Tafluprost acid   中文名称: 他氟前列素游离酸

在3T3-L1前脂肪细胞分化的早期和晚期，他氟前列素酸（10、100 nM）有效抑制脂肪生成[2]。在野生型小鼠的原代脂肪细胞中，他氟前列素酸 (100 nM) 会减少脂肪生成，但在 FP 敲除小鼠的原代脂肪细胞中则不然[2]。当暴露于他氟前列素酸 (10-4 M) 六小时时，人脐血管内皮细胞 (HUVEC) 会被刺激增殖和迁移 [4]。刺激 HUVEC 管形成（-4 M，4–18 小时）[4]。

在滴注后4-8小时，Taf/T-FDC的眼压降低效果几乎与Lat/T-FDC相当。Taf/T-FDC和Lat/T-FDC在滴注后8小时观察到峰值眼压降低，两者之间没有差异。滴注后24-30小时观察到它们之间的差异，滴注后24-30h，Taf/T-FDC的降眼压效果明显优于Lat/T-FDC。Taf/T-FDC的降眼压作用在滴注后持续到30小时，而Lat/T-FDC的降眼压效果在滴注28小时后几乎消失。Taf/T-FDC滴注后房水中的噻吗洛尔浓度高于Lat/T-FDC滴注后的浓度（Cmax，3870 ng/mL vs 1330 ng/mL；AUCinf，3970 ng·h/mL vs 1250 ng·h/mL）。分别滴注Taf/T-FDC和Lat/T-FDC后，房水中塔氟前列素酸/AFP-172和拉坦前列素酸的浓度与分别滴注塔氟前列醇和拉坦前列腺素单一制剂后的浓度相似。在所有评估的时间点，Taf/T-FDC对人角膜上皮细胞的细胞毒性作用在未稀释和10倍稀释的FDC中均显著低于Lat/T-FDC[3]。

为了评估新型前列腺素（PG）F（2α）衍生物AFP-168（他氟前列素）的药理学特征，我们检测了其受体结合亲和力、降低眼压的作用、对房水动力学的影响以及对黑色素生成的刺激作用。通过测量器官浴中的肌肉收缩、血小板聚集的抑制和放射性标记配体的竞争性结合，确定了AFP-168的羧酸塔氟前列酸/AFP-172的受体结合谱。在眼压测量研究中，使用了眼部正常血压和激光诱导的眼部高血压食蟹猴，并使用气相色谱仪测量了眼压。为了研究房水动力学，在眼部血压正常的猴子身上使用了眼压（Goldmann压平眼压计）、荧光光度计、两级恒压灌注和同位素稀释和累积技术。测定培养的B16-F0黑色素瘤细胞的培养基和细胞体中的黑色素含量。Tafluprost酸/AFP-172（Ki:0.4 nm）对FP受体的亲和力是拉坦前列素羧酸PhXA85（Ki:4.7 nm）的12倍。单次应用0.0025%的AFP-168可显著降低眼压正常和高血压猴子的眼压（分别为3.1和11.8 mmHg，p<0.01），0.005%的拉坦前列素可显著降低眼内压（分别为2.1 mmHg，p<0.01和9.5 mmHg，p=0.059）。在血压正常的猴子中，每天滴注0.001、0.0025或0.005%的AFP-168 5天，不仅在几个小时内，而且在用药后24小时的药物低谷时间，眼压都显著降低。0.005%的拉坦前列素也能降低眼压，但在药物低谷时没有。AFP-168主要通过将葡萄膜巩膜流出量增加65%（p<0.05）来降低眼压，并且与其他前列腺素有时一样，还增加了总流出设施（增加33%，p<0.05）。在培养的B16-F0黑色素瘤细胞中，Tafluprost酸/AFP-172（100微M）不会刺激黑色素生成，但PhXA85（100微m）会。这些发现表明，AFP-168对前列腺素FP受体具有很高的亲和力，在眼部正常血压和高血压猴子中都具有比拉坦前列素更强的眼压降低作用，对黑色素瘤细胞中黑色素生成的刺激作用较小[1]。

处理3T3-L1前脂肪细胞以促进分化为成熟脂肪细胞。在分化的早期和晚期（第0、2和7天），将1至1000 nM的拉坦前列酸（LAT-A）、曲伏前列酸（TRA-A）、Tafluprost acid（TAF-A）、比马前列素（BIM）、比马前列素酸（BIM-A）、乌诺前列酮（UNO）或前列腺素F2a（PGF2α）应用于细胞。在第10天使用油红O染色检测细胞内脂质。将照片上测量的染色区域与对照培养物中的染色区域进行比较。所有实验均以蒙面方式进行。接下来，使用来自FP受体敲除的原代培养小鼠脂肪细胞和野生型小鼠进行了类似的实验。 结果：当在第0天或第2天添加PG时，LAT-A、TAF-A、BIM-A和PGF2α在10 nM和100 nM的浓度下显著抑制脂肪生成（第0天P<0.01，第2天P<0.05），TRA-A仅在100 nM时抑制脂肪生成。比马前列素和UNO在任何浓度下都不影响脂肪生成。当在第7天添加PG时，100 nM LAT-A、BIM-A或PGF2α显著抑制了脂肪生成（P<0.05）。在小鼠原代脂肪细胞培养中，LAT-A、TAF-A、BIM-A、TRA-A和PGF2α显著抑制了野生型脂肪细胞的脂肪生成（P<0.05），但FP敲除小鼠脂肪细胞中的任何PG化合物都没有抑制脂肪生成。 结论：前列腺素类似物具有通过FP受体刺激抑制脂肪生成的潜力。尽管这些发现应在与眼眶脂肪更密切相关的模型系统中进一步分析，但PG类似物可能通过抑制脂肪生成直接导致眼眶脂肪减少[2]。

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在存在或不存在FP受体拮抗剂（10 nM AL-8810）的情况下培养的HUVEC暴露于浓度逐渐升高的10（-7）、10（-6）、10。对于细胞增殖测定，细胞数量由微孔板阅读器的CellTiter96®水性单溶液细胞增殖测定得出。使用FluoroBlok™24孔插入物通过BD Biocoat™血管生成系统评估内皮细胞迁移。BioTek FLx800荧光平板阅读器用于定量测量荧光标记的侵袭性血管内皮细胞。使用Matrigel Matrix 96孔板，通过BD生物涂层血管生成系统评估内皮毛细血管样管的形成。实时定量逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）用于评估血管内皮生长因子（VEGF）、环氧化酶-2（COX-2）和内皮一氧化氮合酶（eNOS）的基因表达。通过免疫荧光染色和Western blot检测COX-2蛋白。学生t检验用于统计分析。[4]

在研究 A 中，分别于滴眼后 4 小时和 8 小时评估了 Taf/T-FDC 和 Lat/T-FDC 对眼压正常猴子的降眼压效果；在研究 B 中，分别于滴眼后 12 小时、14 小时、16 小时和 18 小时评估了 Taf/T-FDC 和 Lat/T-FDC 对眼压正常猴子的降眼压效果；在研究 C 中，分别于滴眼后 24 小时、26 小时、28 小时和 30 小时评估了 Taf/T-FDC 和 Lat/T-FDC 对眼压正常猴子的降眼压效果。在 Sprague Dawley 大鼠单次滴注 Taf/T-FDC 或 Lat/T-FDC 后，采用液相色谱-串联质谱法测定了噻吗洛尔、他氟前列素酸/AFP-172（他氟前列素的活性代谢形式）和拉坦前列素酸（拉坦前列素的活性代谢形式）的浓度，以评估药物向眼内的渗透情况。采用 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑法分析了 SV40 转化的角膜上皮细胞暴露于 Taf/T-FDC 或 Lat/T-FDC 1-30 分钟后的细胞毒性。评估了每种 FDC 的未稀释溶液和 10 倍稀释溶液[3]。

滴注 Taf/T-FDC 和他氟前列素单方制剂后，他氟前列素酸浓度表现出相似的曲线，在 0.25–0.5 小时达到 Cmax，并以 0.43–0.45 小时的半衰期下降。滴注 Lat/T-FDC 和拉坦前列素单方制剂后，拉坦前列素酸浓度也表现出相似的曲线，在 0.5 小时达到 Cmax，并以 0.35–0.40 小时的半衰期下降。[3]

[1]. Pharmacological characteristics of AFP-168 (tafluprost), a new prostanoid FP receptor agonist, as an ocular hypotensive drug. Exp Eye Res. 2004 Apr;78(4):767-76.

[2]. Activation of the prostanoid FP receptor inhibits adipogenesis leading to deepening of the upper eyelid sulcus in prostaglandin-associated periorbitopathy. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2014 Mar 4;55(3):1269-76.

[3]. Advantages of Efficacy and Safety of Fixed-Dose Tafluprost/Timolol Combination Over Fixed-Dose Latanoprost/Timolol Combination. PLoS One. 2016 Jul 6;11(7):e0158797.

[4]. Effects of AFP-172 on COX-2-induced angiogenic activities on human umbilical vein endothelial cells. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 2012 Dec;250(12):1765-75.

环氧合酶 (COX) 是花生四烯酸转化为前列腺素的关键酶。COX 有两种同工酶，即 COX-1 和 COX-2。COX-1 是一种管家基因，在大多数组织中表达；而 COX-2 是一种可诱导的中间早期基因，在炎症细胞中被诱导表达，其作用与血管生成和肿瘤发生有关。在本研究中，10⁻⁴ M 的 他氟前列素酸/AFP-172 仅刺激了三种基因中 COX-2 的表达。在预先用 FP 受体拮抗剂处理的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) 中，他氟前列素酸/AFP-172 诱导的 COX-2 蛋白表达被阻断。这些结果表明，Tafluprost acid/AFP-172通过FP受体诱导HUVECs中的COX-2表达，类似于PGF2α在子宫内膜腺癌中的作用。尽管COX-2促进血管生成已广为人知，但COX-2介导的血管生成如何参与血管生成过程仍不清楚。与COX-1抑制剂不同，COX-2抑制剂被认为是一种潜在的抑制血管生成和癌变的治疗药物。在本研究中，COX-2抑制剂通过降低HUVECs的增殖、迁移和管状结构形成能力，消除了Tafluprost acid/AFP-172的促血管生成作用。这些结果表明，Tafluprost acid/AFP-172通过与COX-2信号转导通路相互作用促进HUVECs的血管生成。COX-2和VEGF似乎通过相互依赖的双重基因表达通路参与血管生成。尽管已知COX-2可通过与VEGF系统相互作用来调节血管生成，但我们使用RT-PCR检测发现，AFP-172处理组与对照组相比，VEGF-A的表达并无差异（图5）。由此可见，他氟前列素酸/AFP-172的促血管生成作用与VEGF-A和eNOS无关。在眼部血管生成过程中，缺氧可通过与VEGF、COX-2和NOS系统相互作用来刺激血管生成。由此我们可以推断，他氟前列素酸/AFP-172的促血管生成机制并非依赖于缺氧诱导的眼部血管生成，而是依赖于COX-2介导的、通过FP受体的前列腺素生物合成。在实际临床应用中，10⁻⁴ M远高于他氟前列素酸/AFP-172的治疗浓度。此外，经角膜渗透至玻璃体的眼药水量约为到达玻璃体剂量的1/104。由于1滴0.0015%的tafluprost眼药水含有约2.5 μg tafluprost，因此玻璃体中可能存在250 pg的tafluprost。考虑到tafluprost的分子量为452.5，预计单次临床剂量滴眼后，0.6 × 10⁻¹² M的tafluprost酸/AFP-172可到达玻璃体腔。基于我们观察到的浓度为 10⁻⁴ M 的 他氟前列素酸/AFP-172 能够刺激 HUVEC 细胞的血管生成，我们推测，治疗剂量的他氟前列素可能无法刺激伴有前段和后段病理性血管生成疾病（如新生血管性青光眼、角膜炎性疾病、年龄相关性黄斑变性 (AMD) 和糖尿病视网膜病变）的青光眼患者的血管生成。然而，在某些方面，我们的体外实验结果并不能直接应用于治疗尤其是后段血管生成疾病（如 AMD 和糖尿病视网膜病变）的患者。首先，除了眼内皮细胞外，眼部血管生成还与其他眼部组织（如视网膜色素上皮和脉络膜）相关。其次，尽管已有研究利用 HUVEC 细胞探讨了眼部病理生理学和发病机制，但 HUVEC 细胞与眼内皮细胞之间的相似性尚不明确。然而，由于浓度为 10⁻⁴ M 的 Tafluprost acid/AFP-172 仍然比他氟前列素的药用浓度高约一万倍（考虑到他氟前列素滴眼液的治疗浓度为 0.6 × 10⁻⁸ M），因此他氟前列素似乎不会刺激前节血管生成过程，例如新生血管性青光眼、角膜感染和角膜移植术。我们的结果与拉坦前列素在大鼠角膜模型中的血管生成作用截然不同。这可能是由于所用药物化合物和实验模型不同所致。Tafluprost acid/AFP-172 是他氟前列素的活性羧酸形式，与拉坦前列素的不同之处在于，他氟前列素在 15 位碳原子上有两个氟原子，而不是一个羟基。我们的体外实验结果可能与动物实验（例如用于拉坦前列素研究的大鼠角膜血管生成实验）中获得的体内实验结果有所不同。总之，我们证明了他氟前列素酸/AFP-172通过诱导HUVECs细胞上COX-2蛋白的表达而发挥血管生成作用。对于临床应用，特别是对于伴有眼部新生血管疾病的青光眼患者，需要开展更多实验，包括体内研究，以深入探究他氟前列素的血管生成机制。

C22H28F2O5

410.46

410.19

C, 64.38; H, 6.88; F, 9.26; O, 19.49

209860-88-8

9978917

Colorless to light yellow ointment

1.3±0.1 g/cm3

575.9±50.0 °C at 760 mmHg

302.1±30.1 °C

0.0±1.7 mmHg at 25°C

1.579

2.8

86.99

3

7

11

29

557

4

C(=C/C[C@@H]1[C@@H](/C=C/C(COC2=CC=CC=C2)(F)F)[C@@H](C[C@@H]1O)O)/CCCC(=O)O

KIQXRQVVYTYYAZ-VKVYFNERSA-N

InChI=1S/C22H28F2O5/c23-22(24,15-29-16-8-4-3-5-9-16)13-12-18-17(19(25)14-20(18)26)10-6-1-2-7-11-21(27)28/h1,3-6,8-9,12-13,17-20,25-26H,2,7,10-11,14-15H2,(H,27,28)/b6-1-,13-12+/t17-,18-,19+,20-/m1/s1

(Z)-7-[(1R,2R,3R,5S)-2-[(E)-3,3-difluoro-4-phenoxybut-1-enyl]-3,5-dihydroxycyclopentyl]hept-5-enoic acid

UNII-WTV8EPZ396; Tafluprost acid; 209860-88-8; AFP-172; Tafluprost (free acid); WTV8EPZ396; UNII-WTV8EPZ396; 5-Heptenoic acid, 7-[(1R,2R,3R,5S)-2-[(1E)-3,3-difluoro-4-phenoxy-1-buten-1-yl]-3,5-dihydroxycyclopentyl]-, (5Z)-; 5-Heptenoic acid, 7-((1R,2R,3R,5S)-2-((1E)-3,3-difluoro-4-phenoxy-1-buten-1-yl)-3,5-dihydroxycyclopentyl)-, (5Z)-;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~243.64 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。