D1 Receptor (Ki = 1.18 nM); Sigma 1 Receptor; D5 Receptor (Ki = 7.56 nM); D2 Receptor (Ki = 920 nM); D3 Receptor (Ki = 399 nM)

在膜中，SKF83959 (10~250 μM) 会增加 PIP2 水解。 SKF83959（0.1~10 μM；PC12 细胞）将对照组织中 SKF81297 的 EC50 值更改为 31.6 nM、251.2 nM 和 631.0 nM [2]。

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SKF83959对FC [35S]GTPγS结合Gα蛋白的影响 [2]
接下来，我们试图通过测量受体刺激的[35S]GTPγS与膜Gα蛋白的结合来确定连接D1 DAR与PI通路的鸟嘌呤核苷酸结合调节蛋白（G蛋白）。用100µm SKF83959孵育大鼠FC膜后，[35S]GTPγS与Gαi和Gαq的结合分别增加了41%和96%，而与Gαs和Gαo蛋白的结合没有变化（图5）。因此，SKF83959通过偶联Gαq和/或Gαi蛋白刺激PI水解。

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SKF83959对脑及D1A/PC12细胞膜腺苷酸环化酶活性的影响[2]
SKF83959调节腺苷酸环化酶活性的能力在纹状体和D1A/PC12细胞的膜上进行了测试。SKF38393和SKF81297刺激纹状体和D1A/PC12细胞膜的腺苷酸环化酶活性，而SKF83959在两种膜制剂中没有激活该酶（图7a和b）。相反，这种苯氮平对D1 dar刺激的腺苷酸环化酶表现出明显的拮抗作用，这可以从SKF81297的剂量-反应曲线向右移动中看出。SKF83959剂量（0.1、1.0、10µm）下，对照组织中SKF81297的EC50值从0.5 nm变为31.6 nm、251.2 nm和631.0 nm（图8）。

在Y迷宫测试和被动回避任务中，SKF83959（0.5和1 mg/kg；腹腔注射；1小时）恢复了东莨菪碱引起的认知障碍[1]。脑源性神经营养因子的全身阻断可阻止 SKF83959（1 mg/kg；腹腔注射；30 分钟）引起的记忆增强[1]。在小鼠海马体中，SKF83959具有抗遗忘活性，可以重建东莨菪碱降低的BDNF信号通路[1]。

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阿尔茨海默病（AD）患者通常存在认知障碍。本研究探讨了6-氯-7,8-二羟基-3-甲基-1-（3-甲基苯基）-2,3,4,5-四氢- 1h -3-苯并平（SKF83959）是否对认知功能障碍有改善作用。采用东莨菪碱痴呆模型研究SKF83959的抗遗忘活性，然后采用Western blotting和药理学抑制剂检测SKF83959的抗遗忘机制。结果发现，SKF83959可显著改善被动回避任务、y型迷宫和Morris水迷宫任务中东莨菪碱引起的记忆障碍。此外，SKF83959治疗显著拮抗东莨菪碱对海马（而非皮质）脑源性神经营养因子（BDNF）信号级联的下调作用。重要的是，在东莨菪碱模型中，K252a（酪氨酸激酶B （TrkB）的选择性抑制剂）的使用显著减弱了SKF83959的保护作用。综上所述，本研究表明SKF83959通过调节海马BDNF信号通路在东莨菪碱痴呆模型中具有有益作用，这意味着SKF83959是一种治疗AD痴呆的新型潜在药物。[1]

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苯氮平介导的脑磷酸肌肽水解特性[2]
研究了SKF83959、SKF81297和SKF38393三种苯氮平类化合物对大鼠FC膜中PIP2水解的影响。如图1所示，所有三种化合物都显示出PIP2水解的剂量相关增加。SKF83959和SKF81297分别在250µm和500µm处达到最大刺激（3.4倍、1.3倍或2.1倍）。曲线拟合得到SKF83959、SKF81297和SKF38393的相对效价（EC50）分别为34.8±3.1、17.8±1.2和72.4±4.6µm。

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SKF83959刺激的磷酸肌苷水解被SCH23390和顺式氟烷醇阻断[2]
测试了七种受体拮抗剂阻断skf83959刺激的PIP2水解的能力（图2a）。选择性D1 DAR拮抗剂SCH23390、D1和D2受体混合拮抗剂顺式氟苯甲醇抑制skf83959刺激的PIP2水解，而mucarinic乙酰胆碱受体拮抗剂阿托品、α1-肾上腺素受体拮抗剂吡唑嗪、D2 DAR拮抗剂spiperone和（+）butaclamol以及5-羟色胺5-HT2A/2C受体拮抗剂mesulergine不影响skf83959刺激的PIP2水解。SCH23390剂量依赖性地抑制skf83959刺激的PIP2水解，估计IC50值为110µm（图2b），表明该化合物通过d1样DAR亚型刺激PI水解。然而，用SKF38393或SKF83959刺激表达D1A dar的PC12细胞制备的膜并没有产生PIP2水解的显著激活（图3）。因此，这些数据清楚地表明，刺激D1A受体并不是大鼠脑膜制备中苯氮平介导的PIP2水解的原因。

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SKF83959-在不同脑区制备的膜中诱导PI水解[2]
比较了SKF83959在不同脑区制备的膜中诱导[3H]PIP2水解的能力。结果如图4所示，在浓度为10µm、50µm和250µm时，SKF83959显著且剂量依赖性地刺激FC、海马、纹状体和小脑的IP生成。结果表明，pi连接的d1样受体亚型在大脑中广泛分布。

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SKF83959给药对大鼠脑PI水解的影响[2]
到目前为止，我们已经证明SKF83959在分离的脑膜中激活PI水解。因此，我们在体内测试了该药物是否也能刺激PI通路。腹腔注射0.8 mg/kg SKF83959后8、15、25 min处死大鼠，观察脑区IP3水平。如图6所示，SKF83959在纹状体注射后8-25分钟和海马注射后8-15分钟增加了IP3含量，其剂量之前被证明会引起行为反应。

腺苷酸环化酶测定[2]
用磷酸盐缓冲液洗涤后收获D1A/PC12细胞。将细胞匀浆于10体积（w/v）含有50 mm Tris-HCl、pH 7.4、2 mm EGTA和10%蔗糖的冷冻缓冲液中。匀浆800 g离心10 min，上清49 000 g离心20 min。颗粒洗涤两次，悬浮在50 mm Tris-HCl缓冲液中，pH为7.4。
从大鼠脑上解剖纹状体，用特氟龙/玻璃匀浆机匀浆，匀浆量为10体积（w/v）的预冷缓冲液，其中含有50 mm Tris-HCl、2 mm EGTA和10%蔗糖，pH值为7.4。匀浆8000 g离心10 min，上清49 000 g离心20 min。颗粒洗涤两次，悬浮在50 mm Tris-HCl缓冲液中，pH为7.4。
以牛血清相册为标准测定膜蛋白。腺苷酸环化酶测定采用所罗门（1979）提出的改良方法。每次检测均在250µL溶液中进行，溶液中含有50 mm Tris-HCl、pH 7.4、2 mm MgCl2、0.1 mm ATP、10 mm磷酸肌酸、5 U肌酸磷酸激酶、0.2 mm EGTA、100µm 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、10µm三磷酸鸟苷（GTP）、1 mm二硫苏糖醇、1µCi [α-32P]ATP和50µg膜蛋白。反应在30℃下进行20 min，加入300µL含有2%十二烷基硫酸钠、25 mm ATP和1.3 mm cAMP的溶液结束。用Dowex和氧化铝层析分离[32P]cAMP和[32P]ATP。[3H]在每个反应混合物中加入cAMP，以便计算和校正柱回收率。每个样品的放射性用液体闪烁光谱法测定。

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[35] gtp - γ - s结合选择g蛋白[2]
使用玻璃/玻璃均质机，将FC在含有25 mm HEPES （pH 7.4）、100 mm蔗糖、1 mm EGTA、0.2% 2-巯基乙醇、蛋白酶抑制剂混合物（50µg/mL胰肽、25µg/mL胃抑素A、0.01 U/mL大豆胰蛋白酶抑制剂和0.04 mm苯基甲基磺酰氟）的10体积冷藏均质缓冲液中均质。组织匀浆在750 g（4°C）下离心10分钟。然后将得到的上清液在48 200 g（4°C）下离心10分钟。将颗粒重悬于含有20 mm HEPES （pH 7.4）、154 mm NaCl、4.8 mm KCl、1.2 mm KHPO4、1.2 mm MgCl2和蛋白酶抑制剂混合物的反应缓冲液中。在没有或存在100µm SKF83959的情况下，检测混合物（250µL）含有200µg膜蛋白，2 nm[35S] gtp - γ s。在37℃条件下，用750µL含有1mm EDTA和1mm EGTA的冷冻缓冲液孵育10min后停止反应。然后在16000 g下离心5分钟。将微球溶解于沉淀缓冲液中，用特异性抗g α抗血清在4℃下免疫沉淀过夜，然后加入15µL蛋白- a偶联琼脂糖珠。将混合物轻轻摇晃2小时。离心回收微珠，用1 mL沉淀缓冲液洗涤两次，如前所述(Friedman et al. 1993；Wang et al. 1995)。所得到的含有抗原-抗体复合物的微球经短暂超声处理，并用液体闪烁光谱法测定放射性。

大鼠D1A的细胞培养及DAR 的表达[2]
将PC12细胞以大约100-200个/mm2的密度在胶原包被的培养皿中接种于RPMI培养基1640 (Life Technologies, Gaithersburg， MD， USA)，培养基中添加10%马血清，5%胎牛血清，50 pg/mL链霉素，50 U/mL青霉素。细胞在95%空气和5% CO2的水饱和气氛中37°C培养，当汇合度达到40-60%时进行转染。如前所述，将大鼠D1A DAR cDNA插入pTargeT载体（Promega, Madison， WI， USA）的多连接子区域（Cai et al. 1999）。转染D1A DAR时，将Lipofectin与等体积的质粒DNA混合在含有10 mm Tris， 1 mm EDTA, pH 8.0的缓冲液中，室温静置20分钟。细胞洗涤两次，用3ml的OPTI-MEM（一种还原血清培养基）孵育。将dna -脂脂素混合物加入培养细胞中，孵育24 h。取出含dna的培养基，替换为3ml添加20%胎牛血清的RPMI培养基1640，再孵育24小时。在基因转移实验中用400µm G418 （genestin）选择稳定表达的克隆，并在200µm G418培养基中维持。以[3H]SCH23390为配体，通过受体结合实验证实了D1A受体在PC12细胞中的阳性表达。当前表达D1A的PC12细胞（D1A/PC12）结合实验的Bmax为4.8±0.7 pmol/mg， Kd为0.38±0.09 nm。

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大鼠脑和表达d1a的PC12细胞膜中PIP2水解的测定[2]
用磷酸盐缓冲液收获D1A/PC12细胞。将细胞匀浆于10体积（w/v）含有50 mm Tris-HCl、pH 7.4、2 mm EGTA和10%蔗糖的冷冻缓冲液中。匀浆800 g离心5 min，上清49 000 g离心20 min。将得到的颗粒洗涤两次，悬浮在25 mm三马来酸缓冲液（pH 6.8）中，其中含有3 mm EGTA。[2][2]
大鼠被斩首，迅速移除大脑，并在冰上解剖大脑区域-小脑，额叶皮质（FC），海马和纹状体。脑组织置于pH 7.4 Kreb’s Ringer碳酸氢盐（KRB）缓冲液中，其中含有20 mm HEPES， 118 mm NaCl, 4.7 mm KCl, 1.2 mm MgSO4, 1.2 mm KH2PO4, 25 mm NaHCO3和10 mm葡萄糖，O2/CO2（95: 5）平衡。将组织切成350 × 350µm切片，室温下用KRB洗涤2次，37℃摇水浴中KRB孵育15 min。然后用pH 7.0的低渗缓冲液（含20 mm Tris-HCl， 1 mm EGTA）在4°C下洗涤2次，并用特氟龙-玻璃均质机在缓冲液中匀浆10次。匀浆在3300 g下离心15 min，丢弃上清，重悬于pH 7.0, Tris-HCl 20 mm, KCl 2 m， EGTA 1 mm缓冲液中，离心。得到的微球在低渗缓冲液中洗涤两次，最后悬浮在25毫米三马来酸缓冲液（pH 6.8）中，其中含有3毫米EGTA，如上所述(Gonzales和Crews 1984；Carter et al. 1990)。[2] [2]
为了测定磷酸肌苷水解，将100µg膜蛋白加入到含有25 mm马来酸三酯（pH 6.8）、1µm gtp - γ s、6 mm MgCl2、8 mm LiCl、1 mm脱氧胆酸钠/[3H]PIP2（0.01µCi）混合物、100 nm游离Ca2+ （3mm EGTA调节）、各种浓度的激动剂和/或拮抗剂的实验管中，最终体积为250µL。首先加入膜悬浮液，在37℃下孵育30分钟。通过加入1.5 mL氯仿：甲醇：12盐酸混合物（100:200:1,v/v/v），然后加入500µL氯仿和750µL水来停止反应。涡流1 min， 800g离心5 min，加强相的分离。直接对水相中的[3H]肌醇磷酸进行计数。[2]

动物/疾病模型：雄性ICR小鼠（8周龄）[1]
剂量：1 mg/kg
给药途径：腹腔注射（ip）；30分钟
实验结果：BDNF系统阻断可阻止记忆增强效应。

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体内SKF83959刺激后原位脑内IP3积累的测定[2]
大鼠腹腔注射0.8 mg/kg SKF83959或载体，分别于注射后8、15或25分钟断头处死。取出脑组织，解剖额叶皮层（FC）和海马。将组织在1.5 mL 1 M三氯乙酸中匀浆，冰上放置15分钟，然后在13000 g下离心10分钟。沉淀物用蒸馏水洗涤三次，并在1 M NaOH中消化，采用Bradford法测定蛋白质含量。取500 µL三氯乙酸组织提取物置于聚丙烯Eppendorf管中，加入1 mL三氯三氟乙烷-三辛胺（3:1）混合液，剧烈混匀15秒，然后在10000 g下离心1分钟。取上清液，按照试剂盒说明书进行IP3测定。IP3浓度以pmol/mg蛋白表示。

[1]. SKF83959 Has Protective Effects in the Scopolamine Model of Dementia. Biol Pharm Bull. 2018;41(3):427-434.

[2]. SKF83959 selectively regulates phosphatidylinositol-linked D1 dopamine receptors in rat brain. J Neurochem. 2003;85(2):378-386.

[3]. Receptor affinities of dopamine D1 receptor-selective novel phenylbenzazepines. Eur J Pharmacol. 2003;474(2-3):137-140.

[4]. SKF83959 is a potent allosteric modulator of sigma-1 receptor. Mol Pharmacol. 2013;83(3):577-586.

N-甲基-6-氯-1-(3-甲基苯基)-2,3,4,5-四氢-3-苯并氮杂卓-7,8-二醇是一种苯并氮杂卓类化合物，其结构为2,3,4,5-四氢-3-苯并氮杂卓，在1位连接一个3-甲基苯基取代基，3位连接一个甲基取代基，6位连接一个氯取代基，7位和8位分别连接两个羟基取代基。它是多巴胺D1样受体的部分激动剂（对大鼠D1、D5、D2和D3受体的Ki值分别为1.18、7.56、920和399 nM）。在体内，它可能作为拮抗剂发挥作用，产生抗帕金森病作用并拮抗可卡因的行为效应。它具有多巴胺激动剂的作用。它是一种苯并氮杂卓类化合物，属于儿茶酚类、叔胺类化合物和有机氯化合物。它是N-甲基-6-氯-1-(3-甲基苯基)-2,3,4,5-四氢-3-苯并氮杂卓-7,8-二醇(1+)的共轭碱。此前有研究提出存在一种独特的D1样多巴胺受体(DAR)，该受体选择性地与磷脂酶C/磷脂酰肌醇(PLC/PI)偶联。然而，由于缺乏选择性激动剂，对该受体的表征研究受到限制。我们研究了SKF83959在体外和体内对PI代谢的调节作用。 SKF83959 可刺激额叶皮层 (FC) 细胞膜中磷脂酰肌醇 4,5-二磷酸 (PI4P) 的水解（EC50 为 8 μM），但对表达经典 D1A DAR 的 PC12 细胞膜无此作用。D1 受体拮抗剂 SCH23390 可减弱 SKF83959 对 FC PI 代谢的刺激作用，表明 SKF83959 激活的是一种 D1 样 DAR。这种 PI 偶联的 DAR 定位于海马、小脑、纹状体和 FC。更重要的是，SKF83959 的给药可诱导纹状体和海马中 IP3 的积累。与其他 D1 DAR 激动剂不同，SKF83959 不会增加脑组织或表达 D1A DAR 的 PC12 细胞膜中的 cAMP 生成。然而，SKF83959抑制了D1A DAR激动剂SKF81297诱导的cAMP升高，表明该化合物是经典D1A DAR的拮抗剂。最后，我们证实SKF83959增强了[35S]鸟苷5'-O-(3-硫代三磷酸)与膜Gαq和Gαi蛋白的结合，提示PI刺激是通过激活这些鸟嘌呤核苷酸结合调节蛋白介导的。结果表明，SKF83959 是 PI 连接的 D1 样 DAR 的选择性激动剂，为研究该脑 D1 DAR 亚型的功能提供了一种独特的工具。[2]

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我们制备了一系列 18 种新型取代苯基苯并氮杂卓类似物，它们是多巴胺 D1/D5 受体部分激动剂 SKF-83959 (R,S-3-甲基-6-氯-7,8-二羟基-1-[3'-甲基苯基]-2,3,4,5-四氢-1H-苯并氮杂卓) 的衍生物，并在大鼠脑组织或基因转染细胞膜的多巴胺、5-HT 和肾上腺素受体测定中表征了它们的效力和选择性。 SKF-83959 的 R-对映体 (MCL-202) 以及其他三种新型外消旋 1-苯基-7,8-二羟基苯并氮杂卓 (MCL-204、-203 和 -207) 均表现出极高的多巴胺 D5 受体亲和力；其中 MCL-209 的多巴胺 D5 受体亲和力最高。这五种强效新型配体对多巴胺 D1 受体的选择性比对多巴胺 D2、D3 受体、5-羟色胺 5-HT2A 受体和 α2-肾上腺素受体的选择性高 100 倍以上。需要进一步的功能测试来表征它们的内在活性以及潜在的兴奋剂-拮抗剂作用，正如 SKF-83959 和 MCL-202 所观察到的那样。[3] SKF83959（3-甲基-6-氯-7,8-羟基-1-[3-甲基苯基]-2,3,4,5-四氢-1H-3-苯并氮杂卓）是一种非典型多巴胺受体-1 (D(1) 受体) 激动剂，已显示出许多不依赖于 D(1) 受体的作用，例如神经保护、阻断钠离子通道和促进自发性谷氨酸释放，这些作用类似于 σ-1 受体激活的作用。在本研究中，我们探讨了 SKF83959 对 σ-1 受体的潜在调节作用。结果表明，SKF83959 显著促进了 (3)H(+)-喷他佐辛（一种选择性 σ-1 受体激动剂）与脑和肝组织中 σ-1 受体的结合，但对 (3)H-孕酮（一种 σ-1 受体拮抗剂）的结合没有影响。饱和度测定和解离动力学测定证实了变构效应。我们进一步证明，SKF83959 的类似物，例如 SCH22390 [(R)-(1)-7-氯-8-羟基-3-甲基-1-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-3-苯并氮杂卓盐酸盐] 和 SKF38393 [(+/-)-1-苯基-2,3,4,5-四氢-(1H)-3-苯并氮杂卓-7,8-二醇氢溴酸盐]，在肝组织中对 σ-1 受体也表现出类似的变构效应，但在脑组织中则没有。此外，所有三种受试化合物均未对 (3)H-1,3-二(2-甲苯基)胍 ((3)H-DTG) 与 σ-2 受体的结合产生显著影响。目前的数据揭示了 SKF83959 及其类似物在 sigma-1 受体上的新作用，这反过来可能揭示了该药物 D(1) 受体非依赖性作用的潜在机制。[4]

C18H20CLNO2

317.81

C, 54.22; H, 5.31; Br, 20.04; Cl, 8.89; N, 3.51; O, 8.03

80751-85-5

SKF 83959 hydrobromide;67287-95-0

133538

White to light yellow solid powder

1.249g/cm3

464.6ºC at 760 mmHg

234.8ºC

1.619

4.575

43.7

2

3

1

22

380

0

CC1=CC(=CC=C1)C2CN(CCC3=C(C(=C(C=C23)O)O)Cl)C

JXMYTVOBSFOHAF-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C18H20ClNO2/c1-11-4-3-5-12(8-11)15-10-20(2)7-6-13-14(15)9-16(21)18(22)17(13)19/h3-5,8-9,15,21-22H,6-7,10H2,1-2H3

9-chloro-3-methyl-5-(3-methylphenyl)-1,2,4,5-tetrahydro-3-benzazepine-7,8-diol

SKF-83959; SKF 83959 hydrobromide; SKF-83,959; Skf-83959; 80751-85-5; SKF83,959; SKF 83,959; 3-Methyl-6-chloro-2,3,4,5-tetrahydro-7,8-dihydroxy-1-(3-methylphenyl)-1H-3-benzazepine; SK&F 83959; 9-chloro-3-methyl-5-(3-methylphenyl)-1,2,4,5-tetrahydro-3-benzazepine-7,8-diol; SKF83959

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~314.65 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。