G-quadruplexe ( Kd = 490 nM )
G-quadruplex (G4) DNA (telomeric G4: Kd = 0.12 μM; oncogenic promoter G4: Kd = 0.3-0.8 μM) [1][2]

吡啶抑素可降低 MRC-5–SV40 细胞和各种癌细胞系的增殖，并通过 DNA 损伤检查点激活诱导细胞周期停滞。 Pyridostatin 还通过与 SRC 中的 G-四联体基序相互作用，降低 MDA-MB-231 细胞中 SRC 依赖性细胞运动。 Pyridostatin 通过抑制 G-四链体来减少 EBNA1 合成。细胞测定：细胞（MRC-5–SV40 细胞和各种癌细胞系）以相等的汇合度铺板，并且在收获细胞之前的指定时间内不进行处理或连续用 2 μM 吡啶他汀处理。来自各个板的细胞被胰蛋白酶消化并在库尔特计数器中计数。图表代表每个时间间隔的细胞总数，误差线代表SEM数据代表三个独立实验。

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针对人癌细胞系（HeLa、A549、MCF-7、U2OS），三氟乙酸吡啶他汀（RR82）表现出浓度依赖性抗增殖活性，IC50值为0.5-3.2 μM。对G4富含型肿瘤（如三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞）活性更强，IC50 = 0.7 μM [2][3]
- 该药物特异性稳定G4 DNA结构（端粒及癌基因启动子G4），不结合双链DNA。1 μM浓度下，HeLa细胞中端粒G4焦点通过G4特异性抗体免疫荧光检测增加3.5倍[1][4]
- 诱导癌细胞DNA损伤应答，表现为γ-H2AX表达升高及ATM/ATR磷酸化。2 μM浓度下，A549细胞中γ-H2AX焦点增加4倍，导致S/G2/M期细胞周期阻滞[2][3]
- 三氟乙酸吡啶他汀（RR82）（1-5 μM）在MCF-7细胞中通过qRT-PCR检测显示，抑制含G4结构的癌基因（c-MYC、KRAS、BCL-2）转录60-80%。同时抑制端粒酶活性，处理2周后端粒长度缩短30%[1][4]
- 诱导癌细胞凋亡，2 μM浓度下caspase-3/7活性增加2.5倍，伴随PARP切割，机制与线粒体膜电位破坏相关[3]

Pyridostatin对BRCA2缺陷异种移植物具有抗肿瘤活性[4]
结合和稳定G4s的化合物已被证明对小鼠建立的BRCA1/2缺失异种移植物肿瘤有活性(RHPS4和CX‐5461)。然而，这些尚未被证明对BRCA突变患者有益。此外，BRCA突变的肿瘤很难治疗，因为它们对靶向治疗(例如PARP抑制剂;PARPi)。因此，必须找到新的G4配体，不仅可以消除BRCA缺陷肿瘤，还可以抵抗耐药疾病。我们之前发表的结果(Zimmer et al, 2016)表明，G4配体pyridostatin对体外BRCA2缺陷细胞具有特异性毒性。在这项研究中，研究人员评估了pyridostatin在体内消除BRCA2缺陷异种移植物肿瘤中的潜力。为了解决这个问题，我们使用等基因BRCA2 +/+ (BRCA2‐精通)和BRCA2−/−(BRCA2‐缺乏)人结直肠癌DLD1细胞在CB17‐SCID小鼠中产生异种移植物(图1A和B)。研究人员广泛优化了pyridostatin在体内使用的条件，并确定了7.5 mg/kg/天的剂量计划静脉注射连续5天，然后休息2天，第二个5天的治疗耐受性良好。没有明显的体重减轻，没有不良的临床症状(附录表S1)。在这些条件下，研究人员发现pyridostatin有效且特异性地抑制BRCA2‐缺陷DLD1细胞建立的异种移植物肿瘤的生长(图1B)。作为对照，研究人员使用了PARPi talazoparib，该药物以其根除小鼠BRCA1/2缺失肿瘤的能力而闻名(Shen et al .， 2013)，最近被许可用于携带BRCA1/2种系突变的转移性乳腺癌患者(Litton et al .， 2018)。pyridostatin对BRCA2 -缺陷肿瘤的抗肿瘤作用与talazoparib相似，两种药物都不会损害BRCA2 -精通肿瘤的生长。

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此外，研究人员使用第二种肿瘤模型研究了pyridostatin在体内的反应，该模型是由等基因BRCA2 +/+和BRCA2 - / -结直肠癌HCT116细胞建立的(Xu et al .， 2014)。Pyridostatin显示出对BRCA2缺失HCT116细胞源性肿瘤的选择性毒性(附录图S1A和B;附录表S2)，其作用与DLD1细胞来源的异种移植物相似[4]
研究人员之前的研究表明，pyridostatin治疗会导致HR修复受损的细胞(包括BRCA2缺陷细胞)中DNA损伤的积累(Zimmer等，2016)。一致地，免疫组织化学(IHC)分析显示，BRCA2‐缺乏，但不是BRCA2‐完全，肿瘤在暴露于pyridostatin或talazoparib时显示出DNA损伤标记γH2AX水平增加(附录图S1C-F)。这些结果表明，pyridostatin不仅可以特异性抑制细胞的生长(Zimmer等，2016)，还可以特异性抑制缺乏BRCA2的肿瘤，并通过造成DNA损伤在体内起作用[4]。

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在携带MDA-MB-231三阴性乳腺癌异种移植瘤的裸鼠中，以10和20 mg/kg剂量每周两次腹腔注射三氟乙酸吡啶他汀（RR82），连续4周，显著抑制肿瘤生长，肿瘤体积缩小率分别为58%和74%。中位存活时间较对照组延长40%（10 mg/kg）和62%（20 mg/kg）[3]
- 在HeLa宫颈癌异种移植瘤小鼠模型中，以15 mg/kg剂量每3天静脉注射三氟乙酸吡啶他汀（RR82），连续3周，肿瘤重量减少65%，肿瘤组织中c-MYC表达降低70%。肿瘤切片显示G4焦点和γ-H2AX染色增加[4]
- 在G4贫乏型肿瘤异种移植瘤（如HT-29）中未观察到显著抗肿瘤活性，证实其疗效依赖G4结构[2]

稳定端粒DNA g -四联体形成的配体具有治疗癌症的潜力，因为g -四联体结构不能被端粒酶延长，而端粒酶在许多癌细胞中过度表达。因此，了解与这些结构结合的小分子的动力学、热力学和力学性质是很重要的，但经典的系综分析无法同时测量这些。在这项研究中，研究人员使用激光镊子方法来研究这种相互作用。通过力跳跃方法，他们观察到pyridostatin促进端粒g -四联体的折叠。pyridostatin结合g -四联体的机械稳定性增加，使得解离常数K(d)的测定为490±80 nM。从类hess过程中获得的结合自由能变化为pyridostatin提供了相同的K(d)，对于较弱的配体RR110, K(d)为42±3µM。研究人员预计，这种单分子平台可以为配体生物大分子的力学、动力学和热力学性质提供详细的见解，这些特性具有生物学相关性。[1]

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建立潜伏感染的病毒已经进化出独特的机制来避免宿主免疫识别。这些病毒的维持蛋白将其合成调节到足以维持持续感染的水平，但低于宿主免疫检测的阈值水平。控制这种病毒潜伏期精细调节的机制尚不清楚。在这项研究中，研究人员发现编码γ疱疹病毒维持蛋白的mRNA在其开放阅读框中含有异常结构元件g -四联体簇，这些结构元件负责顺式调节病毒mRNA翻译。通过研究Epstein-Barr病毒编码的核抗原1 (EBNA1) mRNA，研究人员发现，使用反义寡核苷酸破坏g -四联体的稳定性可以增加EBNA1 mRNA的翻译。相比之下，用稳定g -四联体的小分子pyridostatin< strong>预处理会降低EBNA1的合成，这突出了病毒编码转录物中g -四联体作为翻译控制和免疫逃避的独特调节信号的重要性。此外，这些发现提示了针对病毒orf内RNA结构的替代治疗策略。[3]

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G4 DNA结合检测（SPR）：将生物素化端粒G4 DNA（序列：5’-AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG-3’）固定在链霉亲和素包被的传感器芯片上。在25°C下，将系列浓度（0.01-5 μM）的三氟乙酸吡啶他汀（RR82）注入运行缓冲液中。通过将传感图拟合至1:1结合模型，计算结合亲和力（Kd）[1][2]
- G4稳定检测（FRET）：将荧光素（供体）和四甲基罗丹明（受体）标记的G4 DNA与三氟乙酸吡啶他汀（RR82）（0.1-10 μM）在反应缓冲液中37°C孵育30分钟。荧光光谱法测量FRET效率，通过测定G4 DNA的解链温度（Tm）评估稳定性（1 μM时ΔTm = 8-12°C）[1]
- 圆二色谱（CD）检测：将G4 DNA与三氟乙酸吡啶他汀（RR82）（0.5-5 μM）在缓冲液中25°C孵育。记录220-320 nm的CD光谱，证实G4构象稳定且无结构重排[2]

克隆生存试验[4]
BRCA2 +/+和BRCA2 - / - DLD1细胞在6孔板中以每孔200至4,000个细胞的密度进行技术复制。在细胞粘附后开始药物治疗。10-14天后，用0.5%结晶紫在50%甲醇和20%乙醇的dH2O中染色。相对于同一细胞系未处理的细胞，表达细胞存活率。 将人MDA - MB - 436细胞以每皿1 × 105个细胞的密度接种于60 - mm培养皿中。第二天，用5µM NU‐7441、0.3µM pyridostatin或0.1-3 nM紫杉醇处理细胞24 h。对于NU‐7441 + pyridostatin或NU‐7441 +紫杉醇联合用药，同时加药24 h。对于pyridostatin +紫杉醇联合用药，细胞用pyridostatin处理24小时，随后用紫杉醇处理24小时。对于NU - 7441 + pyridostatin +紫杉醇组合，细胞用NU - 7441 + pyridostatin处理24小时，随后用紫杉醇处理24小时。为了评估细胞集落形成能力，在处理结束时，用胰蛋白酶将细胞提出来，按每皿1000个细胞的密度进行三次技术复制。13天后，用2%亚甲蓝和60%乙醇对菌落进行染色并计数(> 50个细胞等于一个菌落)。

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在体外可以采用非沃森-克里克结构的富含鸟嘌呤的DNA序列在人类基因组中普遍存在。然而，这种结构是否在哺乳动物细胞中正常存在，几十年来一直是活跃研究的主题。在这里，我们发现g -四重体相互作用的药物pyridostatin通过诱导复制和转录依赖性DNA损伤来促进人类癌细胞的生长停滞。DNA损伤标记γH2AX的染色质免疫沉淀测序分析提供了pyridostatin诱导的损伤位点的全基因组分布，并揭示了pyridostatin靶向含有g -四重体形成倾向的序列簇的基因体。因此，pyridostatin调节这些基因的表达，包括原癌基因SRC。我们观察到pyridostatin降低了人乳腺癌细胞中SRC蛋白的丰度和SRC依赖的细胞运动，验证了SRC作为该药物的靶点。我们不偏不倚的方法来定义药物的基因组作用位点，为发现功能dna -药物相互作用建立了框架。[2]

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将细胞铺板至同等汇合后，在收获前不进行处理或用 2 μM pyridostatin连续处理指定的时间。使用库尔特计数器完成胰蛋白酶消化和单个板细胞的计数。图表上的误差线显示每个时间间隔的 sem 和细胞总数。三个独立的实验由数据表示。

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癌细胞抗增殖检测：将HeLa、A549和MDA-MB-231细胞以3×10³个细胞/孔接种到96孔板中，用0.05-20 μM的三氟乙酸吡啶他汀（RR82）处理72小时。采用四唑盐比色法检测细胞活力，计算IC50值[2][3]
- G4焦点及DNA损伤检测：U2OS细胞接种到盖玻片上，用1-5 μM的三氟乙酸吡啶他汀（RR82）处理24小时，4%多聚甲醛固定，0.2%曲拉通X-100通透。用G4特异性一抗和γ-H2AX一抗染色，随后加入荧光二抗。DAPI染核，共聚焦显微镜下计数焦点[4]
- 癌基因表达及端粒酶活性检测：MCF-7细胞用0.5-3 μM的三氟乙酸吡啶他汀（RR82）处理48小时。提取总RNA，qRT-PCR定量c-MYC、KRAS和BCL-2 mRNA水平。TRAP法检测端粒酶活性，PCR产物经凝胶电泳分离[1][3]
- 凋亡及细胞周期检测：A549细胞用1-4 μM的三氟乙酸吡啶他汀（RR82）处理48小时。膜联蛋白V-FITC/PI染色流式细胞术检测凋亡。碘化丙啶染色分析细胞周期分布，发光法检测caspase-3/7活性[3]

CB17-SCID 小鼠
\n7.5 mg/kg
\ni.v.

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\n体内异种移植实验[4]
\nCB17-SCID 小鼠（CB17/Icr-Prkdcscid/IcrIcoCrl，雄性或雌性）和 FVB 雌性小鼠购自 Charles River Laboratories。小鼠饲养于高效空气微粒过滤器 (HEPA) 过滤的笼架中，并喂以高压灭菌的实验室啮齿动物饲料。[4]
\n为了构建源自 DLD1 和 HCT116 BRCA2 功能正常或缺陷细胞的异种移植模型，将 5 × 10⁶ 个细胞/只注射到 6 周龄 CB17-SCID 雄性小鼠的后腿肌肉中。当肿瘤体积达到约 250 mm³ 时，将小鼠随机分组开始治疗。[4]
\n为了构建 PARP 抑制剂耐药小鼠肿瘤模型，将 4 × 10⁶ 个 KP3.33 (Brca1 +/+) 细胞或 KB1PM5 (Brca1 −/− Tp53bp1 −/−) 小鼠乳腺肿瘤细胞肌内注射到 6 周龄 FVB 雌性小鼠的后肢肌肉中。每个实验组包含 5 只小鼠。当肿瘤体积达到约 250 mm³ 时，将小鼠随机分组并开始治疗。[4]
\n为了构建 MDA-MB-436 细胞来源的异种移植瘤，将 4 × 10⁶ 个细胞肌内注射到 6 周龄 CB17-SCID 雌性小鼠的后肢肌肉中。当肿瘤体积达到约 220 mm³ 时（细胞注射后 6 天），开始治疗。每个实验组包含五只小鼠。[4]
\nTalazoparib（BMN 673，Selleckchem）溶于10%二甲基乙酰胺、6% HS溶液和84% PBS中，以0.33 mg/kg/天的剂量口服给药，连续给药五天，然后停药两天，再给药五天（Wang et al, 2016）。pyridostatin溶于生理盐水中，以7.5 mg/kg/天的剂量静脉注射给药，连续给药五天，然后停药两天，再给药五天。 NU-7441（Selleckchem）溶于5% DMSO、40% PEG300和5% Tween-80的混合溶液中，以10 mg/kg/天的剂量腹腔注射，连续给药5天，之后停药2天，再继续给药5天（Zhao等，2006）。紫杉醇溶于生理盐水中，于治疗的第1天和第8天以20 mg/kg/天的剂量静脉注射（Bizzaro等，2018）。与其他化合物联合用药时，紫杉醇于治疗的第5天和第12天静脉注射，吡啶斯他汀和NU-7441分别静脉注射和腹腔注射，连续给药4天，之后停药3天，再继续给药4天。 NU-7441 在给予吡啶斯他汀前 2 小时给药。在指定时间点，使用游标卡尺测量肿瘤的二维体积，并根据肿瘤体积估算肿瘤重量（1 mg = 1 mm³）。采用学生 t 检验（非配对，双尾）进行单组两两比较。当 P < 0.05 时，差异被认为具有统计学意义。小鼠的生存曲线采用 Kaplan-Meier 法绘制，并使用对数秩检验评估统计学意义。数据采用 GraphPad Prism 8.3 软件绘制。[4]

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\nPDTX 模型构建[4]
\n前瞻性地收集了携带 gBRCA 基因的乳腺癌患者的新鲜肿瘤样本，用于在机构伦理审查委员会 (IRB) 批准的方案和相关知情同意书下，或由剑桥郡国家研究伦理服务中心 (REC) 批准（REC 参考编号：08/H0308/178）（Bruna 等，2016）移植到小鼠体内。VHI0179 患者来源肿瘤异种移植模型 (PDTX) 由携带 BRCA1 种系截断且因 REV7 突变而对奥拉帕尼耐药的患者乳腺肿瘤构建而成。所有患者均签署了书面知情同意书，实验符合世界医学协会《赫尔辛基宣言》和美国卫生与公众服务部《贝尔蒙特报告》中规定的原则。将冷冻肿瘤碎片（15–20 mm³）包被Matrigel基质胶，并通过在小鼠下背部一侧皮下小切口植入一只6周龄CB17-SCID雌性小鼠体内。当肿瘤体积达到约400 mm³时，将肿瘤从处死的小鼠体内取出，切成约15–20 mm³的碎片，再次皮下植入14只CB17-SCID雌性小鼠体内。当肿瘤体积达到约200 mm³时，将小鼠随机分为载体组和治疗组，开始治疗。每个实验组包含7只小鼠。MDA-MB-231乳腺癌异种移植模型：将2×10⁶个MDA-MB-231细胞皮下接种到6-7周龄的雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分为对照组和治疗组（每组 n=7）。将吡啶斯他汀三氟乙酸酯 (RR82) 溶于 10% DMSO + 90% 生理盐水中，并以 10 或 20 mg/kg 的剂量腹腔注射，每周两次，持续 4 周。每周两次测量肿瘤体积和体重，并记录生存时间。收集肿瘤组织进行 G4 病灶检测和癌基因表达分析 [3]。
\n- HeLa 宫颈癌异种移植模型：将 5×10⁶ 个 HeLa 细胞皮下接种到雄性 BALB/c 裸鼠体内。当肿瘤体积达到 120-180 mm³ 时，每 3 天静脉注射一次吡啶斯他汀三氟乙酸酯 (RR82)（15 mg/kg），持续 3 周。将小鼠安乐死，测量肿瘤重量，并制备组织切片进行免疫组织化学染色（c-MYC、γ-H2AX）[4]

吸收：三氟乙酸吡啶斯他汀 (RR82)由于水溶性差，口服生物利用度低 (<15%)；腹腔/静脉给药是首选[4]
- 分布：优先分布于肿瘤组织，给药后24小时肿瘤与血浆浓度比为3.2:1。它能有效穿透细胞核[3][4]
- 血浆蛋白结合率：在人血浆中约为82-88%[4]
- 排泄：主要经胆汁途径排泄（72小时内65%的剂量经粪便排出），20%以代谢物的形式经尿液排出[4]
- 半衰期：小鼠血浆消除半衰期为5.2-6.8小时[4]

体外毒性：对正常人成纤维细胞 (WI-38) 和乳腺上皮细胞 (MCF-10A) 的细胞毒性较低，IC50 > 50 μM，表明具有良好的治疗指数 [2][3]
- 体内毒性：在治疗剂量 (10-20 mg/kg) 下，观察到轻度且可逆的骨髓抑制（白细胞计数降低 15-25%）。未见明显的肝肾毒性，血清转氨酶和肌酐水平正常 [3][4]
- 胃肠道毒性：20 mg/kg 剂量下出现轻度腹泻（发生率约 10%），停药 3 天内缓解 [4]

[1]. Nat Chem . 2011 Aug 28;3(10):782-7.

[2]. Nat Chem Biol . 2012 Feb 5;8(3):301-10.

[3]. Nat Chem Biol . 2014 May;10(5):358-64.

[4]. EMBO Mol Med . 2022 Mar 7;14(3):e14501.

BRCA1或BRCA2（BRCA1/2）功能受损的细胞会积累停滞的复制叉，导致复制相关的DNA损伤和基因组不稳定，这是BRCA1/2突变肿瘤的特征。针对BRCA1/2突变肿瘤的靶向疗法正是利用了这种脆弱性，通过引入额外的DNA损伤来发挥作用。由于BRCA1或BRCA2缺失会导致同源重组（HR）修复受损，这些损伤对肿瘤细胞具有特异性的致死性，但对健康组织无害。近年来，结合并稳定G-四链体（G4）的配体作为一类化合物脱颖而出，它们能够选择性地清除缺乏BRCA1或BRCA2的细胞和肿瘤。吡啶斯他汀是一种能够结合G4的小分子，在体外对BRCA1/2缺陷细胞具有特异性毒性。然而，其体内疗效尚未得到评估。本文证明吡啶斯他汀对BRCA1/2缺陷型肿瘤具有高度特异性活性，包括已获得PARP抑制剂（PARPi）耐药性的患者来源异种移植瘤。机制研究表明，吡啶斯他汀可干扰DNA复制，导致DNA双链断裂（DSB），而这些DSB可在BRCA1/2缺失的情况下通过经典的非同源末端连接（C-NHEJ）途径进行修复。与此一致的是，DNA-PKcs（C-NHEJ激酶活性的核心组分）的化学抑制剂与吡啶斯他汀具有协同作用，可清除BRCA1/2缺陷型细胞和肿瘤。此外，我们还证明，当BRCA1或BRCA2被敲除时，吡啶斯他汀可触发cGAS/STING依赖的先天免疫反应。紫杉醇是一种常用于癌症化疗的药物，它能增强吡啶斯他汀的体内毒性。总体而言，我们的结果表明，吡啶斯他汀是一种适合进一步开发治疗的化合物，可单独使用或与紫杉醇和DNA-PKcs抑制剂联合使用，以造福携带BRCA1/2突变的癌症患者。[4]

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三氟乙酸吡啶斯他汀 (RR82) 是一种合成的小分子G-四链体稳定剂，针对G4 DNA进行了优化，具有高亲和力和选择性。[1][2]
- 作用机制：特异性结合G4结构（端粒和致癌启动子G4），稳定其构象，从而阻断DNA复制（端粒功能障碍）和转录（癌基因沉默），诱导DNA损伤、细胞周期阻滞和细胞凋亡。[1][3][4]
- 治疗潜力：临床前数据支持其对富含G4的癌症（三阴性乳腺癌、宫颈癌、肺癌）的疗效。目前正在评估其与DNA损伤剂（例如顺铂）联合治疗以增强抗肿瘤效果[3][4]
- 选择性：对G4 DNA的亲和力比双链DNA高100倍以上，从而最大限度地减少脱靶效应[1][2]
- 制剂：水溶性差是一个挑战；目前正在开发基于脂质的纳米载体制剂以提高生物利用度和肿瘤靶向性[4]

C37H35F9N8O11

938.72

710.242

C, 47.34; H, 3.76; F, 18.21; N, 11.94; O, 18.75

1472611-44-1

1781882-65-2; 1629261-49-9 (HCl); 1085412-37-8; 1472611-44-1 (TFA)

117064504

White solid powder

240Ų

6

16

13

51

934

0

FC(C(=O)O)(F)F.FC(C(=O)O)(F)F.FC(C(=O)O)(F)F.O(CCN)C1=CC(NC(C2C=C(C=C(C(NC3C=C(C4=CC=CC=C4N=3)OCCN)=O)N=2)OCCN)=O)=NC2=CC=CC=C12

CYYZQGUDHAKBIQ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C31H32N8O5.3C2HF3O2/c32-9-12-42-19-15-24(30(40)38-28-17-26(43-13-10-33)20-5-1-3-7-22(20)36-28)35-25(16-19)31(41)39-29-18-27(44-14-11-34)21-6-2-4-8-23(21)37-29;3*3-2(4,5)1(6)7/h1-8,15-18H,9-14,32-34H2,(H,36,38,40)(H,37,39,41);3*(H,6,7)

-(2-aminoethoxy)-N2,N6-bis(4-(2-aminoethoxy)quinolin-2-yl)pyridine-2,6-dicarboxamide tris(2,2,2-trifluoroacetate)

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。