P-gp (Kd = 5.1 nM)[1]

Tariquidar 甲磺酸盐，水合物（XR9576 甲磺酸盐，水合物）可将 CHrB30 细胞中这些细胞毒素的稳态积累提高至非 P-gp 表达 AuxB1 细胞中观察到的水平 (EC50=487±50 nM)，使其成为一种有效的调节剂P-gp 介导[3H]-长春花碱和[3H]-紫杉醇转运。 [3H]-Tariquidar 对 CHrB30 膜具有最强的亲和力（Kd=5.1±0.9 nM，n=7），最大结合容量（Bmax）为 275±15 pmol/mg 膜蛋白。与祖先细胞系不同，调节剂 XR9576 (EC50=487±50 nM) 以剂量依赖性方式增加 [3H]-Vinblastine 的积累。 MDR 调节剂 Tariquidar 的 IC50 值为 43±9 nM，可抑制钒酸盐敏感性 ATP 酶 60-70% 的活性[1]。 Tariquidar (XR9576) 增强多种药物的细胞毒性，包括长春新碱、依托泊苷、紫杉醇和阿霉素；在 25-80 nM Tariquidar 存在的情况下，耐药性完全逆转。 [3H]叠氮平对 P-gp 的强光亲和标记被 tariquidar 抑制，表明与蛋白质有直接相互作用[2]。

此外，Tariquidar（6-12 mg/kg po）联合给药可完全恢复紫杉醇、依托泊苷和长春新碱对裸鼠体内两种高度耐药的 MDR 人类肿瘤异种移植物（2780AD、H69/LX4）的抗肿瘤活性。这些小鼠患有本质上耐药的 MC26 结肠肿瘤，同时服用 Tariquidar 甲磺酸盐水合物（XR9576 甲磺酸盐水合物）可增强多柔比星的抗肿瘤活性，而不会显着增加毒性。研究还发现，tariquidar 可显着提高阿霉素在体内对 sc MC26 肿瘤的抗肿瘤活性[2]。

P-gp在CHrB30膜中的ATP水解活性[1]
先前描述的比色测定法用于测量ATP水解后无机磷酸盐的释放（Chifflet等人，1988）。膜（1 μg蛋白）与Na2ATP（2 mm），总测定体积为50 μl缓冲液，含（mm）：Tris pH 7.4 50，MgSO4 5，0.02%NaN3，NH4Cl 150用于20 最低37°C。ATP酶活性与40呈线性关系 最低37°C。调节剂（来自二甲基亚砜库存）和ATP酶抑制剂钒酸盐的添加浓度范围为10−9–10–5 m.最终DMSO浓度总是<1%，已知该水平不会改变ATP酶活性。药物对ATP酶活性的影响符合一般的剂量-反应关系（见上文）

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特异性药物与P-糖蛋白结合[1]
如前所述，使用快速过滤测定法测量[3H]-长春碱、[3H]-紫杉醇和[3H]-XR9576与CHrB30膜中P-gp的结合（Ferry等人，1992）。将膜与适当的放射性配体在总缓冲液体积为200的条件下孵育 μl（50 mm Tris pH 7.4），为期2-3年 h以达到平衡。洗涤缓冲液（3 ml）含有20 mm MgSO4，20 mm Tris（pH 7.4），并且样品在真空下通过过滤歧管中的单个GF/F过滤器过滤以分离结合的和游离的配体。进一步洗涤后（2×3 ml）通过液体闪烁计数测定结合配体的量。非特异性结合被定义为在存在至少100倍过量的竞争配体的情况下结合的[3H]-配体的量（如结果所示），并从所有值中减去。
[3H]-配体结合的容量和亲和力的测定是通过饱和等温线分析实现的。将膜与增加浓度的标记药物和结合量（pmol mg−1）绘制为自由配体浓度的函数。

细胞培养[1]
中国仓鼠卵巢亲代（敏感）AuxB1和抗性CHrB30细胞如前所述在含有10%胎牛血清的α-最低必需培养基（α-MEM）中生长（Kartner等人，1983）。通过在秋水仙碱中逐步选择衍生自AuxB1细胞的CHrB30细胞（Kartner等人，1983）表达P-gp，并且通过在培养基中补充30 μg ml−1秋水仙碱

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质膜制备[1]
如前所述（Lever，1977），在使用氮空化和蔗糖密度离心收集破坏CHrB30细胞后制备质膜。最终的膜制剂储存在−70°C，蛋白质浓度为5-10 毫克 ml–1在含有0.25的缓冲液中 m蔗糖，10 mm Tris HCI（pH 7.5），并且包括蛋白酶抑制剂亮蛋白肽（0.1 毫克 ml−1），pepstatin A（0.1 毫克 ml−1）和苯甲脒（1 mm）

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稳态药物积累试验[1]
AuxB1和CHrB30细胞在12孔（24 mm）组织培养皿，并且如前所述测量[3H]-长春碱的稳态积累（Martin等人，1997）。通过添加0.1开始积累 μCi[3H]-长春碱和未标记的长春碱，最终浓度为100 nm。[3H]-紫杉醇的积累用0.1 μCi[3H]-紫杉醇和未标记药物，最终浓度为1 μm。将细胞在反应体积为1 60毫升 在37°C、5%CO2的条件下，以达到稳态。在10−9–10−6的浓度范围内，研究了调节剂XR9576和GF120918对[3H]-配体积累的影响 m.从DMSO原料中加入调节剂，得到0.2%（v v−1）的最终溶剂浓度。细胞采集后，通过液体闪烁计数测量积聚的药物，并对细胞蛋白质含量进行归一化。累积量作为调节剂浓度的函数的图符合一般的剂量反应方程（De Lean等人，1978）
使用几种浓度的放射性标记药物（1-300 nm）在1的存在和不存在下 μm GF120918，并在60 min周期，如上所述。

[1]. The molecular interaction of the high affinity reversal agent XR9576 with P-glycoprotein. Br J Pharmacol, 1999, 128(2), 403-411.

[2]. In vitro and in vivo reversal of P-glycoprotein-mediated multidrug resistance by a novel potent modulator, XR9576. Cancer Res, 2001, 61(2), 749-758.

[3]. A new method measuring the interaction of radiotracers with the human P-glycoprotein (P-gp) transporter. Nucl Med Biol. 2018 Feb 14;60:29-36.

1. 利用平衡结合的动力学和性质，表征了邻氨基苯甲酸衍生物[3H]-XR9576与多药耐药P-糖蛋白（P-gp）的分子相互作用。XR9576对P-gp表现出特异性高亲和力结合（Bmax = 275 pmol mg-1，Kd = 5.1 nM）。转运底物[3H]-长春碱和[3H]-紫杉醇对P-gp的亲和力分别比XR9576低4倍和20倍。与长春碱相比，XR9576与P-gp的作用持续时间更长，而长春碱的结合速率较慢，解离速率较快。2. 通过置换药物平衡结合实验，测定了几种调节剂和转运底物与P-gp相互作用的相对亲和力。长春碱和紫杉醇只能部分置换[3H]-XR9576的结合，其Ki值与测得的Kd值存在显著差异。这表明XR9576与P-gp底物长春碱和紫杉醇之间存在非竞争性相互作用。XR9576被证实是P-gp介导的[3H]-长春碱和[3H]-紫杉醇转运的强效调节剂，因为它能将这些细胞毒性药物在CHrB30细胞中的稳态积累增加到在不表达P-gp的AuxB1细胞中观察到的水平（EC50 = 487±50 nM）。这种药物转运抑制并非通过竞争性转运介导，因为[3H]-XR9576的积累不受P-gp表达或功能的影响。 4 这些结果表明，P-gp调节剂XR9576比任何其他已报道的调节剂都具有更高的选择性、更持久的抑制作用以及与该转运蛋白更强的相互作用效力。多项证据表明，XR9576通过结合于一个不同于转运底物相互作用位点的位点来抑制P-gp功能。这两个位点可能分别具有调节功能或转运功能。[1]

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肿瘤细胞表面P-糖蛋白（P-gp）的过度表达会导致多药耐药性（MDR）。该蛋白作为一种能量依赖性药物外排泵，可降低结构不相关药物的细胞内浓度。P-gp功能调节剂可以恢复MDR细胞对这类药物的敏感性。XR9576是一种新型邻氨基苯甲酸衍生物，被开发为一种高效且特异性的P-gp抑制剂。在本研究中，我们评估了该化合物的体外和体内调节活性。使用一系列人源（H69/LX4、2780AD）和鼠源（EMT6 AR1.0、MC26）多药耐药（MDR）细胞系评估了XR9576的体外活性。XR9576增强了多种药物的细胞毒性，包括阿霉素、紫杉醇、依托泊苷和长春新碱；在25-80 nM XR9576存在下，可完全逆转耐药性。与其他调节剂的直接比较研究表明，XR9576是迄今为止报道的最有效的调节剂之一。使用P-gp底物[3H]柔红霉素和罗丹明123进行的蓄积和外排研究表明，XR9576抑制了P-gp介导的药物外排。 P-gp功能的抑制是可逆的，但从培养基中去除调节剂后，这种抑制作用持续超过22小时。这与环孢素A和维拉帕米等P-gp底物形成鲜明对比，后者在60分钟内即失去活性，表明XR9576并非通过P-gp转运。此外，XR9576是[3H]叠氮平对P-gp光亲和标记的强效抑制剂，暗示其与该蛋白存在直接相互作用。在携带固有耐药MC26结肠肿瘤的小鼠中，XR9576与阿霉素联合给药可增强阿霉素的抗肿瘤活性，且未显著增加毒性。在静脉或口服给药剂量为 2.5-4.0 mg/kg 时观察到最大增效作用。此外，在裸鼠体内，与 XR9576（6-12 mg/kg，口服）联合给药可完全恢复紫杉醇、依托泊苷和长春新碱对两种高度耐药的 MDR 人肿瘤异种移植模型（2780AD 和 H69/LX4）的抗肿瘤活性。重要的是，所有有效的联合用药方案均具有良好的耐受性。此外，静脉联合给药 XR9576 并未改变紫杉醇的血浆药代动力学。这些结果表明，XR9576 是一种高效、选择性强且作用持久的调节剂。它具有强大的静脉和口服活性，且不会明显增强紫杉醇的血浆药代动力学或增加联合用药的毒性。因此，XR9576 在治疗 P-gp 介导的多药耐药 (MDR) 癌症方面具有巨大潜力。[2]

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在药物研发中，用于脑部应用的生物标志物的成功率低于心血管药物或肿瘤治疗药物。原因之一是示踪剂无法穿透血脑屏障，这是由于示踪剂与 P-gp（MDR1 或 ABCB1）等外排转运蛋白相互作用所致。本研究旨在开发一种可靠的模型，用于在放射性标记过程中平行测量放射性示踪剂与人外排转运蛋白 P-gp 的相互作用。本研究采用 LigandTracer® 技术，使用野生型细胞系 MDCKII 和过表达人 P-gp 的等效细胞系 (MDCKII-hMDR1)。该方法基于已知的与人 P-gp 转运蛋白相互作用的 PET 示踪剂，并在纳摩尔浓度 (15 nM) 下进行评估。 [11C]SNAP-7941 和 [18F]FE@SNAP 被用作 P-gp 底物，并通过实时模型与摄取实验和 μPET 图像进行比较。[11C]DASB、[11C]Harmine、[18F]FMeNER、[18F]FE@SUPPY 和 [11C]Me@HAPTHI 被用作示踪剂，在体外未观察到与 P-gp 的相互作用。然而，[11C]Me@HAPTHI 在被 Tariquidar 阻断后，SUV 值显著升高。所建立的实时动力学模型直接使用化合物浓度的 PET 示踪剂，反映了体内情况。该方法可用于放射性药物开发的早期阶段，在进行动物实验之前测量其与 P-gp 的相互作用。[3]

C40H52N4O12S2

892.99

892.287

625375-83-9

Tariquidar;206873-63-4; 625375-84-0 (mesylate);1992047-62-7 (2HCl); 625375-83-9 (methanesulfonate hydrate)

71576652

Light yellow to yellow solid

7.746

267.93

7

17

11

61

1130

0

S(C([H])([H])[H])(=O)(=O)O[H].S(C([H])([H])[H])(=O)(=O)O[H].O(C([H])([H])[H])C1=C(C([H])=C2C(=C1[H])C([H])([H])N(C([H])([H])C([H])([H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])N([H])C(C1=C([H])C(=C(C([H])=C1N([H])C(C1C([H])=NC3=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C3C=1[H])=O)OC([H])([H])[H])OC([H])([H])[H])=O)C([H])([H])C2([H])[H])OC([H])([H])[H].O([H])[H].O([H])[H].O([H])[H]

MNKRYFJEUQPYTI-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C38H38N4O6.2CH4O3S.3H2O/c1-45-33-18-25-14-16-42(23-28(25)19-34(33)46-2)15-13-24-9-11-29(12-10-24)40-38(44)30-20-35(47-3)36(48-4)21-32(30)41-37(43)27-17-26-7-5-6-8-31(26)39-22-27;2*1-5(2,3)4;;;/h5-12,17-22H,13-16,23H2,1-4H3,(H,40,44)(H,41,43);2*1H3,(H,2,3,4);3*1H2

N-[2-[[4-[2-(6,7-dimethoxy-3,4-dihydro-1H-isoquinolin-2-yl)ethyl]phenyl]carbamoyl]-4,5-dimethoxyphenyl]quinoline-3-carboxamide;methanesulfonic acid;trihydrate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。