kappa 1 opioid receptor/κ Opioid Receptor/KOR

选择性卡帕激动剂U-50488是最近发现并鉴定的。本研究对U-50488类似物[3H]U-69593的受体结合特性进行了表征。[3H]U-69593与豚鼠、小鼠和大鼠脑制备的膜具有高亲和力（3 nM）。kappa结合位点的数量分别仅占阿片类药物总位点的13%、9%和4%。苯并morphans， dynorphin和与U-50488结构相关的化合物对该kappa位点具有高亲和力。[1]

U-69593（0.16 mg/kg；皮下注射）可降低与成瘾状态相关的行为敏感性[2]。在外侧纹状体中，U-69593（1、10、25 nmol/μL；显微注射）增强 U-69593（0.32 mg/kg；皮下注射）并立即降低安非他明诱导的行为，以及钙诱导的糖尿病液体多巴胺和腹部谷氨酸[4]。

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研究了选择性阿片受体激动剂U-69593对可卡因诱导的大鼠运动活动和刻板印象变化的影响。U-69593 (0.16 mg/kg s.c.c)急性或慢性注射可卡因（20 mg/kg i.p.p），同时减弱运动刺激作用和刻板印象。每日可卡因治疗导致对可卡因两种作用的敏感。相比之下，在每日可卡因治疗之前或同时接受U-69593治疗的动物没有出现这种致敏反应。这些数据表明，kappa-阿片受体的激活减弱了可卡因对运动活动和刻板印象的急性和慢性影响。考虑到外源性和内源性kappa-阿片激动剂对中脑边缘多巴胺能系统多巴胺释放的抑制作用，这表明这种作用可能是U-69593对可卡因诱导的运动活动和刻板印象变化的影响的基础。[2]

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本报告研究了腹内侧前额叶皮层在控制自发交替/工作记忆和焦虑相关行为中的作用。在实验1中，我们检测了在CD-1小鼠的边缘下皮层（IL）微注射选择性kappa(1)受体激动剂U-69593对几种行为学来源的焦虑指数的影响，这些焦虑指数在高水平的正迷宫（EPM）和开放领域的防御/戒断（D/W）焦虑中，以及对EPM转移-潜伏期（T-L）测试中的记忆和y迷宫中的内隐自发交替记忆（SAP）。在第1周，在第一次EPM试验中，1次注射1、10或25 nmol/1.0微升U-69593预处理IL剂量依赖性延长T-L，并产生剂量依赖性抗焦虑行为谱。24小时后，同样的小鼠被给予不含药物的第二次试验，进行T-L记忆和焦虑的EPM测试。虽然T-L记忆没有受到干扰，但在试验2 EPM行为中观察到相对于药物处理的动物的小但可检测的携带效应。在第2周，同一组小鼠再次在IL中注射相同剂量的U-69593，并在开放场地进行D/W测试，随后在y迷宫中进行8分钟的SAP试验。在D/W试验中，最小剂量的U-69593具有抗焦虑作用，在y型迷宫中，SAP/工作记忆呈剂量依赖性增强。在实验2中，我们评估了0.5微升体积的显微注射是否会在三组新的CD-1小鼠的IL中产生类似的行为和携带效应，如果实验1中使用的1.0微升体积注射扩散到IL之外，因此可能会混淆一些效应。实验2的步骤与实验1相同，只是动物的测试顺序相反。因此，在第1周，每组各有一半的动物在y迷宫中进行SAP记忆测试，然后在开阔的场地进行D/W焦虑测试，另一半动物在相反的顺序进行测试。第2周，按照实验1的描述，在EPM中进行2个试验的T/L记忆和焦虑测试。在第1周，1次注射10或25 nmol/0.5微升U-69,593预处理IL，无论测试顺序如何，都能降低D/W焦虑并增强SAP记忆。在第2周，同一组小鼠再次在IL中注射相同剂量的U-69,593，体积为0.5微升，并在EPM中进行测试。与实验1类似，在第一次EPM试验中，U-69,593剂量依赖性地延长了T/L，并产生了抗焦虑行为特征。在24小时的延迟后，T/L回忆记忆再次没有受到显著影响，但在第二次无药焦虑试验中，EPM相对于给药动物有明显的抗焦虑行为特征。本文讨论了以下方面的结果：a)注射量和测试顺序；b) kappa受体可能对mPFC IL区对引发焦虑的环境的神经化学反应性产生的影响；c) CD-1小鼠中kappa介导的来自IL的焦虑缓解的可能性，是通过与神经化学系统相互作用产生的，这些神经化学系统参与了对引发焦虑的信息的钝化；d) SAP记忆可能是工作记忆的一种隐性亚型的证据。e) IL内隐工作记忆过程调节焦虑相关行为的诱导和表达的可能性。[3] <

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研究了一种kappa-阿片受体激动剂对急性安非他明诱导的行为激活和腹侧纹状体多巴胺和谷氨酸透析水平的影响。安非他明（2.5 mg/kg i.p）引起清醒大鼠饲养、嗅探和戳洞行为以及腹侧纹状体多巴胺和谷氨酸水平的显著增加。U-69593 (0.32 mg/kg s.c)显著降低了安非他明引起的行为和腹侧纹状体多巴胺和谷氨酸水平的增加。选择性kappa-阿片受体拮抗剂，去甲萘多啡胺，反透析进入腹侧纹状体，拮抗U-69593对安非他明诱导的行为和多巴胺和谷氨酸水平的影响。在灌注开始后45分钟，向腹侧纹状体反向透析低钙（0.1 mM）可使基底多巴胺（而非谷氨酸）透析液水平降低91%。引人注目的是，0.1 mM钙灌注显著降低了2.5 mg/kg安非他明引起的腹侧纹状体多巴胺和谷氨酸水平的增加，区分了钙依赖性和钙非依赖性释放成分。U-69593不改变安非他明诱发的钙无关成分多巴胺和谷氨酸水平。这些数据与以下观点一致：中剂量的安非他明可通过跨突触机制增加腹侧纹状体中多巴胺和谷氨酸水平的增加，刺激kappa-阿片受体可抑制安非他明作用中的钙依赖性成分。[4]

动物/疾病模型：自发性记忆改变[3]。大鼠[2]
剂量：0.16 mg/kg
给药途径：皮下注射（急性注射可卡因（20 mg/kg腹腔注射））
实验结果：减弱可卡因对运动活性和刻板行为的急性和慢性影响。

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动物/疾病模型： CD-1 小鼠 [3]
剂量： 1、10、25 nmol/μL
给药途径： 微量注射（下边缘皮层 (IL)），每周一次，持续 2 周
实验结果： 剂量依赖性地延长转移潜伏期 (TL)，并产生剂量依赖性的抗焦虑行为，在 24 小时后（小时）小鼠中观察到微弱但可检测到的残留效应。在第 2 周，U-69593 剂量依赖性地延长 T/L，并在第一次高架十字迷宫 (EPM) 测试中产生抗焦虑行为，但观察到更显著的抗焦虑作用。

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动物/疾病模型： 280-350 g，雄性Wistar大鼠[4]
剂量： 0.32 mg/kg
给药途径： 皮下注射（15分钟后腹腔注射安非他明（2.5 mg/kg））
实验结果： 安非他明显著降低了透析液中多巴的浓度。\n

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\n\nU-69593用45%环糊精溶液溶解至浓度分别为1、10和25 nmol/μl。溶剂为45%环糊精/蒸馏水溶液。环糊精是一种环状蔗糖衍生物，可提高药物溶解度。 由于U-69593在生理盐水中的溶解度差，通常以悬浮液的形式注射。环糊精性质稳定，可迅速排出体外。使用环糊精可以实现更精确的微量注射，并避免插管堵塞。\n

\n脑内给药[3]
\n经过2周的恢复期后，将小鼠从主饲养区转移至实验室，并在给药前静置1小时。小鼠被随机分配到溶剂对照组、1 nmol、10 nmol或25 nmol U-69593治疗组。每只小鼠均被轻度固定，并将30号注射套管插入引导套管，注射套管通过聚乙烯管连接到5 μl Hamilton微量注射器。每种药物浓度均以1 μl的体积在30秒内注入。注射套管在原位停留了30秒，以利于药物扩散。\n\n

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\n\n在实验1中，研究了U-69593或降低钙浓度对基础多巴胺和谷氨酸水平的影响。在一组大鼠中，采集基线样本后，皮下注射U-69593（0.32 mg/kg），15分钟后注射生理盐水。在另一组大鼠中，采集基线样本后，注射12%丙二醇（溶剂）溶液，15分钟后注射生理盐水。在第三组大鼠中，灌注液中的钙浓度从1.2 mM降低至0.1 mM，并持续进行实验。[4]
\n\n在实验2中，研究了U-69593对苯丙胺诱导的多巴胺和谷氨酸水平的影响。收集三个基线透析样本后，大鼠接受载体（1 ml/kg 皮下注射）或 U-69593（0.32 mg/kg 皮下注射），15 分钟后腹腔注射安非他明（2.5 mg/kg）。在另一组大鼠中，在注射 U-69593（0.32 mg/kg 皮下注射）前，通过透析探针注入去甲双氢吗啡酮（nBNI；100 nM），15 分钟后腹腔注射安非他明（2.5 mg/kg）。在注射安非他明后 2 小时内收集样本，同时对大鼠的行为进行评分（见下文）。[4]
\n\n在实验 3 中，研究了在有或无 U-69593 的情况下，钙降低对安非他明诱导的多巴胺和谷氨酸水平的影响。在一组大鼠中，采集基线样本后，将人工脑脊液（ACSF）中的钙浓度降低至 0.1 mM。15 分钟后，腹腔注射安非他明（2.5 mg/kg）。在另一组大鼠中，于注射安非他明前 15 分钟开始皮下注射 U-69593（0.32 mg/kg）并降低钙输注浓度。安非他明给药后，连续 2 小时采集样本。[4]
\n\nU-69593 悬浮于溶剂（12% 丙二醇）中，而 nBNI 溶解于 ACSF 中。剂量以盐的形式计算。

[1]. [3H]U-69593 a highly selective ligand for the opioid kappa receptor. Eur J Pharmacol. 1985 Feb 26;109(2):281-4.

[2]. The kappa-opioid receptor agonist U-69593 attenuates cocaine-induced behavioral sensitization in the rat. Brain Res. 1993 Jul 9;616(1-2):335-8.

[3]. U-69,593 microinjection in the infralimbic cortex reduces anxiety and enhances spontaneous alternation memory in mice. Brain Res. 2000 Feb 21;856(1-2):259-80.

[4]. The kappa-opioid agonist, U-69593, decreases acute amphetamine-evoked behaviors and calcium-dependent dialysate levels of dopamine and glutamate in the ventral striatum. J Neurochem. 1999 Sep;73(3):1066-74.

U-69593 是一种单羧酸酰胺，由苯乙酸的羧基与 (5R,7S,8S)-N-甲基-7-(吡咯烷-1-基)-1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-胺的仲氨基缩合而成。它具有κ-阿片受体激动剂、抗炎剂和利尿剂的作用。它是一种氧杂螺化合物、N-烷基吡咯烷、有机杂双环化合物和单羧酸酰胺。本系列实验旨在确定 U-69593 是否不仅能够重现 CD-1 小鼠在迷宫中腹内侧前额叶皮层 (vmPFC) 观察到的抗焦虑作用，而且还能够影响迷宫转移潜伏期测试中第一次试验（药物组）的联想学习。经过24小时的延迟后，我们评估了在试验1（未用药）前注射U-69593是否会影响转移潜伏期记忆以及在试验2（未用药）中对高架十字迷宫厌恶性的记忆。在第二周，我们评估了在同一批CD-1小鼠中，第二次在IL区域进行试验前U-69593微量注射是否会影响防御/退缩焦虑以及在Y迷宫中的自发交替行为记忆。在实验 2 中，我们评估了在 IL 皮层注射体积减少 50%（0.5 μl 相对于 1.0 μl）是否能对 3 组新的 CD-1 小鼠产生类似的行为影响，但测试顺序与之前相反。[3]

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在这项研究中，κ-阿片受体激动剂 U-69593 显著降低了苯丙胺诱导的行为，并抑制了 2.5 mg/kg 苯丙胺诱导腹侧纹状体透析液中多巴胺和谷氨酸水平的能力。通过微透析探针向伏隔核内灌注选择性 κ-阿片受体拮抗剂 nBNI 可拮抗 U-69593 的这些作用。含 0.1 mM 钙的人工脑脊液 (ACSF) 降低了苯丙胺增加腹侧纹状体透析液中多巴胺和谷氨酸水平的能力。此外，U-69593不影响苯丙胺诱发的多巴胺和谷氨酸水平的钙非依赖性成分。[4]

C22H32N2O2-HCL

356.246

C, 74.12; H, 9.05; N, 7.86; O, 8.98

96744-75-1

1313288-99-1;96744-75-1;U69593 HCl; U-69593 Maleate;

105104

White to off-white solid powder

1.14g/cm3

518.719ºC at 760 mmHg

267.512ºC

1.581

3.191

32.78

0

3

4

26

485

3

CN([C@H]1CC[C@@]2(CCCO2)C[C@@H]1N3CCCC3)C(=O)CC4=CC=CC=C4

PGZRDDYTKFZSFR-ONTIZHBOSA-N

InChI=1S/C22H32N2O2/c1-23(21(25)16-18-8-3-2-4-9-18)19-10-12-22(11-7-15-26-22)17-20(19)24-13-5-6-14-24/h2-4,8-9,19-20H,5-7,10-17H2,1H3/t19-,20-,22-/m0/s1

(+)-N-methyl-2-phenyl-N-[(5R,7S,8S)-7-pyrrolidin-1-yl-1-oxaspiro[4.5]decan-8-yl]acetamide

U-69593; U069593; 96744-75-1; U69,593; U 69,593; U-69,593; n-methyl-2-phenyl-n-[(5r,7s,8s)-7-(pyrrolidin-1-yl)-1-oxaspiro[4.5]dec-8-yl]acetamide; N-methyl-2-phenyl-N-[(5R,7S,8S)-7-pyrrolidin-1-yl-1-oxaspiro[4.5]decan-8-yl]acetamide; J5S4K6TKTG; U 69593

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。