| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Retinoic acid receptor-related orphan receptor γt (RORγt) [1, 2].
IC₅₀: 0.005 μM (in FRET assay) [2]; 0.02 μM (in IL-17F promoter assay) [1]. IC₅₀: 0.017 μM (in RORγt/Gal4 cell-based reporter assay) [2]. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
结果表明，TMP778 浓度超过 2.5 μM 时，开始对细胞发育产生有害影响。然而，这并不依赖于 RORγt，因为它也会降低在 Th17 细胞极化条件下培养的 RORγt 缺陷 T 细胞的增殖。此外，这些抑制剂显着抑制 IL-17 的产生，同时对 RORγt 表达、核易位或细胞增殖没有影响。 TMP778 对 RORγt 表现出更大的结合亲和力，在更宽的剂量范围内显示出减少 IL-17 产生的功效。根据这些发现，TMP778 是降低 IL-17 合成最有效的 RORγt 抑制剂 [2]。
在基于 FRET 的分子筛选实验中，TMP778 抑制 RORγt 配体结合域与 SRC1 共激活因子肽的相互作用，IC₅₀ 为 0.005 μM [2]。 在稳定表达 RORγt 的 Jurkat 细胞的 IL-17F 启动子驱动的荧光素酶报告基因实验中，TMP778 抑制转录活性，IC₅₀ 为 0.02 μM [1]。 在 HEK293 细胞的 RORγt/Gal4 细胞报告基因实验中，TMP778 抑制 RORγt 转录活性，IC₅₀ 为 0.017 μM，对 RORα (IC₅₀ = 1.24 μM) 和 RORβ (IC₅₀ = 1.39 μM) 的选择性约为 100 倍。对测试的另外 22 种核受体无活性 (IC₅₀ > 10 μM) [2]。 在原代初始 CD4⁺ T 细胞在 Th17 极化条件下培养时，TMP778 强效抑制 IL-17A 分泌，IC₅₀ 为 0.005 μM。在 Th1 或 Th2 极化条件下，不影响细胞分化，也不影响 IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10 和 IL-13 的产生 [1]。 在人原代记忆 CD4⁺ T 细胞经抗 CD3/CD28 刺激后，TMP778 抑制 IL-17A 产生，来自五次实验的平均 IC₅₀ 为 0.1 μM。无活性的非对映异构体 TMP776 无作用 [1]。 在人 PBMCs 经抗 CD3/CD28 刺激后，TMP778 (1 μM) 显著抑制 IL-17A 产生，但不影响 Th1/Th2 细胞因子。在该实验中抑制 IL-17A 的 IC₅₀ 为 0.04 μM [1]。 在人 γδ T 细胞经分化并再次用 IL-1β、IL-6 和 IL-23 刺激后，TMP778 (1 μM) 显著抑制 IL-17A 产生，但不影响 IFN-γ 或 TNF-α 的产生 [1]。 在从 IMQ 处理小鼠分离的小鼠 γδ T 细胞经 IL-1β 和 IL-23 刺激后，TMP778 (1 μM) 抑制 IL-17A 产生。TNF-α 产生也减少，而 IFN-γ 表达略有升高 [1]。 在用表达 RORγt 的慢病毒转导的初始 CD4⁺ T 细胞中，TMP778 (0.1 μM) 抑制产生 IL-17A 和 IL-17F 的 Th17 细胞和 Tc17 细胞的生成 [1]。 在已建立的 Th17 细胞（来自 RORγt 转导的初始 CD4⁺ T 细胞）中，TMP778 在再次刺激时以剂量依赖性方式抑制急性 IL-17A 分泌，IC₅₀ 为 0.03 μM [1]。 在已建立的 Tc17 细胞中，TMP778 抑制急性 IL-17A 分泌，IC₅₀ 为 0.005 μM [1]。 在用于最大抑制 IL-17 且无毒性的浓度 2.5 μM 下，TMP778 不影响细胞增殖、RORγt 表达或核转位，但有效抑制 IL-17 产生 [2]。 在 45 种激酶、GPCR、转运蛋白和离子通道的检测中，TMP778 对所有靶点的选择性 > 1000 倍 [1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
与给予对照组的小鼠相比，所有三种药物（例如TMP778）都显着降低了疾病发展的严重程度并延迟了疾病的开始。根据体外研究结果，TMP778疗法对疾病表型的影响最大。除了减少侵入系统的单核细胞数量外，这种治疗还显着降低了中枢神经系统 (CNS) 中 IL-17+ T 细胞（包括 IL-17+ IFNγ+）的百分比。没有任何组的 CNS IFNγ+ IL-17-T 细胞百分比发生显着变化，这表明没有抑制剂对 Th1 反应有影响。 TMP778 显着减缓 EAE 的发展，并显着抑制分化的 Th17 细胞产生 IL-17 以及显着抑制 Th17 细胞的形成 [2]。
在 BALB/c 小鼠的咪喹莫特诱导的银屑病样皮肤炎症模型中，皮下注射 TMP778 (20 mg/kg，每日两次，持续 10 天) 与溶剂对照组相比，显著减少了耳厚度。组织学分析显示表皮增生和炎症细胞浸润减少 [1]。 在 IMQ 模型中，TMP778 治疗显著减少了体内产生 IL-17A 的 γδ T 细胞数量，并抑制了皮肤浸润细胞中 Th17 特征基因（Ccl20, Il23r, Ccr6, Il17f, Il22, Il17a）的表达 [1]。 在 MOG₃₅₋₅₅/CFA 免疫诱导的小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型中，皮下注射 TMP778 (每次 200 μg，从第 0 天开始每日两次) 与溶剂对照组相比，延迟了疾病发作并显著降低了疾病进展的严重程度 [2]。 在 EAE 模型中，TMP778 治疗减少了浸润中枢神经系统的单核细胞数量，并显著降低了中枢神经系统中 IL-17⁺ T 细胞（包括 IL-17⁺IFNγ⁺）的比例 [2]。 |
| 酶活实验 |
FRET 实验：采用荧光共振能量转移实验来筛选 RORγt 反向激动剂。使用生物素化的人 RORγt 蛋白和生物素化的类固醇受体共激活因子 1 肽。向反应混合物中加入链霉亲和素标记的别藻蓝蛋白和铕。将化合物与含有 SRC1-铕和人 RORγt-别藻蓝蛋白的 FRET 混合物孵育 1 小时。在酶标仪上以 Lance 模式读取 516 nm 和 665 nm 处的发射光。计算每个浓度的激活百分比并绘图以确定 IC₅₀ [1]。
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| 细胞实验 |
IL-17F 启动子实验：使用稳定表达 RORγt 和 IL-17F 启动子-荧光素酶报告基因的 Jurkat 细胞系。细胞在含 10% FBS 的 RPMI 1640 中培养，稀释至 5 × 10⁵ 细胞/mL，并在化合物存在下用抗 CD3 抗体 (10 μg/mL) 刺激 20 小时。加入检测混合物孵育 30 分钟后测定荧光素酶活性。计算各浓度下的抑制百分比以确定 IC₅₀ [1]。
核受体报告基因实验 (GAL4)：将 HEK293 细胞与含有融合了 RORγt、RORα 或 RORβ 配体结合域的 GAL4 DNA 结合域的载体，以及 pG5 Luc 报告质粒（含有 5 个 GAL4 结合位点）进行瞬时共转染。转染 24 小时后，加入化合物继续孵育 18 小时，然后测定荧光素酶活性 [2]。 初始 CD4⁺ T 细胞 Th17 分化：分离初始 CD4⁺ T 细胞，在 Th17 极化条件（IL-6, TGF-β, IL-23, IL-1β, 抗 IL-4, 抗 IFN-γ）下用抗 CD3/抗 CD28 磁珠刺激，同时加入化合物或 DMSO。6 天后收集上清液，用 MSD 测定细胞因子水平。对于 Th1 或 Th2 分化，细胞分别与 IL-12/抗 IL-4 或 IL-4/抗 IL-12 共培养 [1]。 记忆 CD4⁺ T 细胞实验：纯化记忆 CD4⁺ T 细胞，用抗 CD3/抗 CD28 磁珠刺激，加或不加 IL-23 (50 ng/mL)，培养 2 天后用 MSD 测定上清液中的细胞因子 [1]。 人 PBMC 实验：用可溶性抗 CD3 和抗 CD28 抗体刺激 PBMCs，加或不加 IL-23 (50 ng/mL)，培养 5 天后用 MSD 测定上清液中的细胞因子 [1]。 γδ T 细胞实验：通过负选从 PBMCs 中纯化人 γδ T 细胞，用抗 CD3/抗 CD28 磁珠加 IL-1β、IL-6 和 IL-23 刺激 2 周，使其分化为产生 IL-17A 的细胞。然后在化合物存在下，用相同细胞因子再次刺激细胞 5 天，用 MSD 测定细胞因子水平 [1]。 细胞内细胞因子染色：用 PMA (10-30 ng/mL) 和离子霉素 (500-1000 ng/mL) 刺激细胞，最后 3-4 小时加入布雷菲德菌素 A。表面染色后，固定、透化细胞，用荧光标记的细胞因子抗体染色，然后通过流式细胞术分析 [1, 2]。 RNA 提取和 qPCR：使用 RNeasy 试剂盒（含 DNase I 消化）提取总 RNA。合成 cDNA，并使用 TaqMan 实时 PCR 进行基因表达定量 [1]。 RORγt 慢病毒转导：用表达 RORγt 的慢病毒转导初始 CD4⁺ 或 CD8⁺ T 细胞，并用抗 CD3/抗 CD28 磁珠刺激。部分实验中，在转导时加入化合物 [1]。 ChIP-PCR：Th17 细胞在化合物存在下培养 96 小时。使用抗 RORγt 抗体进行 ChIP 实验，随后进行实时 PCR 分析，以确认选定位点的 RORγt 结合情况 [2]。 |
| 动物实验 |
咪喹莫特（IMQ）诱导的皮肤炎症模型：采用10-12周龄的雌性BALB/c小鼠。TMP778溶解于由3%二甲基乙酰胺、10% Solutol和87%生理盐水组成的溶剂中。IMQ配制成浓度为50 mg/mL的乙醇/PBS/乳酸溶液（54:36:10%）。从第0天开始，连续10天，每天两次皮下注射TMP778（20 mg/kg）或载体（早晚各一次，两次注射间隔8小时）。在应用咪喹莫特（IMQ）前，每天测量耳廓厚度[1]。
实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型：将雌性C57BL/6小鼠（8-12周龄）皮下注射含有MOG₃₅₋₅₅（100 μg/只）和结核分枝杆菌H37Ra提取物（3 mg/mL）的完全弗氏佐剂（CFA，100 μL/只）乳剂。在第0天和第2天腹腔注射百日咳毒素（100 ng/只）。从第0天开始，在整个实验过程中，每天两次皮下注射TMP778（每次200 μg）[2]。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
TMP778 是一种强效且选择性的 RORgt 反向激动剂。
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| 分子式 |
C31H30N2O4
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|---|---|
| 分子量 |
494.580908298492
|
| 精确质量 |
494.22
|
| 元素分析 |
C, 75.28; H, 6.11; N, 5.66; O, 12.94
|
| CAS号 |
1422053-04-0
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| 相关CAS号 |
TMP780;1422053-03-9
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| PubChem CID |
71247311
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
5.6
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| tPSA |
88.5
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
37
|
| 分子复杂度/Complexity |
758
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
|
| SMILES |
CC1=CC(=C(C=C1)[C@H](C2=CC=CC=C2)NC(=O)CC3=CC4=C(C=C3)OC(=C4)[C@H](C5=C(ON=C5C)C)O)C
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| InChi Key |
DIURRJOJDQOMFC-IOWSJCHKSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C31H30N2O4/c1-18-10-12-25(19(2)14-18)30(23-8-6-5-7-9-23)32-28(34)16-22-11-13-26-24(15-22)17-27(36-26)31(35)29-20(3)33-37-21(29)4/h5-15,17,30-31,35H,16H2,1-4H3,(H,32,34)/t30-,31+/m0/s1
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| 化学名 |
2-[2-[(S)-(3,5-dimethyl-1,2-oxazol-4-yl)-hydroxymethyl]-1-benzofuran-5-yl]-N-[(S)-(2,4-dimethylphenyl)-phenylmethyl]acetamide
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| 别名 |
TMP-778 TMP 778 TMP778
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~240 mg/mL (~485.26 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0219 mL | 10.1096 mL | 20.2192 mL | |
| 5 mM | 0.4044 mL | 2.0219 mL | 4.0438 mL | |
| 10 mM | 0.2022 mL | 1.0110 mL | 2.0219 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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Hexyl 4-hydroxybenzoate
RORγ inverse agonist 2
ROR1-IN-4
RORγt inverse agonist 36
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