P-gp (Kd = 5.1 nM)[1]
P-glycoprotein (P-gp)

甲磺酸他利喹达水合物（甲磺酸XR9576水合物）可使CHrB30细胞中这些细胞毒性药物的稳态积累水平升高至与不表达P-gp的AuxB1细胞相当的水平（EC50=487±50 nM），使其成为P-gp介导的[3H]-长春碱和[3H]-紫杉醇转运的强效调节剂。[3H]-他利喹达对CHrB30细胞膜具有最强的亲和力（Kd=5.1±0.9 nM，n=7）和最大结合容量（Bmax）为275±15 pmol/mg膜蛋白。与祖先细胞系不同，调节剂XR9576（EC50=487±50 nM）以剂量依赖的方式增加[3H]-长春碱的积累。多药耐药性调节剂他利喹达（Tariquidar）具有很强的IC50值（43±9 nM），可抑制60-70%的钒酸盐敏感ATPase活性[1]。他利喹达（XR9576）可增强多种药物的细胞毒性，包括长春新碱、依托泊苷、紫杉醇和阿霉素；在25-80 nM他利喹达存在下，耐药性可完全逆转。他利喹达可抑制[3H]叠氮平对P-gp的强光亲和标记，表明其与该蛋白存在直接相互作用[2]。他利喹达是一种强效且特异性的P-糖蛋白（P-gp）抑制剂，P-gp是一种170 kDa的跨膜蛋白，具有药物外排泵的功能。他利喹达非竞争性地抑制与P-gp相关的ATPase的基础活性。他利喹达是一种强效且选择性的非竞争性 P-糖蛋白抑制剂，其 Kd 值为 5.1 nM。通过抑制 P-gp，他利喹达可增加 P-gp 底物化疗药物在细胞内的积累，从而克服癌细胞的多药耐药性。

此外，在裸鼠体内，与紫杉醇、依托泊苷和长春新碱联合给药（6-12 mg/kg，口服）可完全恢复紫杉醇、依托泊苷和长春新碱对两种高度耐药的MDR人肿瘤异种移植模型（2780AD和H69/LX4）的抗肿瘤活性。这些小鼠携带固有耐药的MC26结肠肿瘤，而与多柔比星甲磺酸盐水合物（XR9576甲磺酸盐水合物）联合给药可增强多柔比星的抗肿瘤活性，且毒性未显著增加。研究还发现，他利喹达可显著增强多柔比星对皮下MC26肿瘤的体内抗肿瘤活性[2]。

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他利喹达与化疗药物联合使用，以克服癌细胞中P-gp介导的多药耐药性。他利喹达通过抑制P-gp外排，提高细胞内P-gp底物药物的浓度，从而增强其抗肿瘤疗效。该化合物对P-gp的高效性和选择性使其成为研究药物转运和耐药机制的宝贵工具。

CHrB30 膜中 P-gp 的 ATP 水解活性[1]
采用先前描述的比色法测定 ATP 水解后无机磷酸盐的释放量（Chifflet 等，1988）。将膜蛋白（1 μg）与 Na2ATP（2 mM）在 50 μl 的反应体系中于 37°C 下孵育 20 分钟，反应体系包含以下缓冲液（mM）：Tris pH 7.4 50、MgSO4 5、0.02% NaN3、NH4Cl 150。在 37°C 下，ATPase 活性在 40 分钟内呈线性关系。加入浓度范围为 10⁻⁹ 至 10⁻⁵ mM 的调节剂（来自 DMSO 储备液）和 ATPase 抑制剂钒酸盐。最终 DMSO 浓度始终低于 1%，已知该浓度不会影响 ATPase 活性。药物对ATPase活性的影响符合一般的剂量-反应关系（见上文）。

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药物与P-糖蛋白的特异性结合[1]
采用快速过滤法测定[3H]-长春碱、[3H]-紫杉醇和[3H]-XR9576与CHrB30细胞膜上P-gp的结合情况，方法如前所述（Ferry等，1992）。将细胞膜与适当的放射性配体在总体积为200 μl的缓冲液（50 mM Tris pH 7.4）中孵育2-3小时以达到平衡。然后加入含有20 mM MgSO4和20 mM Tris（pH 7.4）的洗涤缓冲液（3 ml），并将样品在真空下通过过滤歧管中的单个GF/F滤膜过滤，以分离结合的和游离的配体。进一步洗涤（2×3 ml）后，采用液体闪烁计数法测定结合配体的量。非特异性结合定义为在至少100倍过量竞争性配体（结果部分已注明）存在下结合的[3H]-配体的量，并从所有数值中扣除。
通过饱和等温线分析测定[3H]-配体的结合容量和亲和力。将膜与递增浓度的标记药物孵育，并将结合量（pmol mg−1）绘制为游离配体浓度的函数。

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使用荧光或放射性标记的P-gp底物进行转运试验来测定P-糖蛋白活性。通过测量表达P-gp的细胞中P-gp底物积累的增加来评估他利喹达对P-gp的抑制作用。测量与P-gp相关的ATPase活性以评估非竞争性抑制。结合亲和力是通过放射性配体结合试验来计算 Kd 值来确定的。

细胞培养[1]
中国仓鼠卵巢亲代（敏感）细胞AuxB1和耐药细胞CHrB30按照先前描述的方法在含10%胎牛血清的α-最小必需培养基（α-MEM）中培养（Kartner等，1983）。CHrB30细胞由AuxB1细胞经秋水仙碱逐步筛选获得（Kartner等，1983），表达P-gp，通过在培养基中添加30 μg ml−1秋水仙碱来维持选择压力。

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质膜制备[1]
CHrB30细胞经氮气空化破碎后，采用蔗糖密度梯度离心法收集，制备质膜，方法如前所述（Lever，1977）。最终的膜制备物储存在−70°C，蛋白质浓度为5–10 mg ml⁻¹，缓冲液包含0.25 M蔗糖、10 mM Tris-HCl（pH 7.5），并添加了蛋白酶抑制剂亮抑蛋白酶肽（0.1 mg ml⁻¹）、胃蛋白酶抑制剂A（0.1 mg ml⁻¹）和苯甲脒（1 mM）。稳态药物积累测定[1]将AuxB1和CHrB30细胞培养至汇合，并在12孔（24 mm）组织培养板中培养，然后按照先前描述的方法（Martin等人，1997）测定[³H]-长春碱的稳态积累。通过加入0.1 μCi [³H]-长春碱和未标记的长春碱，使其最终浓度达到100 nM来启动积累。使用 0.1 μCi [3H]-紫杉醇和未标记药物，使最终浓度达到 1 μM，测定 [3H]-紫杉醇的积累。将细胞在 1 ml 的反应体积中，于 37°C、5% CO2 条件下孵育 60 分钟，以达到稳态。研究了调节剂 XR9576 和 GF120918 在 10⁻⁹ 至 10⁻⁶ M 浓度范围内对 [3H]-配体积累的影响。调节剂由 DMSO 储备液配制，最终溶剂浓度为 0.2% (v/v)。收集细胞后，通过液体闪烁计数法测定药物积累量，并根据细胞蛋白含量进行标准化。将累积量与调节剂浓度作图，并用通用剂量反应方程进行拟合（De Lean 等，1978）。
如上所述，在 AuxB1 和 CHrB30 细胞中，使用不同浓度的放射性标记药物（1–300 nM）在有或无 1 μM GF120918 的情况下，测量了 [3H]-XR9576 的累积量，并持续观察 60 分钟。

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通过测量在 tariquidar 存在下 P-gp 底物的累积量，评估 P-gp 过表达癌细胞系中的细胞效力。用不同浓度的 tariquidar 处理细胞，并通过荧光或放射性标记计数测量细胞内底物的累积量。通过测量 P-gp 底物化疗药物的增强细胞毒性来评估该化合物逆转多药耐药性的能力。

溶于 5% (w/v) D-(1)-葡萄糖（右旋糖）溶液；8 mg/kg；Tariquidar（口服）与阿霉素（5 mg/kg，静脉注射）联合给药
小鼠结肠癌异种移植模型 MC26

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在小鼠多药耐药癌症异种移植模型中，对 Tariquidar 与化疗药物联合用药进行体内评估。Tariquidar 通过适当途径以不同剂量给药，随后给予 P-gp 底物化疗药物。评估肿瘤生长抑制情况和肿瘤组织中的药物蓄积情况，以评价多药耐药性的逆转。

已有来自临床前和临床研究的他利喹达甲磺酸盐水合物的药代动力学数据。该化合物展现出良好的药代动力学特性，适用于与化疗药物联合治疗。详细的药代动力学参数，例如半衰期、清除率和生物利用度，均可获得。

塔利奎达已在临床试验中评估其逆转癌症患者多药耐药性的疗效。该化合物在研究剂量下通常耐受性良好。临床开发项目已提供全面的毒理学数据。

[1]. The molecular interaction of the high affinity reversal agent XR9576 with P-glycoprotein. Br J Pharmacol, 1999, 128(2), 403-411.

[2]. In vitro and in vivo reversal of P-glycoprotein-mediated multidrug resistance by a novel potent modulator, XR9576. Cancer Res, 2001, 61(2), 749-758.

[3]. A new method measuring the interaction of radiotracers with the human P-glycoprotein (P-gp) transporter. Nucl Med Biol. 2018 Feb 14;60:29-36.

1. 利用平衡结合动力学和性质分析，表征了邻氨基苯甲酸衍生物[3H]-XR9576与多药耐药P-糖蛋白(P-gp)的分子相互作用。XR9576对P-gp表现出特异性高亲和力结合(Bmax = 275 pmol mg⁻¹, Kd = 5.1 nM)。转运底物[3H]-长春碱和[3H]-紫杉醇对P-gp的亲和力分别比XR9576低4倍和20倍。与长春碱相比，XR9576与P-gp的相互作用持续时间更长，而长春碱的结合速率更慢，解离速率更快。2. 利用药物置换平衡结合实验，测定了几种调节剂和转运底物与P-gp相互作用的相对亲和力。长春新碱和紫杉醇只能部分置换[3H]-XR9576的结合，其Ki值与测得的Kd值存在显著差异。这表明XR9576与P-gp底物长春新碱和紫杉醇之间存在非竞争性相互作用。XR9576被证实是P-gp介导的[3H]-长春新碱和[3H]-紫杉醇转运的强效调节剂，因为它能将这些细胞毒性药物在CHrB30细胞中的稳态积累增加到与不表达P-gp的AuxB1细胞中观察到的水平（EC50 = 487 ± 50 nM）。这种药物转运抑制并非通过竞争性转运介导，因为[3H]-XR9576的积累不受P-gp表达或功能的影响。这些结果表明，P-gp调节剂XR9576比其他已报道的调节剂具有更高的选择性、更持久的抑制活性以及更强的与该转运蛋白的相互作用能力。多项证据表明，XR9576通过与转运底物相互作用位点不同的位点结合来抑制P-gp功能。这两个位点可能分别具有调节或转运功能。[1]

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肿瘤细胞表面P-糖蛋白（P-gp）的过度表达会导致多药耐药性（MDR）。该蛋白作为一种能量依赖性药物外排泵，可降低结构不相关药物的细胞内浓度。P-gp功能调节剂可以恢复MDR细胞对这些药物的敏感性。XR9576是一种新型邻氨基苯甲酸衍生物，已被开发为一种高效且特异性的P-gp抑制剂。在本研究中，我们评估了该化合物的体外和体内调节活性。使用一系列人源（H69/LX4、2780AD）和鼠源（EMT6 AR1.0、MC26）多药耐药（MDR）细胞系评估了XR9576的体外活性。XR9576增强了多种药物的细胞毒性，包括阿霉素、紫杉醇、依托泊苷和长春新碱；在25–80 nM XR9576存在下，耐药性被完全逆转。与其他调节剂的直接比较研究表明，XR9576是迄今为止报道的最有效的调节剂之一。使用P-gp底物[3H]柔红霉素和罗丹明123进行的药物积累和外排研究表明，XR9576抑制了P-gp介导的药物外排。 P-gp功能的抑制是可逆的，但这种抑制作用在从培养基中去除调节剂后仍持续超过22小时。这与环孢素A和维拉帕米等P-gp底物形成鲜明对比，后者在60分钟内即失去活性，表明XR9576并非通过P-gp转运。此外，XR9576是P-gp光亲和标记中[3H]叠氮平的强效抑制剂，提示其与该蛋白存在直接相互作用。在携带固有耐药MC26结肠肿瘤的小鼠中，XR9576与阿霉素联合给药可增强阿霉素的抗肿瘤活性，且未显著增加毒性。静脉或口服剂量为2.5–4.0 mg/kg时观察到最大协同效应。此外，在裸鼠模型中，与XR9576（6–12 mg/kg，口服）联合给药可完全恢复紫杉醇、依托泊苷和长春新碱对两种高度耐药的MDR人肿瘤异种移植模型（2780AD和H69/LX4）的抗肿瘤活性。重要的是，所有有效的联合给药方案均具有良好的耐受性。此外，静脉联合给药XR9576并未改变紫杉醇的血浆药代动力学。这些结果表明，XR9576是一种高效、选择性强且作用持久的调节剂。它具有强大的静脉和口服活性，且不会显著增强紫杉醇的血浆药代动力学或增加联合给药的毒性。因此，XR9576在治疗P-gp介导的多药耐药（MDR）癌症方面具有巨大的潜力。 [2]

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在药物研发中，脑部应用生物标志物的成功率低于心血管或肿瘤药物。原因之一是示踪剂由于与P-gp（MDR1或ABCB1）等外排转运蛋白相互作用而无法穿透血脑屏障。本研究旨在开发一种可靠的模型，用于在放射性标记过程中平行测量放射性示踪剂与人P-gp外排转运蛋白之间的相互作用。本研究采用LigandTracer®技术，使用野生型细胞系MDCKII和过表达人P-gp的等效细胞系（MDCKII-hMDR1）。该方法基于已知与人P-gp转运蛋白相互作用的PET示踪剂，并在纳摩尔浓度（15 nM）下进行评估。[11C]SNAP-7941和[18F]FE@SNAP被用作P-gp底物，并使用实时模型与摄取实验和μPET图像进行比较。 [11C]DASB、[11C]Harmine、[18F]FMeNER、[18F]FE@SUPPY 和 [11C]Me@HAPTHI 被用作示踪剂，体外实验未观察到它们与 P-gp 的相互作用。然而，[11C]Me@HAPTHI 的 SUV 值在被 Tariquidar 阻断后显著升高。所建立的实时动力学模型直接使用化合物浓度下的 PET 示踪剂，反映了体内情况。该方法可用于放射性药物开发的早期阶段，在进行动物实验之前测量其与 P-gp 的相互作用。[3]

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Yariquidar 甲磺酸盐水合物（XR9576 甲磺酸盐水合物）是一种强效且特异性的 P-糖蛋白抑制剂，用于克服癌症治疗中的多药耐药性。它以 Kd 值为 5.1 nM 的非竞争性抑制 P-gp ATPase。塔利奎达已在临床试验中评估了其与化疗药物联合治疗的疗效。该化合物的分子式为C40H52N4O15S2，分子量为893.0。

C40H52N4O12S2

892.99

892.287

625375-83-9

Tariquidar;206873-63-4; 625375-84-0 (mesylate);1992047-62-7 (2HCl); 625375-83-9 (methanesulfonate hydrate)

71576652

Light yellow to yellow solid

7.746

267.93

7

17

11

61

1130

0

S(C([H])([H])[H])(=O)(=O)O[H].S(C([H])([H])[H])(=O)(=O)O[H].O(C([H])([H])[H])C1=C(C([H])=C2C(=C1[H])C([H])([H])N(C([H])([H])C([H])([H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])N([H])C(C1=C([H])C(=C(C([H])=C1N([H])C(C1C([H])=NC3=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C3C=1[H])=O)OC([H])([H])[H])OC([H])([H])[H])=O)C([H])([H])C2([H])[H])OC([H])([H])[H].O([H])[H].O([H])[H].O([H])[H]

MNKRYFJEUQPYTI-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C38H38N4O6.2CH4O3S.3H2O/c1-45-33-18-25-14-16-42(23-28(25)19-34(33)46-2)15-13-24-9-11-29(12-10-24)40-38(44)30-20-35(47-3)36(48-4)21-32(30)41-37(43)27-17-26-7-5-6-8-31(26)39-22-27;2*1-5(2,3)4;;;/h5-12,17-22H,13-16,23H2,1-4H3,(H,40,44)(H,41,43);2*1H3,(H,2,3,4);3*1H2

N-[2-[[4-[2-(6,7-dimethoxy-3,4-dihydro-1H-isoquinolin-2-yl)ethyl]phenyl]carbamoyl]-4,5-dimethoxyphenyl]quinoline-3-carboxamide;methanesulfonic acid;trihydrate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。