Adrenocorticotropic hormone (ACTH) (4-10) analog; adrenocorticotropic hormone-like peptide

Semax (100 nM) 已被证明可以增加胆碱能基底前脑神经元的存活率 [3]，降低 Abeta 寡聚物 (100 μM) 水平 [2]，刺激分离的基底前脑组织培养物中的胆碱乙酰转移酶活性 [3]，并刺激大鼠基底前脑培养的星形胶质细胞合成脑源性神经营养因子（BDNF）[4]。 Semax（25 μM 和 100 μM，48 小时）表现出这些效果 [2]、[3] 和 [4]。

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测试了七肽Semax的抗聚集特性，这是一种acth样肽，已知与Cu2+离子形成稳定的复合物，并已被证明具有神经保护和益智作用。我们通过荧光光谱法、量热法和MTT分析的组合证明，Semax不仅能够阻止a β:Cu2+复合物的形成，而且还具有抗聚集和保护特性，特别是在Cu2+存在时。结果表明，Semax通过干扰Aβ:Cu2+复合物的纤维形成来抑制纤维形成。[2]

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我们研究了行为活性促肾上腺皮质激素（4-10）类似物Semax (met - glu - hs - ph - pro - gly - pro)对体外基底前脑胆碱能神经元存活的影响。Semax已知可以刺激学习和记忆，并可成功用于治疗缺血性中风。
方法：采用大鼠基底前脑神经细胞和神经胶质细胞进行原代培养。采用高效液相色谱法检测了Semax在细胞培养中的稳定性。利用免疫细胞化学和细胞化学分析以及检测胆碱乙酰转移酶活性来定量神经元培养中的细胞存活。
结果：<Semax可使体外培养的基底前脑胆碱能神经元的存活率提高约1.5-1.7倍。此外，Semax （100 nM）刺激游离基底前脑组织培养的胆碱乙酰转移酶活性。gaba -能神经元数量和神经元特异性烯醇化酶神经元总数未受影响。在1 nM到10微米的浓度范围内，Semax对原代培养的胶质细胞的增殖没有影响。
结论：这些发现对阿尔茨海默病的意义仍有待阐明。 [3]

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在之前的一项研究中，我们观察了促肾上腺皮质激素的生理活性类似物“Semax”（met - glu - hs - ph - pro - gly - pro）对体外神经元细胞存活的影响（4- 10）。我们假设这些作用可能是通过调节某些神经营养因子的表达来介导的。为了验证这一假设，我们分析了新生大鼠基底前脑神经胶质细胞中NGF和BDNF基因的表达，这些细胞经过Semax体外处理。我们观察到NGF和BDNF基因mRNA水平的变化。Semax给药30分钟后表达量增加最多。此时，与对照组相比，BDNF mRNA水平升高8倍，NGF mRNA水平升高5倍。[4]

Semax（100 μg/kg，腹腔注射）可增加缺血 (pMCAO) 大鼠血管的发育和功能 [1]。 Semax（50 µg 和 250 µg，100 µL/kg，鼻内吸入）可提高大鼠基底前脑中的 b BDNF 蛋白水平 [5]。

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背景：促智神经保护肽Semax (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro)已被证明在脑卒中的治疗中有效；然而，其作用的分子机制尚不清楚。我们的全基因组研究旨在研究大鼠脑缺血皮质组织转录组对Semax作用的体内反应。
结果：将Semax肽作用下的基因表达变化与永久性大脑中动脉闭塞（pMCAO）后3和24 h“缺血”组动物的基因表达进行比较。这种肽主要增强了与免疫系统相关的基因的表达。pMCAO后3小时，Semax影响了一些影响免疫细胞活性的基因的表达，pMCAO后24小时，Semax对免疫应答的作用显著增强。与这种反应相关的基因占semax诱导表达改变的基因总数的50%以上。在受Semax调节表达的免疫应答基因中，编码免疫球蛋白和趋化因子的基因构成了最显著的群体。在给药Semax后，24个与血管系统相关的基因在pMCAO后3小时表达改变，而在pMCAO后24小时有12个基因表达改变。这些基因与内皮组织的发育和迁移、平滑肌细胞的迁移、造血和血管生成等过程有关。
结论：Semax影响多个系统功能中涉及的多个生物过程。免疫反应是受药物影响最显著的过程。Semax改变了调节免疫细胞数量和移动性的基因的表达，增强了编码趋化因子和免疫球蛋白的基因的表达。在大鼠脑局灶性缺血条件下，Semax影响了促进血管系统形成和功能的基因的表达。本研究发现的多肽的免疫调节作用及其对缺血时血管系统的影响可能是多肽神经保护作用的关键机制。[1]

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促肾上腺皮质激素（ACTH）及其类似物，特别是Semax (met - glu - his - ph - pro - gly - pro)，显示出促智活性。在黑素皮质能和单胺能脑系统之间建立了密切的功能和解剖学联系。本研究的目的是研究Semax对啮齿动物多巴胺能和血清素能系统神经化学参数的影响。Semax给药2 h后，纹状体组织中5-羟基吲哚乙酸（5-HIAA）含量显著升高（+25%）。Semax （0.15 mg/kg, ip）给药后1 ~ 4 h，细胞外纹状体5-HIAA水平逐渐升高至180%。这种肽单独不能改变组织和细胞外多巴胺及其代谢物的浓度。Semax提前20分钟注射D: -安非他明，显著增强D: -安非他明对细胞外多巴胺水平和动物运动活动的影响。我们的研究结果揭示了Semax对纹状体5 -羟色胺能系统的正调节作用，以及Semax增强纹状体多巴胺释放和d -安非他明引起的运动行为的能力。[6]

测量值[2]
用硫黄素T （ThT）法测定了β纤维形成的动力学。在MOPS缓冲液或含有bTLE LUVs的溶液中稀释aβ原液以达到最终浓度。从原液中加入Semax和/或铜至指定浓度。然后加入硫黄素T至终浓度为40 μM。实验在康宁96孔无粘结板上进行。使用Varioskan 平板读取器记录时间痕迹，在37°C下，λex为440 nm， λem为485 nm，每次读取前摇晃样品10 s。所有的ThT曲线表示三个独立实验的平均值。

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抗寡聚化试验[2]
a - β1 - 42低聚物按照前面的描述，由合成的a - β1 - 42按照单体化的程序制备。Aβ1-42 （0.3 mg）先溶解于5 mM DMSO中。在不含酚红的DMEM F-12中制备了100 μM A - β1 - 42溶液，并根据Lambert协议在4°C下进行了48 h的寡聚反应。为了评估Semax和/或铜干扰Aβ低聚物形成的能力，在存在或不存在每种化合物（Aβ/配体比例分别为1:5和1:1）的情况下孵育Aβ1 - 42样品。孵育48 h后，分析Aβ/配体化合物中Aβ低聚物的含量。

MTT试验[2]
Aβ1-42肽低聚物按照″Anti-oligomerization Assay″中描述的方法制备，加入/不加入Semax和铜。5 μM a - β1 - 42样品在添加0.5%不含RA的FBS的DMEM中孵育48 h，检测d-SH-SY5Y细胞活力。用MTT反应定量活细胞。90 min后，加入DMSO停止反应，在570 nm处测定吸光度；结果以活细胞百分比表示。重复实验，n = 8，结果以mean±SD表示。

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神经胶质细胞原代培养，经过一些修饰。解剖基底前脑并机械解离。细胞在15 ml培养基中密度为15×106的塑料烧瓶上，在37℃、5% CO2空气条件下培养。培养液（MEM）中添加15%牛血清和100 μg/ml庆大霉素。每3天更换一次培养基。当细胞汇合时，以1:3的稀释率复制细胞。在下一次传代时，将细胞镀于四孔板中，并检测融合培养。将培养基改为含1% FBS的MEM，培养48 h，然后等量注射100 μl的‘ Semax ’（终浓度10 μM），在37℃co2培养箱中孵育不同时间。本研究中使用的培养物和处理条件的完整列表见表1。[4]

动物/疾病模型：缺血（pMCAO）大鼠[1]。
剂量：100 μg/kg
给药途径：永久性大脑中动脉闭塞（pMCAO）后15分钟、1小时、4小时和8小时进行腹腔注射（ip）。
实验结果：免疫反应增强（转录上调）。

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动物/疾病模型： 大鼠[5]
剂量： 50 µg、250 µg、100 µL/kg
给药途径： 鼻内吸入
实验结果： 大鼠基底前脑中脑源性神经营养因子 (BDNF) 蛋白水平升高。\n

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\n动物分为两组：(1)“缺血”组和 (2)“缺血+Semax”组。所有动物均进行pMCAO。实验期间，缺血+Semax组动物腹腔注射Semax（100 μg/kg），而缺血组动物腹腔注射生理盐水。在 pMCAO 后 15 分钟、1 小时、4 小时和 8 小时分别注射 Semax 或生理盐水。\n\n术后 3 小时和 24 小时，用乙醚麻醉后处死大鼠。根据文献数据，脑梗死区域形成过程中的重要事件，例如兴奋性毒性、线粒体损伤、活性氧的产生和细胞凋亡，均发生在动脉闭塞后的前 3 小时内，此时可以研究缺血早期基因的表达。24 小时时，梗死面积达到最大值，缺血半暗带形成完成[1]。\n

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\n\n药物。 Semax（Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro，0.15 和 0.6 mg/kg）溶于生理盐水（0.9% NaCl）中，并进行腹腔注射（ip）。[6] 测定 C57/bl 小鼠脑组织中单胺类神经递质及其代谢物的含量。[6] 在腹腔注射 Semax（0.15 mg/kg）后 0.5 或 2 小时处死 C57/bl 小鼠（每组 8-10 只）。将下丘脑和纹状体置于冰上（+4℃）分离，并保存在液氮中。将脑组织在含有0.5 μM 3,4-二羟基苯甲酸（作为内标）的0.1 M高氯酸溶液中匀浆，然后离心（10,000 × g，10 min，4℃；K70D）。取上清液，采用高效液相色谱-电化学检测法（HPLC/ED）进行分析。多巴胺 (DA) 及其代谢物 3,4-二羟基苯乙酸 (DOPAC)、高香草酸 (HVA) 以及血清素 (5-HT) 及其代谢物 5-羟基吲哚乙酸 (5-HIAA) 均采用玻碳电极在 +0.8 V 电位下进行检测。流动相包含 0.1 M 柠檬酸-磷酸盐缓冲液 (pH 2.9)、1.85 mM 1-辛烷磺酸、0.27 mM 乙二胺四乙酸 (EDTA) 和 8% 乙腈。单胺类及其代谢物采用 Phenomemex C18 分析型反相色谱柱（4 μm，150 × 4.6 mm）进行分离。流速为 1.0 ml/min。\n

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\n\n自由活动 Sprague-Dawley 大鼠细胞外单胺及其代谢物的测定。[6]
\n动物用水合氯醛（400 mg/kg，腹腔注射）麻醉。将定制的同心透析探针（3 mm 透析膜，0.5 mm 外径，10 kDa 截留分子量，Hospal，意大利）植入右侧纹状体（坐标：AP +0.5，L+3，DV +6.5）。术后20-24小时，将透析探针连接至微灌注系统，并以2 μL/min的流速灌注人工脑脊液，该人工脑脊液成分为（mM）：Na+ 155.0、K+ 2.9、Ca2+ 1.1、Mg2+ 0.8和Cl+ 133.0；pH 7.4。平衡1.5小时后，每20分钟收集一次透析液。死后，使用冰冻切片机对脑组织进行切片，以验证微透析探针的位置。在首次给药前，至少采集4个基线样本。单独或与多巴胺激动剂D-安非他明（D-AMPH，剂量为5 mg/kg（游离碱），腹腔注射）联合使用Semax（0.15或0.6 mg/kg，腹腔注射），D-AMPH于Semax注射后20分钟腹腔注射。每组包含6-7只大鼠。透析液采用高效液相色谱/电化学检测器（HPLC/ED）进行分析。电化学检测电极的电位分别设置为-175 mV和+200 mV。分析柱和流动相与上述相同。\n

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\n\nC57/bl小鼠运动活性的评估。[6]
\n还研究了Semax（0.6 mg/kg，腹腔注射）、D-AMPH（2.0 mg/kg，腹腔注射）及其联合用药对C57/bl小鼠运动活性的影响。选择D-AMPH的剂量是为了显著增强小鼠的运动活性。每组包含10-12只小鼠。使用Opto-Varimex仪器记录每只小鼠的运动活性，每次记录10分钟，共记录3次。第一次记录（完整小鼠）持续0-10分钟，随后注射Semax或生理盐水。第二次记录持续20-30分钟，在30分钟时注射D-AMPH或生理盐水。第三次记录持续50-60分钟，在注射D-AMPH 20分钟后开始。微透析和行为学实验中的给药方案相同。\n\n\n\n

[1]. The peptide semax affects the expression of genes related to the immune and vascular systems in rat brain focal ischemia: genome-wide transcriptional analysis. BMC Genomics. 2014 Mar 24;15:228.

[2]. Semax, a Synthetic Regulatory Peptide, Affects Copper-Induced Abeta Aggregation and Amyloid Formation in Artificial Membrane Models. ACS Chem Neurosci. 2022 Feb 16;13(4):486-496.

[3]. Effects of behaviorally active ACTH (4-10) analogue - Semax on rat basal forebrain cholinergic neurons. Restor Neurol Neurosci. 2008;26(1):35-43.

[4]. Rapid induction of neurotrophin mRNAs in rat glial cell cultures by Semax, an adrenocorticotropic hormone analog. Neurosci Lett. 2001 Aug 3;308(2):115-8.

[5]. Semax, an analogue of adrenocorticotropin (4-10), binds specifically and increases levels of brain-derived neurotrophic factor protein in rat basal forebrain. J Neurochem. 2006 Apr;97 Suppl 1:82-6.

[6]. Semax, an ACTH(4-10) analogue with nootropic properties, activates dopaminergic and serotoninergic brain systems in rodents. Neurochem Res. 2005 Dec;30(12):1493-500.

本研究分析了神经保护肽Semax在实验性局灶性脑缺血条件下对大鼠脑皮层细胞转录组的影响。尽管Semax已被证实对脑卒中治疗有效，但其神经保护作用的分子机制仍不清楚。如本文所示，Semax影响了多种参与机体不同系统功能的生物学过程。其中，免疫反应受Semax的影响最为显著。该肽增加了免疫细胞的数量和迁移能力，并增强了趋化因子和免疫球蛋白基因的表达。我们的数据表明，Semax可能影响缺血早期阶段新血管的形成及其在后期阶段的稳定过程。在pMCAO诱导的神经退行性变背景下，负责细胞内Ca2+水平的基因表达对Semax的给药非常敏感。我们的研究结果表明，Semax增强了编码促进细胞内Ca2+积累的蛋白质产物的基因表达。Semax对缺血损伤神经组织的神经保护作用可能包括影响Ca2+进入细胞的进程。因此，本文所述的Semax免疫调节作用及其在缺血条件下对血管系统的影响，很可能是该肽发挥神经保护作用的关键因素。大量表达水平发生改变的基因，其功能尚不明确或研究不足，这些基因的发现或许有助于揭示Semax作用于受损脑组织的其他未知通路。同时，我们必须指出，脑缺血的多组分复杂性以及Semax影响众多生物学过程的能力，都要求我们开展进一步研究，以揭示该肽作用机制的全部范围。 [1]

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总之，我们进行了一系列生物物理实验，结果表明七肽ACTH(4–7)-PGP（Semax）能够在没有模型膜的情况下抑制Aβ纤维的形成。特别是，我们发现，在Cu2+离子存在的情况下，Semax不仅能够螯合金属离子，抑制Aβ:Cu2+复合物的形成，而且很可能与Aβ:Cu2+寡聚体相互作用，从而延缓原纤维和纤维状物质的形成。DSC结果表明，该七肽能够调节Aβ:Cu2+与模型膜疏水核心的相互作用，从而阻止或延缓原纤维状物质插入模型膜的疏水核心。这一发现得到了以下证据的证实：在bTLE模型膜存在的情况下，Semax本身可以抑制纤维形成，但在Cu2+离子存在下，其抗聚集特性达到最大值。这表明该七肽与Aβ的单体/寡聚体以及Aβ:Cu2+复合物的相互作用方式不同。染料渗漏实验证实了这种不同的行为，ThT检测结果显示Semax具有保护作用。最后，MTT检测表明Semax或Semax:Cu2+复合物可以保护细胞免受Aβ1-42寡聚体的毒性作用。需要进行更深入的实验，特别是研究Semax对ROS产生的影响，已知Aβ:Cu2+相互作用会增加ROS的产生。[2]我们能够检测到用Semax处理的培养物中NGF和BDNF基因的mRNA水平的变化。此外，在用“Semax”孵育30分钟的神经胶质细胞中，两种基因的表达均显著增加。与对照组（0分钟时，C组）相比，BDNF mRNA水平增加了8倍，NGF mRNA水平增加了5倍。同时，我们观察到对照组神经胶质细胞在0分钟和24小时时（C组，0分钟；C组，24小时）两种基因的表达水平均保持稳定；而在15% FBS孵育期间（60分钟和24小时，见表1），两种基因的表达均略有增加，约为3倍。在用“Semax”孵育更长时间后（BDNF基因表达从1小时到4小时，NGF基因表达从1小时到3小时），神经胶质细胞培养物中这些基因的mRNA水平有所下降。此外，我们发现，在用“Semax”孵育8-16小时的神经胶质细胞中，这两个基因的表达均略有增加。本研究结果清楚地表明，“Semax”（一种ACTH(4-10)的合成类似物）可以增加新生大鼠脑原代神经胶质细胞中NGF和BDNF mRNA的表达。因此，这些结果支持我们的假设，即“Semax”对神经元细胞存活的至少部分影响可能是通过调节某些神经营养因子的表达来实现的。[4]

C37H51N9O10S

813.920147180557

813.348

C, 54.60; H, 6.32; N, 15.49; O, 19.66; S, 3.94

80714-61-0

Semax acetate;2828433-33-4

9811102

H-Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro-OH; Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro; L-methionyl-L-alpha-glutamyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-prolyl-glycyl-L-proline

MEHFPGP; H-MEHFPGP-OH

Typically exists as solid at room temperature

1.391g/cm3

1335.2ºC at 760 mmHg

761.3ºC

1.617

2.714

325.58

8

13

21

57

1450

6

C(N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(N1CCC[C@H]1C(=O)O)=O)(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)CC1NC=NC=1)CC1C=CC=CC=1

AFEHBIGDWIGTEH-AQRCPPRCSA-N

InChI=1S/C37H51N9O10S/c1-57-16-13-24(38)32(50)42-25(11-12-31(48)49)33(51)43-26(18-23-19-39-21-41-23)34(52)44-27(17-22-7-3-2-4-8-22)36(54)46-15-5-9-28(46)35(53)40-20-30(47)45-14-6-10-29(45)37(55)56/h2-4,7-8,19,21,24-29H,5-6,9-18,20,38H2,1H3,(H,39,41)(H,40,53)(H,42,50)(H,43,51)(H,44,52)(H,48,49)(H,55,56)/t24-,25-,26-,27-,28-,29-/m0/s1

(2S)-1-[2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]acetyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid

Semax; 80714-61-0; ACTH (4-7), Pro-Gly-Pro-; Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro; I5FAL2585H; ACTH (4-7), prolyl-glycyl-proline-; Pro-gly-pro-acth (4-7); UNII-I5FAL2585H;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。