β adrenergic receptor

采用全细胞膜片钳和细胞内灌注技术研究了β -2肾上腺素能受体激活对青蛙心室肌细胞l型钙电流的影响。β -2肾上腺素能激动剂Zinterol以浓度依赖的方式增加ICa， EC50（即反应为最大值的50%的Zinterol浓度）为2.2 nM。zinterol的作用基本上与膜电位无关。zinterol的刺激作用被一种β -2肾上腺素能拮抗剂ICI 118,551竞争性地拮抗。zinterol的最大刺激作用在幅度上与非选择性肾上腺素激动剂异丙肾上腺素的饱和浓度（1或10微米）的作用相当。此外，3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（100微米），一种非选择性磷酸二酯酶抑制剂，或福斯克林（10微米），一种腺苷酸环化酶的直接激活剂，在0.1微米的锌interol存在下没有加性效应。Zinterol对青蛙的ICa有持久的作用，因为在药物洗脱后，ICa在17分钟的时间常数内恢复到基础水平。在恢复阶段应用乙酰胆碱（1微米）迅速将ICa降低到基础水平，这表明由于Zinterol与其受体的缓慢解离速率常数，腺苷酸环化酶持续激活。Zinterol还能增加大鼠心室肌细胞和人心房肌细胞的ICa，并分别在10和1微米时达到最大作用。在所有三种制剂中，细胞内灌注20微米PKI(15-22)，一种camp依赖性蛋白激酶的高选择性肽抑制剂，完全拮抗zinterol对ICa的刺激作用。我们得出结论，β -2肾上腺素能受体激活会导致青蛙、大鼠和人心肌细胞中ICa的强烈增加，这是由于腺苷酸环化酶的刺激和camp依赖性磷酸化的激活。[2]

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Zinterol< strong> 的体外致心律失常作用[3]
为了确定zinterol引起室性心律失常的潜在细胞机制，我们测量了对照组和HF兔分离的左室肌细胞的收缩。负载fluo-3的肌细胞（37°C）的电场刺激（0.5−4 Hz）表明，Zinterol （1 μM）诱导7个HF肌细胞的后收缩（AC），而6个对照组中的0个（p<0.01）， ICI-118,551 （100 nM，图1底部）阻断了这一作用。这些ACs与自发性SR - Ca释放或后瞬态有关。为了验证zinterol的作用是由于刺激β2-AR，我们用1 μM zinterol加300 nM的β1-AR阻滞剂CGP- 20712a （CGP）进行了额外的β2-AR刺激研究。Zinterol + CGP在8个HF肌细胞中诱导7个AC（与后瞬态相关，图2），而7个对照组中0个（p<0.01）， 100 nM ICI-118,551阻断了这一作用。在没有层粘连蛋白的玻璃片上，HF和对照肌细胞也发现了类似的结果，排除了层粘连蛋白对β2-AR信号的潜在影响较低浓度的Zinterol （300nM）与CGP未能诱导4个HF肌细胞的后瞬变，符合剂量依赖性特异性效应。

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β2-AR刺激对细胞缩短、Ca瞬态和SR Ca负荷的影响[3]
Zinterol+ CGP对对照肌细胞的细胞缩短没有影响(在1或3 Hz；图3 c)。然而，β2-AR刺激显著增加了HF肌细胞的细胞缩短(1和3 Hz分别增加42%和41%，n=7, p<0.05；图4 c)。 在对照兔肌细胞中，在1或3hz刺激频率下，β2-AR刺激（zinterol + CGP）不会增加Ca瞬态振幅或SR Ca负荷（通过咖啡因收缩评估）（图3A-B）。然而，在HF肌细胞中，β2-AR刺激显著增加了1hz下Ca瞬态振幅和SR Ca负荷（1.28±0.05 vs 0.99±0.06和1.82±0.06 vs 1.42±0.06 Δ F/Fo, n=12, p<0.05，图4A-B）。在3hz频率下也有类似的效果（图4A-B）。所有这些作用都被β2-AR阻滞剂ICI-118,551阻断（图4B）。因此，β2-AR刺激增强了HF中SR Ca含量、Ca瞬态和收缩，但不控制心肌细胞，这种增强SR Ca负荷和自发SR Ca释放可能通过增强后收缩和后去极化而导致HF心律失常

评估的影响β2-AR SERCA的刺激和NCX函数,我们测量的速度下降(Ca)我在抽搐和caffeine-induced Ca瞬变,分别(图5)。Zinterol +本金保证产品没有影响τ的抽搐(Ca)我在控制细胞下降,但下降显著加速抽搐(Ca)我高频细胞(156±11 vs 199±12 msec在1赫兹,104±8 vs 125±8 msec 3赫兹,n = 12日,12日,p < 0.05)。Zinterol + CGP对咖啡因短暂性HF或对照肌细胞的tau of Ca下降没有影响，表明NCX没有改变（图5）。

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β2-AR对HF 中Ca电流的影响[3]
图6A显示，在对照肌细胞中，Zinterol (1 μM)增加了ICa（例如，Em在−10和+20 mV之间增加了~ 40%）。这比我们之前在相同的HF心肌细胞制备中使用1 μM异丙肾上腺素（联合β1-和β2-AR激活）5观察到的ICa增加300%要小得多。然而，当我们在β1-AR拮抗剂CGP存在的情况下，在zinterol刺激的对照肌细胞中重复ICa测量时，zinterol没有改变ICa。这表明，图6A中对照肌细胞中仅zinterol对ICa的适度刺激可能是由于β1-AR介导的ICa效应产生的轻微串扰。在HF肌细胞中，zinterol未改变ICa（图6B）。我们得出结论，β2-AR在对照组和HF兔肌细胞中都没有明显改变ICa。

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β2-AR对磷蛋白磷酸化的影响[3]
我们评估了β2-AR刺激对PLB Ser-16（蛋白激酶A位点）和Thr-17 （CaMKII位点）磷酸化的影响。在基线时，HF肌细胞显示Ser-16减少，Thr-17磷酸化增加，正如我们之前所证明的那样对照组和HF兔肌细胞分别暴露于1 μM Zinterol + 300 nM CGP 20712A中，同时存在或不存在100 nM ICI118,551。HF（而非对照组）肌细胞显示Ser-16 （PKA）位点PLB磷酸化增加78% (p<0.05)，但在HF中已经升高的Thr-17 （CaMKII）位点没有显著变化（n= 5,4，图7A）。zinterol诱导的HF中Thr-17磷酸化的轻微增加趋势（不显著）可能继发于zinterol诱导的Ca瞬态增强，这仅在HF肌细胞中可见。

在HF人肌细胞中，Zinterol (1 μM) + CGP (300 nM)；1 Hz, 37°C)显著增加细胞缩短（10.7±3.0 vs 4.2±0.9,n=6, p<0.05），并诱导6个细胞的后收缩（例如见图8A中面板）。在人HF肌细胞中装载fluo-3(37°C；图8)，zinterol + CGP显著增加了Ca瞬态振幅（3.34±0.72 vs 1.48±0.18 ΔF/Fo, n=6, p<0.05，图8B）和SR Ca负荷（以咖啡因Ca瞬态评估，4.82±0.60 vs 3.94±0.44 ΔF/Fo, n=5, p<0.05，图8B）。此外，zinterol + CGP增强抽搐[Ca]i下降速率（τ为306±26 vs 436±85 msec， n=6, p<0.05，图8C）与SERCA活性增强一致，而咖啡因挛缩[Ca]i下降速率不变（表明β2-AR后NCX功能未改变）。zinterol + CGP的所有这些作用都被β2-AR拮抗剂ICI 118,551逆转。

在心力衰竭 (HF) 兔子中，齐克洛尔（2.5 μg/kg，静脉推注，5 秒内）会诱发室性心律失常，例如室性心动过速 (VT) 和室性早搏 (PVC)。在患有心力衰竭的兔子中，较低剂量的 Zintrol（1 μg/kg 静脉注射，n=4）不会引起室性心律失常 [3]。

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1. （-）-异丙肾上腺素和新型β -肾上腺素受体激动剂Zinterol/MJ-9184-1对氯氯蔗糖麻醉猫肺、心血管系统和慢收缩骨骼肌的影响进行了比较。这两种胺都减少了由5-HT引起的气道阻力的增加，抑制了比目鱼肌的不完全破伤风性收缩，降低了血压，增加了心率。与(-)-异肾上腺素相比，MJ-9184-1的作用时间较长。MJ-9184-1和(-)-异丙肾上腺素的作用被β -肾上腺素受体拮抗剂心得安所拮抗。MJ-9184-1对肺阻力和比目鱼肌收缩力的影响大约是(-)-异丙肾上腺素的一半，对心脏产生变时作用的效力是(-)-异丙肾上腺素的七分之一。这些结果表明MJ-9184-1作为β(2)受体兴奋剂具有一定的特异性。[1]

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β2-AR激动剂Zinterol [3]
的体内致心律失常作用 为了确定β2- ar的刺激是否与异丙肾上腺素的致心律失常作用有关，我们对5只对照兔和6只HF兔进行了体内药物输注研究。Zinterol （2.5 μg/kg静脉注射，持续5 s）对对照组和HF兔的心率和平均动脉血压均无显著影响。图1显示，该剂量的zinterol导致6只HF家兔中4只出现室性心律失常，包括室性早搏（PVCs）和室性室速（长达13次搏动）（对照5只，0只，p<0.01），这一作用被β2-AR拮抗剂ICI 118,551 （ICI, 0.2 mg/kg）阻断。低剂量（1μg/kg, n=4）的zinterrol未引起HF家兔室性心律失常。 静脉注射zinterol （2.5 mg/kg）导致6只HF家兔中4只室性心律失常，包括长达13次的室性心动过速（对照组5只中0只，P<0.01）， β (2)-AR拮抗剂ci -118,551 （0.2 mg/kg）阻断了这一作用。

β-肾上腺素能受体测定和竞争结合研究[3]
通过不同浓度（0 - 500 pM）的β-AR拮抗剂[125I]-(−)Iodocyanopindolol（如上文所述）的孵育，在LV匀浆上进行了饱和结合研究利用GraphPad Prism进行Scatchard分析，确定了平衡解离常数Kd和最大结合容量Bmax。为了进行竞争性结合研究，匀浆用500 pM 125I-CYP和逐渐稀释的1 μM ICI-118,551（选择性β2-AR拮抗剂）或100 nM CGP 20712A（选择性β1-AR拮抗剂）孵育。结果调整为fmol/mg蛋白计算特异性结合，并测定β1和β2受体的百分比。

收缩，[Ca]i和膜片钳[3]
心室肌细胞在22°C保存，并在层粘连蛋白预处理的玻璃底腔中镀。细胞装载流-3-乙酰氧基甲酯，并按先前描述的方法测量[Ca]i在20次刺激脉冲后快速应用10 mM咖啡因测定SR钙负荷通过视频边缘检测检测心肌细胞缩短。正常的Tyrodes （NT）溶液含有（mmol/L）： 140 NaCl, 4 KCl, 1 MgCl2, 2 CaCl2, 10葡萄糖，5 HEPES, pH 7.4。在不存在或不存在β2-AR激动剂Zinterol （300 nM或1 μM）±β1-AR拮抗剂CGP 20712A （300 nM, Sigma）或ICI 118551 （100 nM）的情况下，对肌细胞进行场刺激（0.5 ~ 4 Hz， 20次跳动，37°C），观察10秒后收缩的存在。 在其他研究中，使用破裂膜片电压钳测量L型ICa±相似剂量的Zinterol和CGP，移液中含有（mmol/L） CsOH 110, CsCl 20, EGTA 5, mgcl22，天冬氨酸100，HEPES 5, Mg-ATP 2, Na3GTP 0.1, pH 7.2, 25°C。通过对5 mv超极化和去极化脉冲的响应来测量膜电容。

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磷蛋白的磷酸化[3]
新分离的对照和HF兔肌细胞分别用Zinterol (1 μM)、Zinterol + CGP 20712A （300 nM）或Zinterol + CGP + ICI 118,551 （100 nM）孵育10分钟。然后将细胞微球纺丝匀浆，进行蛋白定量和Western blotting。

动物/疾病模型：新西兰白兔心力衰竭模型，不限性别[3]
剂量：1.0 或 2.5 μg/kg
给药途径：静脉注射（iv）（iv）推注；5 秒内
实验结果：2.5 μg/kg 剂量不会显著改变对照组兔子的心率或心力衰竭兔子的平均动脉血压。2.5 μg/kg 剂量在 6 只心力衰竭兔子中的 4 只中引起室性心律失常，包括室性早搏 (PVC) 和室性心动过速 (VT)（最多 13 次心跳）（而 5 只对照组兔子中无一例出现，p<0.01）。 1μg/kg剂量不会引起心力衰竭兔出现室性心律失常。

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兔心力衰竭模型和心肌细胞分离[3]
在新西兰白兔（雌雄不限）中，采用主动脉瓣关闭不全诱导心力衰竭，2-4周后采用腹主动脉缩窄术（均在异氟烷麻醉下进行），如前所述。³采用二维超声心动图评估心力衰竭的进展。当左心室收缩末期内径超过1.40 cm时，对心力衰竭兔进行研究。^3,5,10此时，对清醒的对照组和心力衰竭兔进行静脉推注Zinterol（1.0或2.5 μg/kg，5秒内）±β2-肾上腺素能受体阻滞剂ICI-118,551（0.2 mg/kg），并监测体表心电图至少3分钟。实验方案已获得伊利诺伊大学芝加哥分校动物研究委员会的批准。按照文献5,10所述方法分离兔左心室肌细胞，在心力衰竭兔中，通过在左心室流出道内充气球囊导管阻断主动脉瓣反流，来模拟主动脉瓣关闭不全时的血液回流。

[1]. Pharmacological actions of a new -adrenoceptor agonist, MJ-9184-1, in anaesthetized cats. Br J Pharmacol. 1972 Nov;46(3):375-85.

[2]. Beta-2 adrenergic activation of L-type Ca2+ current in cardiac myocytes. J Pharmacol Exp Ther. 1997 Nov;283(2):452-61.

[3]. Arrhythmogenic effects of beta2-adrenergic stimulation in the failing heart are attributable to enhanced sarcoplasmic reticulum Ca load. Circ Res. 2008 Jun 6;102(11):1389-97.

心力衰竭（HF）中的室性心动过速可由非折返机制启动，例如延迟后去极化。在心律失常兔HF模型中，我们发现异丙肾上腺素可在体内诱发室性心动过速，并在HF心肌细胞中引起后收缩和瞬时内向电流。为了确定β2-肾上腺素能受体（β2-AR）刺激是否参与其中，我们进行了体内药物输注、体外心肌细胞和生化研究。静脉注射Zinterol（2.5 μg/kg）可导致室性心律失常，包括6只HF兔中有4只出现持续时间长达13次的室性心动过速（而5只对照组中无一例出现，P<0.01），该作用可被β2-AR拮抗剂ICI-118,551（0.2 mg/kg）阻断。在电场刺激（0.5～4 Hz，37℃）的心肌细胞中，β2-肾上腺素能受体（β2-AR）刺激（1 μmol/L zinterol + 300 nmol/L β1-AR拮抗剂CGP-29712A）可诱导88%的心力衰竭（HF）心肌细胞出现后收缩和Ca2+瞬变，而对照组心肌细胞中未观察到此现象（P<0.01）。在HF心肌细胞（而非对照组）中，β2-AR刺激可增加Ca2+瞬变幅度（增加29%）、肌浆网（SR）Ca2+负荷（增加28%）、细胞内Ca2+浓度（[Ca2+]i）下降速率（增加28%；n=12，所有P<0.05）以及磷蛋白Ser16位点的磷酸化水平，但Ca2+电流未发生改变。所有这些效应均可被ICI-118,551（100 nmol/L）阻断。尽管心力衰竭兔左心室中总β-肾上腺素能受体（β-AR）表达量降低了47%，但β2-AR数量未发生改变，表明心力衰竭中β2-AR依赖的肌浆网钙摄取和心律失常发生作用更强。人心力衰竭心肌细胞表现出类似的β2-AR诱导的后收缩、后瞬变，以及增强的钙瞬变幅度、肌浆网钙负荷和单次收缩[Ca](i)下降速率。因此，β2-AR刺激在心力衰竭中具有致心律失常作用，其机制是通过肌浆网钙超载诱导的自发性肌浆网钙释放和后收缩。[3] 辛特罗尔（Zinterol）已被用于许多β2-AR研究，但高剂量（例如10⁻⁵M）的辛特罗尔也可能刺激β1-AR。因此，我们的大部分研究都是在β1-肾上腺素能受体拮抗剂CGP 20712A存在的情况下使用zinterol进行的（在体内研究中，我们发现β1-肾上腺素能受体阻滞剂在心力衰竭兔模型中并非总能引起良好的血流动力学耐受性，因此这种方法较为困难）。在一些体外研究中，我们也单独使用了zinterol，并发现其结果与zinterol+CGP组相当。这表明，在所用剂量下，zinterol的作用主要归因于β2-肾上腺素能受体的刺激（zinterol可能通过β1-肾上腺素能受体轻微增加ICa）。总的来说，特异性β2-肾上腺素能受体阻滞剂ICI-118,551能够逆转zinterol的作用，这支持了我们关于β2-肾上腺素能受体诱导作用的结论。Wang等人¹⁴报道，层粘连蛋白包被的盖玻片上的心肌细胞对zinterol表现出更高的β2-肾上腺素能受体反应性。我们的研究结果表明，在体内和体外（无论是在层粘连蛋白包被的盖玻片上还是在未包被层粘连蛋白的玻璃盖玻片上），β2-肾上腺素能受体刺激均能增强心律失常的发生，这提示层粘连蛋白并非混杂因素。此外，层粘连蛋白可能有助于模拟完整组织中涉及层粘连蛋白和整合素相互作用的细胞外蛋白环境。

C19H27CLN2O4S

414.946683168411

414.138

C, 55.00; H, 6.56; Cl, 8.54; N, 6.75; O, 15.42; S, 7.73

38241-28-0

Zinterol;37000-20-7

37989

White to off-white solid powder

574.3ºC at 760 mmHg

301.1ºC

4.754

107.04

5

6

8

27

526

0

Cl.S(C)(NC1=C(C=CC(=C1)C(CNC(C)(C)CC1C=CC=CC=1)O)O)(=O)=O

LVNUBJDWJFOMKH-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C19H26N2O4S.ClH/c1-19(2,12-14-7-5-4-6-8-14)20-13-18(23)15-9-10-17(22)16(11-15)21-26(3,24)25;/h4-11,18,20-23H,12-13H2,1-3H3;1H

N-[2-hydroxy-5-[1-hydroxy-2-[(2-methyl-1-phenylpropan-2-yl)amino]ethyl]phenyl]methanesulfonamide;hydrochloride

Zinterol HCl; ZINTEROL; 37000-20-7; Zinterol [INN]; Zinterolum; Zinterolum [INN-Latin]; N-[2-hydroxy-5-[1-hydroxy-2-[(2-methyl-1-phenylpropan-2-yl)amino]ethyl]phenyl]methanesulfonamide; UNII-7167N7AJJR; 7167N7AJJR; Zinterol hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL (~120.50 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。