| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
MDM2
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
本研究设计合成了治疗乳腺癌的新型GAA PROTACs C1-C10和V1-V10两个系列。这些化合物对四种人肿瘤细胞系(MCF-7、MDA-MB-231、SJSA-1和HepG2)的抗肿瘤活性进行了评价。其中，V9和V10对乳腺癌细胞具有较强的抗增殖作用，其中抗肿瘤剂-150 (V10)对MDA-MB-231细胞(TNBC)的选择性最好，比先导化合物GAA高5倍。初步构效分析显示，v系列GAA PROTACs的效果优于c系列，并且引入20 - 40o PEG连接体可显著提高其抗肿瘤活性。分子对接、表面等离子体共振(SPR)、细胞热移实验(CETSA)和Western blot研究表明，V9和V10均可与MDM2结合，并通过泛素-蛋白酶体系统降解MDM2蛋白。分子动力学模拟(MD)表明V10是一种双功能分子，它可以一端结合von Hippel-Lindau (VHL)，另一端靶向MDM2。此外，V10促进p53突变体MDA-MB-231细胞中p21的上调，并通过下调bcl-2/bax比值和cyclin B1的表达诱导细胞凋亡[1]。
抗肿瘤剂-150（V10）在TNBC斑马鱼模型中表现出良好的抗肿瘤活性，50 μg/mL时抑制率为27.2％[1]。抗肿瘤剂-150（V10，10μM）促进MDA-MB-231细胞凋亡[1]。抗肿瘤剂-150（V10）治疗显著改变了MDA-MB-231细胞的G1期和S期[1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
体内实验表明，抗肿瘤剂-150 (V10)对异种移植TNBC斑马鱼模型也表现出良好的肿瘤抑制活性，50 μg/mL时抑制率为27.2%。综上所述，我们的研究结果表明，V10在体外和体内对p53突变型乳腺癌具有抗肿瘤作用，可能作为未来TNBC发展的新型先导化合物[1]。
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| 酶活实验 |
SPR [1]
利用分子相互作用分析仪检测化合物V9和V10与MDM2蛋白的相互作用。MDM2蛋白(50 μg/mL)固定在PCH传感器芯片上，用EDC/NHS混合物预活化600 s，流速为10 μL/min。用含有5% DMSO和0.005% Tween的PBST缓冲液将V9或V10稀释至0、3.13、6.25、12.5、25、50、100 μM。结合时间为400 s，流速为15 μL/min。解离时间为60 s，通过计算机拟合和稳态分析得到亲和常数KD值。 |
| 细胞实验 |
细胞活力测定[1]
采用MTT细胞增殖测定试剂盒检测化合物对MCF-7、MDA-MB-231、SJSA-1、HepG2和HT-22细胞的抗增殖活性。96孔板中加入体积为100 μL的细胞悬液，每孔约5 × 103个细胞。文化板块在37°C pre-cultured孵化器5%二氧化碳的体积百分率24 h。第二天,最初的媒介是丢弃,和100μL中含有不同浓度的棉酚衍生品或5μM的积极药物盐酸hydroxydaunorubicin(阿霉素)添加到96孔板,在孵化器和孵化48 h或72 h。政府的相应时间后,10μL MTT的解决方案是添加到每个。培养板在培养箱中孵育4 h后，丢弃原有培养基，再加入150 μL DMSO。低速摇培养板10分钟后，用酶标仪测定每孔490 nm处吸光度，并以对照细胞的百分比表示每孔细胞活力。[1] |
| 动物实验 |
斑马鱼MTC的测定及异种移植瘤模型的建立[1]
野生型AB品系斑马鱼胚胎饲养于28℃的鱼缸水中（水质：每升反渗透水添加200毫克速溶海盐，电导率450–550 μS/cm，pH 6.5–8.5，硬度50–100毫克/升CaCO3），实验动物使用许可证号为SYXK（浙江）2022–0004。本研究已获得国际实验动物评估和认证协会（AAALAC）的批准。受精后3天（dpf），随机选取野生型AB品系斑马鱼，置于6孔板中，每孔30尾。除正常对照组外，其他浓度组均给予V10水溶液，正常对照组每孔3 mL。在35℃下处理2天后，测定了V10在正常斑马鱼中的MTC值。[1] 将CM-DiI标记的MDA-MB-231细胞通过显微注射移植到2日龄野生型AB品系斑马鱼的卵黄囊中，每尾移植约200个细胞，建立斑马鱼肿瘤移植模型。将模型斑马鱼置于35℃培养至3日龄。3日龄时，在显微镜下挑选移植肿瘤细胞良好的斑马鱼，随机分配到6孔板中，每孔30个细胞。V10溶于水溶液中，阳性对照组顺铂浓度为15.0 μg/mL，模型对照组每孔3 mL。在35℃下处理2天后，从每个实验组中随机选取10条斑马鱼，并在荧光显微镜下拍照。使用NIS-Elements D 3.20高级图像处理软件采集数据，分析肿瘤细胞的荧光强度，并基于该指标的统计分析结果评价V10的抗肿瘤生长效果。统计结果以均值±标准误（SE）表示。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
总之，我们设计并合成了两系列GAA PROTACs C1–C10和V1–V10，作为强效的MDM2蛋白降解剂用于乳腺癌治疗。筛选结果表明，V9和V10对乳腺癌细胞具有更强的抗增殖作用，其中V10在三阴性乳腺癌（TNBC，MDA-MB-231细胞）中的抑制率高达83.1%，优于先导化合物GAA。构效关系研究表明，引入2O–4O PEG连接基可显著提高抗肿瘤活性。进一步的降解特性研究表明，V9和V10均能与MDM2结合，并通过泛素-蛋白酶体系统降解该蛋白。其中，V10能够降解MDM2并增加TNBC中p21的表达。分子动力学模拟结果证实MDM2/V10/VHL三元复合物具有稳定性。此外，V10促进了bcl-2/bax和cyclin B1表达的下调，诱导细胞周期停滞于G1-S期和G2-M期，最终导致细胞凋亡。体内实验表明，V10毒性较低，且具有显著的抗癌活性，在50 μg/mL的剂量浓度下抑制率达27.2%。因此，GAA PROTACs不仅可以通过MDM2蛋白降解来避免MDM2-p53负反馈引起的耐药性，还可以克服TNBC中p53突变或失活导致的治疗难题（图11）。基于以上结果，我们的研究表明，采用PROTAC策略设计的GAA MDM2降解剂V10可以增强GAA的抗肿瘤活性，并可进一步开发和研究作为治疗TNBC的MDM2蛋白降解剂。[1]
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| 分子式 |
C70H106N8O14S
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|---|---|
| 分子量 |
1315.70
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| 别名 |
V10; V-10
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.7601 mL | 3.8003 mL | 7.6005 mL | |
| 5 mM | 0.1520 mL | 0.7601 mL | 1.5201 mL | |
| 10 mM | 0.0760 mL | 0.3800 mL | 0.7601 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
PROTAC LZK-IN-1
Seldegamadlin (KT-253)
MD-265
p53 Activator 13
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