| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
HDAC6 ( IC50 = 15 nM ); HDAC8 ( IC50 = 854 nM ); HDAC1 ( IC50 = 16400 nM )
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性：Tubastatin A 对所有 11 种 HDAC 异构体均具有显着选择性，并且对除 HDAC8 之外的所有异构体保持超过 1000 倍的选择性，其中 HDAC8 的选择性约为 57 倍。在同型半胱氨酸 (HCA) 诱导的神经变性测定中，Tubastatin A 从 5 μM 开始，对 HCA 诱导的神经元细胞死亡表现出剂量依赖性保护作用，在 10 μM 时几乎完全保护。 100 ng/mL 的 Tubastatin A 可增强 Foxp3+ T 调节细胞 (Treg) 对体外 T 细胞增殖的抑制作用。当 α-微管蛋白在生肌过程早期过度乙酰化时，C2C12 细胞中的图巴他汀 A 治疗会导致肌管形成受损。然而，当肌管中的α-微管蛋白过度乙酰化时，就会发生肌管伸长。最近的一项研究表明，原子力显微镜 (AFM) 测试表明，图巴他汀 A 治疗可增加细胞弹性，且不会对小鼠卵巢癌细胞系 MOSE-E 和 MOSE-L 中的肌动蛋白微丝或微管网络产生剧烈变化。激酶测定：酶抑制测定由位于宾夕法尼亚州 Malvern 的 Reaction Biology Corporation 使用 Reaction Biology HDAC Spectrum 平台进行。 (www.reactionbiology.com) HDAC1、2、4、5、6、7、8、9、10 和 11 检测使用分离的重组人蛋白； HDAC3/NcoR2 复合物用于 HDAC3 测定。 HDAC1、2、3、6、10 和 11 测定的底物是来自 p53 残基 379-382 的荧光肽 (RHKKAc)； HDAC8 的底物是基于 p53 (RHKAcKAc) 残基 379-382 的荧光二酰肽。乙酰基-Lys（三氟乙酰基）-AMC 底物用于 HDAC4、5、7 和 9 测定。将图巴他汀 A 溶解在 DMSO 中，并以 10 剂量 IC50 模式进行测试，从 30 μM 开始进行 3 倍系列稀释。对照化合物曲古抑菌素 A (TSA) 在 10 剂量 IC50 中进行测试，从 5 μM 开始进行 3 倍连续稀释。 IC50 值通过曲线拟合剂量/反应斜率来提取。细胞测定：如前所述，从胎儿 Sprague-Dawley 大鼠（胚胎第 17 天）的大脑皮层获得原代皮层神经元培养物。所有实验均在电镀后 24 小时开始。在这些条件下，细胞不易受到谷氨酸介导的兴奋性毒性的影响。对于细胞毒性研究，用温 PBS 冲洗细胞，然后置于含有 5.5 g/L 葡萄糖、10% 胎牛血清、2 mM L-谷氨酰胺和 100 μM 胱氨酸的最低必需培养基 (Invitrogen) 中。通过向培养基中添加谷氨酸类似物同型半胱氨酸（HCA；5 mM）来诱导氧化应激。 HCA 由 100 倍浓缩溶液稀释而成，并调节至 pH 7.5。结合 HCA，用指定浓度的图巴他汀 A 处理神经元。 24小时后通过MTT测定（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物）方法评估活力。
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| 体内研究 (In Vivo) |
每日治疗 0.5mg/kg 的 Tubastatin A 可抑制 HDAC6，从而促进炎症和自身免疫小鼠模型中的 Tregs 抑制活性，包括多种形式的实验性结肠炎和完全主要组织相容性复合体 (MHC) 不相容的心脏同种异体移植排斥反应。
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| 酶活实验 |
反应生物学 HDAC Spectrum 平台用于执行酶抑制实验。分离的重组人蛋白用于 HDAC1、2、4、5、6、7、8、9、10 和 11 测定； HDAC3/NcoR2 复合物用于 HDAC3 测试。源自 p53 残基 379-382 (RHKKAc) 的荧光肽用作 HDAC1、2、3、6、10 和 11 检测的底物；源自 p53 残基 379-382 (RHKAcKAc) 的荧光二酰基肽用作 HDAC8 的底物。对于 HDAC4、5、7 和 9 测定，使用乙酰基-Lys（三氟乙酰基）-AMC 底物。将图巴他汀 A 溶解在 DMSO 中后，使用从 30 μM 开始的 3 倍连续稀释方案在 10 剂量 IC50 模式下进行测试。使用从 5 μM 开始的 3 倍连续稀释，在 10 剂量 IC50 中测试对照化合物曲古抑菌素 A (TSA)。对剂量/反应斜率进行曲线拟合即可得出 IC50 值。
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| 细胞实验 |
胎儿 Sprague-Dawley 大鼠（胚胎第 17 天）的大脑皮层用于培养初级皮层神经元。电镀后二十四小时，开始所有实验。在这些情况下，谷氨酸介导的兴奋性毒性不会损害细胞。将细胞用温 PBS 洗涤，然后放入含有 5.5 g/L 葡萄糖、10% 胎牛血清、2 mM L-谷氨酰胺和 100 μM 胱氨酸的基本必需培养基中进行细胞毒性研究。将谷氨酸类似物同型半胱氨酸 (HCA；5 mM) 添加到培养基中以引起氧化应激。 HCA是通过稀释已浓缩100倍并调节pH至7.5的溶液来制备的。除了 HCA 之外，还用指定浓度的图巴他汀 A 处理神经元。 MTT 测定（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑）用于测定 24 小时后的活力。
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| 动物实验 |
在过继转移和葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的结肠炎模型中，每组十只小鼠评估HDAC6靶向治疗的效果。连续五天，每天在野生型B6小鼠的pH平衡自来水中添加新鲜配制的4%（w/v）DSS溶液。通过每日监测体重、粪便性状和粪便血情况来评估结肠炎的严重程度。小鼠每天接受一次tubacin或niltubacin治疗（0.5 mg/kg体重/天，腹腔注射），持续7天。粪便血含量分级为0（无）、2（隐血）或4（肉眼可见）。粪便性状分级为0（硬）、2（软）或4（腹泻）。为了评估T细胞依赖性结肠炎模型的预防效果，将CD4+CD45RBhi T细胞（1×106）和CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）（纯度>90%，流式细胞术）腹腔注射到B6/Rag1−/−小鼠体内。这些T细胞是从野生型（WT）小鼠中通过磁珠分离得到的（细胞纯度>95%，流式细胞术）。之后每两周观察一次小鼠的结肠炎症状。为了评估已建立的T细胞依赖性结肠炎的治疗效果，将CD4+CD45RBhi T细胞（1×106）腹腔注射到B6/Rag1−/−小鼠体内。结肠炎发作后，小鼠接受 HDAC6 抑制剂（tubastatin A）、HSP90 抑制剂（17-AAG）或 CD4+CD25+ Treg 细胞（5×10⁵ 个细胞）治疗，这些 Treg 细胞如前所述从 HDAC6−/− 或野生型小鼠中分离而来。观察小鼠的持续体重下降和粪便性状变化。研究结束时，将结肠石蜡切片进行苏木精-伊红染色或阿利新蓝染色，然后进行 Foxp3+ Treg 细胞浸润的免疫过氧化物酶染色或组织学分级。
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| 参考文献 |
[1]. Rational Design and Simple Chemistry Yield a Superior, Neuroprotective HDAC6 Inhibitor, Tubastatin A J. Am. Chem. Soc., 2010, 132 (31), pp 10842-10846.
[2]. Histone deacetylase 6 and heat shock protein 90 control the functions of Foxp3(+) T-regulatory cells. Mol Cell Biol. 2011 May;31(10):2066-78. [3]. Dysferlin interacts with histone deacetylase 6 and increases alpha-tubulin acetylation. PLoS One. 2011;6(12):e28563. [4]. Actin filaments play a primary role for structural integrity and viscoelastic response in cells. Integr Biol (Camb). 2012 May;4(5):540-9. [5]. HDAC6 Inhibition Promotes Transcription Factor EB Activation and Is Protective in Experimental Kidney Disease. Front Pharmacol. 2018 Feb 1;9:34. [6]. Target deconvolution of HDAC pharmacopoeia reveals MBLAC2 as common off-target. Nat Chem Biol. 2022 Apr 28. |
| 其他信息 |
基于结构的药物设计结合同源建模技术，开发出高效的HDAC6抑制剂，与其他抑制剂相比，这些抑制剂对HDAC6同工酶具有更高的选择性。这些抑制剂的合成步骤少，易于放大，因此可用于体内研究。该系列化合物中的一种优化化合物，命名为Tubastatin A，在原代皮层神经元培养物中进行了测试。结果表明，Tubastatin A可诱导乙酰化α-微管蛋白水平升高，但不会影响组蛋白，这与其对HDAC6的选择性相符。此外，Tubastatin A还能剂量依赖性地保护原代皮层神经元免受谷胱甘肽耗竭引起的氧化应激损伤。重要的是，在所有测试浓度下单独使用时，这种含羟肟酸的HDAC6选择性化合物均未显示出神经毒性，因此预示着该药物及其类似物在神经退行性疾病治疗中的潜在应用。[1]
Dysferlin是一种多C2结构域跨膜蛋白，参与多种细胞功能，最显著的是骨骼肌膜修复，但也参与肌生成、细胞黏附和细胞间钙信号传导。我们之前已证明，dysferlin与肌肉细胞中的α-微管蛋白和微管相互作用。在肌生成过程中，微管会发生大量重组，以维持新生肌纤维的生长和伸长。微管功能受翻译后修饰的调控，例如其α-微管蛋白亚基的乙酰化，而这种乙酰化又受组蛋白去乙酰化酶6 (HDAC6) 的调控。在本研究中，我们鉴定出HDAC6是dysferlin的新型结合蛋白。Dysferlin通过其C2D结构域与HDAC6酶结合，并通过其C2A和C2B结构域与底物α-微管蛋白结合，从而阻止HDAC6对α-微管蛋白的去乙酰化。我们进一步发现，dysferlin的表达促进α-微管蛋白的乙酰化，并增强微管对诺考达唑和冷诱导解聚的抵抗力和恢复能力。通过使用Tubastatin A选择性抑制HDAC6，我们发现，在肌生成早期，当α-微管蛋白过度乙酰化时，肌管形成受损；然而，当α-微管蛋白在肌管中过度乙酰化时，肌管则能够伸长。本研究提示dysferlin在肌生成中发挥着新的作用，并将HDAC6鉴定为一种新型的dysferlin相互作用蛋白。[3] |
| 分子式 |
C21H22N2O2
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|---|---|
| 分子量 |
334.411585330963
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| 精确质量 |
334.168
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| 元素分析 |
C, 58.79; H, 4.93; F, 12.68; N, 9.35; O, 14.24
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| CAS号 |
1239034-70-8
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| PubChem CID |
68380216
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
522.8±50.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
270.0±30.1 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.4 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.624
|
| LogP |
4.08
|
| tPSA |
34.5
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
25
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| 分子复杂度/Complexity |
475
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O(C)C(C1C=CC(=CC=1)CN1C2C=CC=CC=2C2CN(C)CCC1=2)=O
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| InChi Key |
RMAYYLGDIMEEOS-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H22N2O2/c1-22-12-11-20-18(14-22)17-5-3-4-6-19(17)23(20)13-15-7-9-16(10-8-15)21(24)25-2/h3-10H,11-14H2,1-2H3
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| 化学名 |
methyl 4-[(2-methyl-3,4-dihydro-1H-pyrido[4,3-b]indol-5-yl)methyl]benzoate
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| 别名 |
1239034-70-8; Methyl 4-((2-methyl-3,4-dihydro-1H-pyrido[4,3-b]indol-5(2H)-yl)methyl)benzoate; Benzoic acid, 4-[(1,2,3,4-tetrahydro-2-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indol-5-yl)methyl]-, methyl ester; SCHEMBL12804583; RMAYYLGDIMEEOS-UHFFFAOYSA-N;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9903 mL | 14.9517 mL | 29.9034 mL | |
| 5 mM | 0.5981 mL | 2.9903 mL | 5.9807 mL | |
| 10 mM | 0.2990 mL | 1.4952 mL | 2.9903 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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