1-D 分析软件的 VersaDoc MP 5000 成像系统，通过化学发光法检测蛋白质。 采用肽底物和ATP的标准激酶活性测定法测定tepotinib与纯化c-Met激酶的结合情况。将化合物与激酶孵育，加入ATP和底物后，测定剩余的激酶活性。IC50值由剂量-反应曲线计算得出，结果为3 nM。选择性通过对超过100种激酶的活性分析进行评估。 |
| 细胞实验 |
Tepotinib (EMD-1214063) 是一种高效且选择性极高的 c-Met 抑制剂。其 IC50 值为 4 nM，对 c-Met 的选择性比 IRAK4、TrkA、Axl、IRAK1 和 Mer 高 200 倍以上。
伤口愈合试验和增殖试验[1] 伤口愈合试验按先前所述方法进行。简而言之，用无菌移液器吸头在 NCI-H441 肺癌细胞单层上划痕。在有或无 100 ng/mL HGF 的情况下，监测 EMD 1210463 和 EMD 1204831 对细胞间隙闭合的影响，持续 24 小时。所有增殖和克隆形成试验均进行 4 次重复，并包含 4 个 DMSO 溶剂对照。 IC50 值采用 GraphPad Prism v5 中的 4PL 拟合确定。 离体肿瘤样本的药效学标志物[1] 采用 Western blot 分析法检测冷冻离体肿瘤样本中的 c-Met 自磷酸化。根据制造商说明，使用 Precellys 24 匀浆器或 Precellys 陶瓷裂解管（PEQLab Ltd）对肿瘤组织进行机械匀浆和裂解。裂解液的进一步制备和 SDS-PAGE 蛋白质分离方法与之前描述的 EBC-1 细胞相同。采用免疫组织化学 (IHC) 方法分析福尔马林固定、石蜡包埋切片上的组蛋白 H3 磷酸化以及细胞周期阻滞和凋亡的生物标志物（cyclin D1、p27 和 cleaved 活化的 caspase-3）。IHC 使用 Discovery 染色仪和 OmniMap 试剂盒，并按照制造商说明进行操作。切片用苏木精复染。 在体外效力测定中，将MET驱动的癌细胞系（例如H1993、MKN-45、EBC-1）接种于96孔板中，并用不同浓度（例如0.01 nM至30 uM）的替泊替尼处理72小时。采用MTT或CellTiter-Glo法检测细胞活力。在机制研究中，用3 nM替泊替尼处理细胞2-24小时，并通过Western blot检测c-Met磷酸化（p-MET）。同时评估自噬标志物（LC3-II、p62）。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：携带人癌细胞系KP-4或EBC-1[1]的CD-1或BALB/C裸鼠
剂量：携带非小细胞肺癌EBC-1的小鼠剂量为6和15 mg/kg；携带胰腺癌细胞系KP-4的小鼠剂量为25、50和200 mg/kg。 给药途径：每日注射，持续14-18天。 实验结果：每日向携带EBC-1肿瘤的小鼠注射5或15 mg/kg，分别可有效抑制或完全消退肿瘤。在携带人胰腺癌KP-4肿瘤的小鼠中，可诱导剂量依赖性的肿瘤生长抑制。 在小鼠异种移植模型中研究了EMD 1214063或EMD 1204831的抗肿瘤疗效。将人癌细胞系KP-4、U87MG（10 × 10⁶ 个细胞/100 μL）、Hs746T、EBC-1（5 × 10⁶ 个细胞/100 μL）皮下注射到CD-1或BALB/C裸鼠体内。待肿瘤达到线性生长期（70–150 mm³）后，将荷瘤小鼠（每组10只）每日注射指定剂量的EMD 1214063或EMD 1204831，或注射载体。每周两次测量小鼠体重和肿瘤大小[长度(L)和宽度(W)]。肿瘤体积采用公式L × W²/2计算。统计学显著性采用单因素方差分析(ANOVA)进行检验。 P ≤ 0.05 被认为具有统计学意义。 药代动力学和药效学研究[1] 采用高效液相色谱 (HPLC) 和质谱 (MS) 法测定血浆和肿瘤药物浓度。简而言之，血浆样品在甲醇中进行蛋白质沉淀，肿瘤样品在乙醇/水 (80:20, v/v) 混合溶液中，使用 Precellys 24 均质器进行均质。HPLC/串联质谱 (MS-MS) 系统由安捷伦 1100 系列 HPLC 系统、CTC HTC PAL 自动进样器和 Applied Biosystems API4000 质谱仪组成。HPLC 分离在反相色谱柱 (Chromolith SpeedROD RP-18e, 50–3 mm) 上进行，采用梯度洗脱（流动相 A：0.1% 甲酸；流动相 B：乙腈）。采用多反应监测 (MRM) 进行 MS/MS 检测，以实现化合物的选择性。体内药效学研究中的所有动物实验均按照当地动物福利机构批准的标准程序进行。将 5 × 10⁶ 个 Hs746T 细胞 (100 μL) 皮下注射到小鼠体内。待肿瘤体积达到 600 至 1000 mm³ 后，将小鼠随机分为不同的实验组，分别单次口服 3、10、30 和 100 mg/kg 的 EMD 1214063、EMD 1204831 或载体。分别于给药后 3、6、12、24、48、72 和 96 小时采集肿瘤和血浆样本。每个剂量和时间点每个实验组包含 4 只小鼠。将肿瘤组织样本进行速冻，用于药代动力学和生物标志物分析；或用福尔马林固定，用于免疫组织化学分析。 为了评估体内疗效，将携带MET驱动肿瘤细胞系（例如H1993、MKN-45）皮下异种移植瘤的雌性BALB/c裸鼠口服盐酸替泊替尼，剂量为50-200 mg/kg/天，持续2-4周。每周测量两次肿瘤体积。为了进行临床相关剂量评估，METex14突变型非小细胞肺癌（NSCLC）患者每日口服一次500 mg替泊替尼，直至疾病进展。肿瘤反应根据RECIST标准进行评估。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
吸收
口服替泊替尼的绝对生物利用度约为72%。推荐剂量为每日一次，每次450 mg，达峰时间（Tmax）中位数为8小时。平均稳态血浆峰浓度（Cmax）和曲线下面积（AUC0-24h）分别为1291 ng/mL和27438 ng·h/mL。与高脂肪、高热量食物同时服用可使替泊替尼的AUC和Cmax分别增加约1.6倍和2倍。 消除途径 口服后，约85%的给药剂量经粪便排出，其余部分经尿液排出。粪便排泄物中约有一半为未修饰的原药；其余部分包括去甲基化的 M478 代谢物、葡萄糖醛酸苷代谢物、外消旋的 M506 代谢物以及少量氧化代谢物。未修饰的原药约占尿液排泄量的一半，其余部分包括一种葡萄糖醛酸苷代谢物和一对 N-氧化物非对映异构体代谢物。 分布容积 平均表观分布容积为 1038 L。 清除率 替泊替尼的表观清除率为 23.8 L/h。 代谢物 替泊替尼主要由 CYP3A4 和 CYP2C8 代谢，一些未鉴定的 UGT 酶也有参与。代谢物 M506 是主要的循环代谢物，约占血浆中观察到的总药物浓度的 40.4%，而葡萄糖醛酸苷代谢物 M668 在血浆中的含量则低得多（约占口服剂量的 4%）。服用替泊替尼后检测到 10 种 I 期和 II 期代谢物，其中大部分经粪便排泄。 生物半衰期 口服替泊替尼的半衰期约为 32 小时。 盐酸替泊替尼的分子量为492.57（游离碱）。口服后，替泊替尼吸收良好，在人体内达峰时间（Tmax）约为2-5小时，消除半衰期约为20-30小时。它主要通过CYP3A4代谢，口服生物利用度中等（约50%）。该化合物广泛分布于包括脑在内的各种组织中。获批的临床剂量为每日一次，每次500毫克。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
肝毒性
在替泊替尼上市前临床试验中，携带MET突变的实体瘤患者出现肝功能障碍较为常见，但通常为自限性且程度较轻。44%接受替泊替尼治疗的患者出现不同程度的ALT升高，其中4%的患者ALT升高超过正常值上限（ULN）的5倍。在这些涉及255例患者的试验中，3%的患者因ALT或AST升高而停止治疗，但永久停止治疗的患者不足1%。肝功能障碍的中位发生时间为治疗开始后30天。尽管血清转氨酶偶尔会升高至更高水平（ULN的5至20倍），但并未伴有血清胆红素升高，也没有患者出现伴有黄疸的临床显著肝损伤。替泊替尼产品说明书建议在开始治疗前每 2 周进行一次常规肝功能检查，治疗的前 3 个月也应如此，之后根据临床需要每月检查一次。 概率评分：E（罕见，未经证实但怀疑是导致具有临床意义的肝损伤的原因）。 妊娠和哺乳期影响 ◉哺乳期用药概述 目前尚无关于替泊替尼在哺乳期临床应用的信息。由于替泊替尼与血浆蛋白的结合率高达 98%，其在母乳中的浓度可能非常低。然而，考虑到其对母乳喂养婴儿的潜在毒性及其 32 小时的半衰期，生产商建议在替泊替尼治疗期间以及末次给药后一周内停止母乳喂养。 ◉对母乳喂养婴儿的影响 截至修订日期，未找到相关的已发表信息。 ◉对哺乳和母乳的影响 截至修订日期，未找到相关的已发表信息。 蛋白结合率 替泊替尼在血浆中的蛋白结合率约为98%，主要与血清白蛋白和α1-酸性糖蛋白结合。在临床相关暴露水平下，血浆蛋白结合率与药物浓度无关。 在临床前研究中，盐酸替泊替尼显示出良好的耐受性，在治疗剂量下未观察到显著毒性。在临床试验中，最常见的不良事件（发生率≥20%）包括外周水肿、恶心、腹泻、疲乏和血肌酐升高。≥3级不良事件包括外周水肿、疲乏和ALT/AST升高。通过调整剂量和支持治疗，可以有效控制其安全性。 |
| 参考文献 |
|
| 其他信息 |
另请参阅：盐酸替泊替尼（注：已移至此处）。
盐酸替普替尼（商品名：Tepmetko®）是由默克集团/MD Serono公司研发的一种临床批准的高选择性口服MET抑制剂。该药于2020年3月在日本首次获批，用于治疗携带METex14跳跃突变的不可切除、晚期或复发性非小细胞肺癌（NSCLC），随后分别于2021年2月和2022年2月在美国和欧盟获批。目前，该化合物正处于针对其他MET驱动型癌症及联合疗法的研究阶段。 |
| 分子式 |
C29H28N6O2.XHCL
|
|---|---|
| 分子量 |
492.57 (free base)
|
| 精确质量 |
528.204
|
| CAS号 |
1103508-80-0
|
| 相关CAS号 |
1100598-32-0;1946826-82-9
|
| PubChem CID |
25171647
|
| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
|
| tPSA |
94.7
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
38
|
| 分子复杂度/Complexity |
880
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
C(C1C=CC=C(C2=NC=C(OCC3CCN(C)CC3)C=N2)C=1)N1C(C=CC(C2C=CC=C(C#N)C=2)=N1)=O.Cl
|
| InChi Key |
YHHHGHDGBUUWIS-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C29H28N6O2.ClH/c1-34-12-10-21(11-13-34)20-37-26-17-31-29(32-18-26)25-7-3-5-23(15-25)19-35-28(36)9-8-27(33-35)24-6-2-4-22(14-24)16-30;/h2-9,14-15,17-18,21H,10-13,19-20H2,1H3;1H
|
| 化学名 |
3-[1-[[3-[5-[(1-methylpiperidin-4-yl)methoxy]pyrimidin-2-yl]phenyl]methyl]-6-oxopyridazin-3-yl]benzonitrile;hydrochloride
|
| 别名 |
EMD-1214063 hydrochloride; 8B73AZL5XP; 1103508-80-0; Tepotinib hydrochloride anhydrous; UNII-8B73AZL5XP; Benzonitrile, 3-(1,6-dihydro-1-((3-(5-((1-methyl-4-piperidinyl)methoxy)-2-pyrimidinyl)phenyl)methyl)-6-oxo-3-pyridazinyl)-, hydrochloride (1:1); SCHEMBL1295616; YHHHGHDGBUUWIS-UHFFFAOYSA-N; 3-(1-{3-[5-(1-methyl-piperidin-4-ylmethoxy)-pyrimidin-2-yl]-benzyl}-6-oxo-1,6-dihydro-pyridazin-3-yl)-benzonitrile hydrochloride;
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT03940703 | Active Recruiting |
Drug: Tepotinib Drug: Osimertinib |
Non-small Cell Lung Cancer | EMD Serono Research & Development Institute, Inc. |
September 19, 2019 | Phase 2 |
| NCT02864992 | Active Recruiting |
Drug: Tepotinib | Lung Adenocarcinoma Stage IIIB/IV Amplification |
EMD Serono Research & Development Institute, Inc. |
September 13, 2016 | Phase 2 |
| NCT05120960 | Recruiting | Drug: tepotinib plus osimertinib Drug: tepotinib |
Brain Tumor | M.D. Anderson Cancer Center | February 27, 2023 | Phase 1 |
| NCT04647838 | Recruiting | Drug: Tepotinib | Solid Tumor MET Amplification |
Chungbuk National University Hospital |
January 16, 2020 | Phase 2 |
| NCT05782361 | Recruiting | Drug: Tepotinib Drug: Pembrolizumab |
Non Small Cell Lung Cancer Advanced Cancer |
Institute of Cancer Research, United Kingdom |
May 3, 2023 | Phase 1 |
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