| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 25mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
HCV NS5B polymerase; Setrobuvir targets the HCV NS5B RNA-dependent RNA polymerase, an essential enzyme for viral RNA replication . As a non-nucleoside inhibitor (NNI), it binds to the palm region I of the NS5B polymerase, specifically near the Tyr448 residue . Setrobuvir inhibits both de novo RNA synthesis and primer extension, with IC50 values between 4 and 5 nM in cell-free enzymatic assays . The compound shows differential potency across HCV subtypes: it is more potent against genotype 1b than genotype 1a .
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| 体外研究 (In Vitro) |
对于携带 HCV 基因型 1b/Con1 的亚基因组复制子，司曲布韦 (ANA598)（一种非核苷抑制剂）可与 HCV 聚合酶的掌袋结合，EC50 在纳摩尔范围内。影响拇指结合非核苷抑制剂活性的突变不会影响司曲布韦的活性，后者似乎限制了 RNA 从头合成和引物延伸 [1]。
在无细胞酶学实验中，setrobuvir 对基因 1a 和 1b 型重组 HCV NS5B 聚合酶表现出强效抑制，IC50 值达到亚纳摩尔水平 。在基于 Huh-7 细胞的 HCV 复制子实验中，setrobuvir 对基因 1b 型的 EC50 为 3 nM，对基因 1a 型的 EC50 为 52 nM，未观察到明显的细胞毒性 。该化合物对导致蛋白酶抑制剂、核苷类聚合酶抑制剂以及结合于不同位点的其他非核苷类抑制剂产生耐药的突变株保持完全活性 。Setrobuvir 在体外与干扰素-α 以及代表性的 HCV 蛋白酶和聚合酶抑制剂表现出协同作用 。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在一项 I 期单药治疗研究中，setrobuvir 以 200 mg、400 mg 和 800 mg 每日两次的剂量给药 3 天，产生了快速且持续的 HCV RNA 下降 。病毒动力学模型显示，setrobuvir 的 EC50 和病毒清除率在 HCV 基因 1b 型和 1a 型感染患者之间存在显著差异，导致基因 1b 型感染患者的病毒载量下降更为显著 。在一项 IIb 期研究中，setrobuvir 联合聚乙二醇干扰素和利巴韦林在初治患者中达到了 78% 的完全早期病毒学应答率，在既往部分应答/复发患者中达到了 76%，而安慰剂联合标准治疗组的相应应答率分别为 56% 和 44% 。值得注意的是，29% 的既往无应答患者在使用 setrobuvir 联合标准治疗后达到了 cEVR 。
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| 酶活实验 |
表面等离子体共振。[1]
所有分析物结合实验均在Biacore T100仪器上进行，使用n -羟基琥珀酰亚胺酯和1-乙基-3（3-二氨基丙基）盐酸碳二亚胺活化的预处理CM5传感器芯片。1bΔ21 NS5B蛋白及其变体在注射5分钟后固定到约9,000反应单位的标称密度。将化合物注入含有25 mM HEPES （pH 7.4）、10 mM MgCl2、150 mM NaCl、0.01% Tween 20、0.05% β-巯基乙醇和5% DMSO的缓冲液中。所有化合物均表现出1:1的饱和结合行为。为了竞争结合，实验设计包括注射饱和浓度的第一种分析物（160 nM非利布韦），然后立即注射等摩尔比例的分析物混合物（160 nM非利布韦加160 nM VX-222或Setrobuvir (RO-5466731;ANA-598)）。 Setrobuvir 对 HCV NS5B 聚合酶的抑制活性使用重组酶通过无细胞生化酶学实验进行评估。表达并纯化源自 HCV 基因 1a 和 1b 临床分离株的重组 NS5B 聚合酶。通过监测放射性标记核苷酸掺入 RNA 模板来测量聚合酶活性。测试不同浓度的 setrobuvir，并使用非线性回归分析从浓度-反应曲线计算 IC50 值。研究发现 setrobuvir 同时抑制从头 RNA 合成和引物延伸，IC50 值介于 4 至 5 nM 之间 。 |
| 细胞实验 |
HCV复制子表达细胞的EC50测定。[1]
将携带复制子的Huh7.5细胞胰蛋白酶化，以40000个细胞/孔的速度镀于48孔板中。第二天更换培养基，将7种不同浓度的抑制剂添加到细胞中，每对抑制剂在200 μl完全培养基中稀释3倍或10倍，有3次重复。48 h后，用TRIzol试剂从复制子细胞中提取总RNA，用实时逆转录- pcr （RT-PCR）定量病毒RNA。用1 μg总RNA与Moloney小鼠白血病病毒（NEB）和4 μM随机9核苷酸（nt）引物混合合成第一链cDNA。RT-PCR采用Bio-Rad IQ SYBR绿色试剂盒，引物为HCV 5′-UTRsense（5′-AGC CAT GGC GTT AGT ATG AGT GTC-3′）和5′-UTRanti（5′-ACA AGG CCT TTC GCG ACC CAA C-3′）。甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）分别用正、反义寡核苷酸5′-GAG TCA ACG GAT TTG GTC GT-3′和5′-TGG GAT TTC CAT TGA TGA CA-3′检测。将所有反应混合物加热至95℃10 min，然后进行40个PCR循环，分别为95℃15 s， 55℃20 s, 72℃30 s。如前所述，将每组的折数变化和百分比变化与对照组的值进行比较。采用GraphPad Prism软件，通过对数曲线拟合进行非线性回归分析，计算降低HCV RNA复制子水平50% （EC50s）的有效药物浓度。 重组丙型肝炎病毒聚合酶的表达和纯化。[1] 如前所述，在pET-21b中克隆了缺乏c端21个氨基酸的HCV NS5B蛋白1bΔ21。该结构体包含一个c端6组氨酸标签，以促进蛋白质纯化。L419M、M423T和I482L抗性突变体通过WT 1bΔ21表达质粒的定点诱变制备。重组1bΔ21和来源于1bΔ21的突变蛋白通过Talon金属亲和树脂在Chinnaswamy等人描述的Mono S柱上从大肠杆菌提取物中表达和纯化。使用纳米滴分光光度计定量蛋白质浓度，然后使用SDS-PAGE和牛血清白蛋白滴定系列检查纯度和蛋白质浓度。 小RNA模板凝胶RdRp试验。[1] RdRp检测在20 μl反应混合物中进行，反应混合物中含有20 mM谷氨酸钠（pH 8.2）、12.5 mM二硫代索糖醇、4 mM MgCl2、1 mM MnCl2、0.5% Triton X-100、0.2 mM GTP、0.1 mM ATP和UTP、3.3 nM [α-32P]CTP 、40 nM重组RNA聚合酶、100 nM PE46、50 nM LE19p。反应混合物在30℃下孵卵1 h，苯酚-氯仿萃取停止反应，然后在5 μg糖原和0.3 M NaO-acetate （pH 5.2）存在下乙醇沉淀RNA。RNA产物用7.5 M尿素- 20%聚丙烯酰胺凝胶分离。信号由磷酸化成像仪检测，并用ImageQuant软件定量。采用GraphPad Prism软件进行非线性回归分析，对数曲线拟合计算50%抑菌浓度（IC50）。 Setrobuvir 在细胞培养中的抗病毒活性使用 HCV 亚基因组复制子系统进行评估。携带基因 1b 型或基因 1a 型亚基因组 HCV 复制子的人肝癌细胞接种于实验板中。细胞与系列稀释的 setrobuvir 在 37°C、5% CO₂ 条件下孵育 3 天。孵育后，通过测量荧光素酶活性或实时定量 PCR 定量 HCV 复制。从浓度-反应曲线计算 EC50 值。使用 CellTiter-Glo 或 MTT 法平行评估细胞毒性以确定 CC50 值。Setrobuvir 的 EC50 值为 3 nM，CC50 约为 100 μM 。 |
| 动物实验 |
Setrobuvir 的临床前毒理学研究在大鼠和猴子中进行，以支持临床开发。Anadys Pharmaceuticals 公司完成了为期 26 周的大鼠和为期 39 周的猴子长期慢性毒理学研究，结果良好，支持在临床研究中进行长达一年的给药 。关于具体给药方案、动物模型和终点的详细信息在所提供的搜索结果中不可用。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
Setrobuvir 具有口服生物利用度，并表现出良好的体外代谢稳定性，在 0.5 mg/mL 微粒体蛋白浓度下，在人及猴肝微粒体中的半衰期超过 60 分钟 。在临床研究中，setrobuvir 的给药剂量为 200 mg、400 mg 和 800 mg，每日两次 。来自健康志愿者和 HCV 感染患者的药代动力学数据用于开发具有一级吸收和滞后时间的两室 PK 模型 。该化合物的分子量为 560.62 g/mol，分子式为 C25H25FN4O6S2 。计算所得 ALogP 为 2.98，表明具有中等亲脂性 。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
Setrobuvir 在临床研究中表现出良好的安全性特征。在一项纳入 283 名患者的 IIb 期研究中，接受 setrobuvir 联合聚乙二醇干扰素/利巴韦林治疗的患者因不良事件退出治疗的比例（5.6%）与接受安慰剂联合标准治疗的患者（5.9%）相似 。两组之间的不良事件特征相似，报告的事件均为接受干扰素和利巴韦林单药治疗的患者的典型事件。皮疹发生率在 setrobuvir 组为 39%（98% 为轻度或中度），而对照组为 22% 。两组均未报告 4 级皮疹。在大鼠和猴子中进行的临床前毒理学研究显示了支持长期给药的有利结果 。根据材料安全数据表，setrobuvir 被分类为非危险物质或混合物；NTP、IARC、OSHA 或 ACGIH 均未发现其致癌性 。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
塞特罗布韦已用于慢性丙型肝炎治疗研究的临床试验中。菲利布韦和VX-222是非核苷类抑制剂（NNI），它们与丙型肝炎病毒（HCV）RNA依赖性RNA聚合酶的拇指II变构口袋结合。这两种化合物在临床试验中均显示出显著的疗效，因此，深入了解其抑制机制至关重要。在本研究中，菲利布韦和VX-222抑制了HCV 1b/Con1亚基因组复制子，其半数有效浓度（EC50）分别为70 nM和5 nM。利用多种RNA模板进行生化分析，我们发现这两种化合物优先抑制引物依赖性RNA合成，而对从头起始的RNA合成几乎没有影响或仅有轻微影响。菲利布韦和VX-222与HCV聚合酶的解离常数分别为29 nM和17 nM。研究人员分析了拇指II口袋中三种潜在的耐药突变对这两种化合物抑制作用的影响。在亚基因组复制子和酶活性测定中，RNA聚合酶中的M423T突变对菲利布韦的耐药性至少提高了100倍。这种耐药性是由于突变酶与菲利布韦的结合亲和力(Kd)降低了250倍所致。相比之下，VX-222的抑制活性仅受M423T突变的轻微影响，但受I482L突变的影响更为显著。[1]
针对SARS-CoV-2的新疗法迫在眉睫。如今，COVID-19病毒感染正给世界带来巨大的健康危机。核苷酸抑制剂在对抗多种病毒感染方面展现出良好的疗效。本研究采用分子建模、分子对接和动力学模拟方法，构建了病毒蛋白RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）的模型，并测试了其与一些临床批准药物和候选药物的结合亲和力。分子动力学模拟用于在结合计算后平衡系统，以确保成功重现先前的研究结果，并纳入RdRp的动力学，从而了解其如何影响结合。结果表明，索非布韦、利巴韦林、加利地西韦、瑞德西韦、法匹拉韦、头孢呋辛、替诺福韦和羟氯喹均能有效结合SARS-CoV-2 RdRp。此外，塞曲布韦、YAK和IDX-184的结合效果更佳，而四种新型IDX-184衍生物在与SARS-CoV-2 RdRp结合方面也显示出良好的前景。迫切需要研发能够选择性结合并抑制SARS-CoV-2蛋白的药物。目前已有多种FDA批准的抗病毒药物，可以帮助我们完成这项旨在降低COVID-19风险的任务。化合物2和3可能与SARS-CoV-2 RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）紧密结合，因此可能对治疗COVID-19有效。[2] |
| 分子式 |
C25H25FN4O6S2
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|---|---|
| 分子量 |
560.6154
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| 精确质量 |
560.12
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| 元素分析 |
C, 53.56; H, 4.50; F, 3.39; N, 9.99; O, 17.12; S, 11.44
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| CAS号 |
1071517-39-9
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| PubChem CID |
135565932
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| LogP |
4.725
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| tPSA |
162
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
9
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
38
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| 分子复杂度/Complexity |
1270
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| 定义原子立体中心数目 |
4
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| SMILES |
FC1C=CC(CN2C3C(C4CC3CC4)C(O)=C(C3=NC4C=CC(NS(C)(=O)=O)=CC=4S(=O)(=O)N3)C2=O)=CC=1
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| InChi Key |
DEKOYVOWOVJMPM-RLHIPHHXSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H25FN4O6S2/c1-37(33,34)28-17-8-9-18-19(11-17)38(35,36)29-24(27-18)21-23(31)20-14-4-5-15(10-14)22(20)30(25(21)32)12-13-2-6-16(26)7-3-13/h2-3,6-9,11,14-15,20,22,28,31H,4-5,10,12H2,1H3,(H,27,29)/t14-,15+,20+,22-/m0/s1
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| 化学名 |
N-[3-[(1R,2S,7R,8S)-3-[(4-fluorophenyl)methyl]-6-hydroxy-4-oxo-3-azatricyclo[6.2.1.02,7]undec-5-en-5-yl]-1,1-dioxo-4H-1λ6,2,4-benzothiadiazin-7-yl]methanesulfonamide
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| 别名 |
RG-7790; ANA-598; RG7790; ANA598; RO5466731; RO-5466731; RO 5466731; 1071517-39-9; Setrobuvir [USAN]; Setrobuvir [USAN:INN]; Setrobuvir [INN]; Setrobuvir (USAN); T5B2GI8F84; Setrobuvir
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7837 mL | 8.9187 mL | 17.8374 mL | |
| 5 mM | 0.3567 mL | 1.7837 mL | 3.5675 mL | |
| 10 mM | 0.1784 mL | 0.8919 mL | 1.7837 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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