MCHR1/melanin-concentrating hormonereceptor1 (Ki= 2.2 nM; Kd=530 pM)

本研究描述了放射自显影分析的优化，该分析提供了一种方法来测量黑色素浓缩激素受体1 （MCH(1)）拮抗剂在天然组织中的体外效力及其体外受体占用率。初步定位研究表明，MCH(1)受体放射配体[(125)I]-S36057与大鼠尾状壳核结合，特异性结合率始终为60%。在体外实验中，MCH(1)受体拮抗剂GW3430、 nap -94847和4'-{[1-（环丙基甲基）哌啶-4-酰基][5-氟-6-（三氟甲基）- 1h -苯并咪唑-2-基]甲基}联苯-3-碳腈（简称化合物A）对[(125)I]- s36057的特异性结合表现出浓度依赖性的抑制作用，亲和程度顺序为 nap -94847>Compound A>GW3430。[4]

SNAP 94847（口服管饲；20 mg/kg；14 天）显示对急性喹吡罗的过度运动反应[治疗：F(2,19)=11.31，治疗×时间：F(34,323) = 4.061]，SNAP 94847 的效果在整个观察期间，与未治疗的动物相比，喹吡罗诱导的活性显着[2]。与未处理的动物相比，饮用水中的 SNAP 94847（口服；20 mg/kg；21 天）显着增加了活动能力 [处理：F(3,28) = 8.971；治疗×时间：F(51,476)=11.50]。结果表明，SNAP 94847 治疗组在 40 分钟后明显增加了运动量，并且这种效果在 180 分钟时仍然显着 [2]。 SNAP 94847（口服；10 mg/kg）具有良好的生物利用度（59%），血浆和血液清除率分别较低，分别为 4.2 L/hr/kg 和 3.3 L/hr/kg，半衰期如 PK 所示研究显示，大鼠的作用持续时间为5.2小时[3]。

---

黑色素浓缩激素（Melanin-concentrating hormone， MCH）是一种下丘脑神经肽，在调节食物摄入和情绪中起作用。在啮齿动物中，MCH的作用是通过MCHR1受体介导的。本研究的目的是研究急性（1小时）和慢性（28天）p.o.给药一种新型MCHR1拮抗剂N-[3-（1-{[4-（3,4-二氟苯氧基）-苯基]甲基}（4-哌啶基）-4-甲基苯基]-2-甲基丙酰胺(SNAP-94847）对三种预测抗抑郁/抗焦虑样活性的小鼠模型的影响：129S6/SvEvTac小鼠的新颖抑制喂养（NSF）和BALB/cJ小鼠的光/暗范式（L/D）和强迫游泳试验（FST）。急性和慢性治疗SNAP-94847时，观察到L/D盒光室的时间显著增加。在急性和慢性治疗后，NSF测试中发现了抗焦虑/抗抑郁样作用，而在FST中没有观察到任何作用。由于在NSF试验中，齿状回的神经发生已被证明是抗抑郁药作用的必要条件，因此我们研究了SNAP-94847的作用是否需要神经发生。我们发现，用SNAP-94847进行慢性治疗可以刺激齿状回中祖细胞的增殖。然而，在x射线照射抑制神经发生的小鼠中，SNAP 94847在NSF试验中的功效没有改变。这些结果表明，SNAP-94847在急性和慢性给药后都具有独特的抗焦虑样特征，其作用机制与选择性5 -羟色胺再摄取抑制剂和三环抗抑郁药不同。[1]

---

全身注射SNAP 94847可降低食物增强的操作反应和mch诱导的寻找食物的恢复。SNAP-94847对颗粒启动、cue或育因宾诱导的恢复无影响。 结论：结果表明，MCH1受体参与食物强化的操作性反应，但不参与急性暴露于高脂肪食物、食物线索或育亨宾诱导的应激样状态诱导的恢复。这些结果表明，不同的机制介导食物增强的操作性反应和食物寻找的恢复。［2］

Competition binding studies [4]
在尾状壳核水平的冠状切片被用于竞争结合研究。简单地说，在预孵育之后，将切片用50 pM [125I]-S36057孵育，在0.01 nM-10 μM范围内存在MCH1受体拮抗剂（GW3430, snap94847 或化合物a）；如前所述，全部溶解并稀释在100% DMSO中，并添加到实验缓冲液中，使DMSO的最终浓度恒定在1%。非特异性结合用1 μM MCH定义。

动物/疾病模型： 大鼠[2]
剂量： 20 mg/kg
给药途径： 口服；20 mg/kg；14 天
实验结果： 显示出对急性喹吡罗的过度运动反应。

---

动物/疾病模型： 大鼠（药代动力学研究）[3]
剂量： 10 mg/kg
给药途径： 口服（灌胃）；10 mg/kg
实验结果： 在大鼠中表现出良好的理化性质。 SNAP-94847（3、10、15 和 30 mg/kg，腹腔注射）溶于 20% 2-羟丙基-β-环糊精（encapsin）溶液中，育亨宾（2 mg/kg，腹腔注射）溶于无菌水中。[2] 实验 1：SNAP-94847 对食物强化操作性反应的影响 [2] 我们首先研究了全身注射 SNAP-94847 对持续食物强化反应的影响。连续 14 天，每天对 12 只大鼠进行一次 3 小时的训练，如上所述。随后，我们评估了SNAP-94847对大鼠按压杠杆获取食物颗粒次数的影响。我们进行了四次持续3小时的测试，每48小时进行一次。我们采用受试者内实验设计，因素包括SNAP-94847剂量（赋形剂、3、10和30 mg/kg）和实验时间（第1、2和3小时）。每只大鼠均以平衡顺序注射赋形剂或不同剂量的SNAP-94847。在测试前 60 分钟注射 SNAP 94847 或其载体，因为之前的研究表明，剂量高达 30 mg/kg 的 SNAP-94847 可在 60 分钟内显著穿透血脑屏障（DGS 未发表数据和 Chen 等，2007）。\n

---

\n实验 2：SNAP-94847 对 MCH 诱导的觅食行为恢复的影响 [2]
\n为了确定 SNAP-94847 对 MCH 诱导的觅食行为恢复的影响，我们首先评估了 MCH 对这种恢复的影响。在完成 SNAP 94847 全身注射对食物强化反应的影响实验后，我们将引导套管植入大鼠的侧脑室。术后恢复期为5天后，对大鼠进行为期3天的重新训练，使其通过按压杠杆获取高脂食物颗粒，并在13次每日消退训练中消除按压杠杆的反应。在5次测试中，每隔48小时，按MCH剂量递增的顺序，分别向大鼠（n=12）脑室内注射赋形剂或MCH（2.5、5、10和20μg），并在测试间隙进行消退训练。我们采用受试者内实验设计，因素包括MCH剂量（赋形剂、2.5、5、10和20μg）和测试时间。\n在另一组大鼠（n=10）中，我们研究了SNAP-94847（30 mg/kg，腹腔注射）对MCH（20μg）诱导的复吸的影响。我们采用受试者内实验设计，受试者内因素包括预处理条件（0 或 30 mg/kg SNAP 94847）、MCH 剂量（0、20μg）和实验时间。在间隔 24-72 小时的测试日，每只大鼠在测试前 60 分钟全身注射 SNAP-94847（30 mg/kg）或其溶剂，然后在测试前 8-12 分钟注射 MCH 或其溶剂； MCH及其溶剂和SNAP 94847及其溶剂的注射顺序进行了平衡。\n

---

\n实验3：SNAP-94847对育亨宾、食物颗粒启动和线索诱导的觅食行为恢复的影响[2]
\n食物颗粒启动诱导的恢复\n我们测试了SNAP-94847对食物颗粒启动诱导的恢复的影响。测试分为四个阶段，每个阶段持续3小时，其中两个阶段连续进行，两个阶段之间间隔一天的消退期。在测试阶段，在测试开始后的第一分钟内，随机给予三粒食物颗粒（即每20秒给予一粒）。我们采用混合实验设计，包括受试者间因素SNAP剂量（15或30 mg/kg，每组n=10）和受试者内因素预处理条件（0和SNAP-94847[15或30 mg/kg]）、启动条件（颗粒、无颗粒）和实验时间。在间隔24-72小时的测试日，每只大鼠在测试前60分钟全身注射SNAP-94847载体或SNAP-94847剂量之一（15或30 mg/kg），然后暴露于启动条件（三个颗粒或无颗粒）。 SNAP 94847及其载体的注射以及启动条件均进行了平衡。\n

---

\n线索诱导的恢复[2]
\n如上所述，在训练阶段，每次食物颗粒的投放都与一个音光线索（线索）配对；在按压操作杆后的消退阶段，该线索不再呈现。在恢复测试中，按压操作杆会根据固定比率1:20秒的暂停强化程序呈现该线索。我们总共进行了四次测试，其中两次测试连续进行，两次测试之间间隔五天的消退期，以测试SNAP-94847对线索诱导的恢复的影响。我们按照之前的实验，在各组测试之间进行了五天的消退期，这些实验证明，这种程序可以最大限度地减少对条件线索呈现的习惯化（未发表的数据和 Bossert 等人 2006 年；Ghitza 等人 2007 年）。我们采用混合设计，组间因素为 SNAP 剂量（15 或 30 mg/kg，15 mg/kg 组 n=8，30 mg/kg 组 n=10），组内因素为预处理条件（0 和 SNAP-94847 [15 或 30 mg/kg]）、提示（有提示，无提示）和实验时间。\n

---

\n育亨宾诱导的复吸 [2]
\n我们在四次测试中检验了 SNAP-94847 对育亨宾诱导的复吸的影响，其中两次测试连续进行，两次测试之间间隔一天的消退期。我们采用混合实验设计，组间因素为SNAP剂量（15或30 mg/kg，15 mg/kg组n=12，30 mg/kg组n=19），组内因素为预处理条件（0和SNAP-94847[15或30 mg/kg]）、育亨宾剂量（0或2 mg/kg）和实验时长。SNAP-94847剂量组（15 mg/kg和30 mg/kg）各10只大鼠此前已接受过SNAP 94847对颗粒诱发复吸效应的测试。这些大鼠在进行育亨宾诱导复吸测试前，接受了2天的消退训练。在间隔 24-72 小时的测试日，每只大鼠在测试前 60 分钟全身注射 SNAP 94847 溶剂或 SNAP 94847 剂量（15 或 30 mg/kg），然后在 15 分钟后（即测试前 45 分钟）注射育亨宾；SNAP 94847 或其溶剂与育亨宾或其溶剂的注射顺序进行了平衡。

[1]. Efficacy of the MCHR1 antagonist N-[3-(1-{[4-(3,4-difluorophenoxy)phenyl]methyl}(4-piperidyl))-4-methylphenyl]-2-methylpropanamide (SNAP 94847) in mouse models of anxiety and depression following acute and chronic administration is independent of hippocampal neurogenesis. J Pharmacol Exp Ther. 2007 Apr;321(1):237-48. Epub 2007 Jan 19.

[2]. Effects of the MCH1 receptor antagonist SNAP 94847 on high-fat food-reinforced operant responding and reinstatement of food seeking in rats.Psychopharmacology (Berl). 2009 Jul;205(1):129-40.

[3]. Synthesis and SAR investigations for novel melanin-concentrating hormone 1 receptor (MCH1) antagonists part 2: A hybrid strategy combining key fragments of HTS hits.J Med Chem. 2007 Aug 9;50(16):3883-90.

[4]. Localisation of melanin-concentrating hormone receptor 1 in rat brain and evidence that sleep parameters are not altered despite high central receptor occupancy. Eur J Pharmacol. 2009 Aug 15;616(1-3):101-6.

研究背景与目的：黑色素浓缩激素1 (MCH1) 受体在啮齿动物的笼内食物摄入中发挥重要作用，但其在动物模型中高脂食物强化操作性反应或食物寻求行为恢复中的作用尚不清楚。本研究使用MCH1受体拮抗剂SNAP 94847来探讨这些问题。材料与方法：在实验1中，我们训练限制食物摄入的大鼠（每日16克营养均衡的啮齿动物饲料）按压杠杆以获取高脂（35%）颗粒饲料（每日3小时，隔日一次），共14次。然后，我们测试了SNAP 94847（3-30 mg/kg，腹腔注射）对食物强化操作性反应的影响。在实验 2 和 3 中，我们训练大鼠按压杠杆获取食物颗粒（9 至 14 次，每次 3 小时），随后通过移除食物来消除食物强化下的杠杆反应（10 至 17 次）。然后，我们测试了 SNAP 94847 对以下因素诱导的觅食行为恢复的影响：MCH（20 μg，脑室内注射）、在测试阶段第一分钟内非条件性地给予三粒食物颗粒（食物颗粒启动）、先前与食物颗粒给予相关的条件性音调-灯光提示（提示）或药理学应激剂育亨宾（2 mg/kg，腹腔注射）。[2]

C29H33CLF2N2O2

478.58

514.22

C, 72.78; H, 6.74; F, 7.94; N, 5.85; O, 6.69

487051-12-7

SNAP 94847 hydrochloride;1781934-47-1

16756754

Typically exists as solid at room temperature

8.429

45.06

1

5

7

35

661

0

CC1=C(C=C(C=C1)NC(=O)C(C)C)C2CCN(CC2)CC3=CC=C(C=C3)OC4=CC(=C(C=C4)F)F

VMLZFUVIKCGATC-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C29H32F2N2O2/c1-19(2)29(34)32-23-7-4-20(3)26(16-23)22-12-14-33(15-13-22)18-21-5-8-24(9-6-21)35-25-10-11-27(30)28(31)17-25/h4-11,16-17,19,22H,12-15,18H2,1-3H3,(H,32,34)

N-[3-[1-[[4-(3,4-difluorophenoxy)phenyl]methyl]piperidin-4-yl]-4-methylphenyl]-2-methylpropanamide

SNAP-94847; SNAP94847; SNAP-94847; 487051-12-7; SNAP 94847; N-(3-{1-[4-(3,4-DIFLUOROPHENOXY)BENZYL]-4-PIPERIDINYL}-4-METHYLPHENYL)-2-METHYLPROPANAMIDE; CHEMBL242004; N-(3-(1-(4-(3,4-difluorophenoxy)benzyl)piperidin-4-yl)-4-methylphenyl)isobutyramide; N-[3-[1-[[4-(3,4-difluorophenoxy)phenyl]methyl]piperidin-4-yl]-4-methylphenyl]-2-methylpropanamide; SNAP 94847

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。