| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Click chemistry reagent; unnatural amino acid
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| 体外研究 (In Vitro) |
使用无细胞蛋白合成（CFPS）技术时，含有4-叠氮基-L-苯丙氨酸或对丙炔氧基-L-苯丙氨酸（pPaF）的修饰可溶性超折叠绿色荧光蛋白（sfGFP）在CFPS溶液中的积累量为0.9-1.7 mg/mL [1]。
本研究利用无细胞蛋白合成平台，将pAzF位点特异性地掺入超折叠绿色荧光蛋白（sfGFP）中。采用这种新方法（同时生产正交tRNA和修饰蛋白），16小时后，含有pAzF或pPaF的修饰可溶性sfGFP的积累量为0.9-1.7 mg/mL，对应的抑制效率为50-88%。含有 pAzF 的 sfGFP 蛋白的比活性和可溶性产量与在测试位点含有 pPaF 的 sfGFP 蛋白相似 [1]。 66 位点含有 pAzF 的 sfGFP 的荧光消失；92 位点的取代使荧光降低了 60-70%；其他取代并未显著改变比活性（降低 ≤20%）[1]。 |
| 酶活实验 |
除非另有说明，25 微升 PANOx SP 反应溶液包含：10 mM 谷氨酸铵、20 mM 谷氨酸镁、175 mM 谷氨酸钾、1.2 mM ATP、0.86 mM CMP、0.86 mM GMP 和 0.86 mM UMP、10 mM 磷酸氢二钾、34 μg/ml 亚叶酸、171 μg/ml 大肠杆菌 tRNA、33 mM 磷酸烯醇式丙酮酸 (PEP)、1.5 mM 亚精胺、1 mM 腐胺、0.33 mM 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NAD)、0.27 mM 辅酶 A、2.7 mM 草酸钠、20 种氨基酸各 2 mM、5 μM L-[14C(U)]-亮氨酸、2 mM对叠氮基-L-苯丙氨酸 (pAzF) 或 4 mM 对炔丙氧基-L-苯丙氨酸 (pPaF)、0.3 mg/ml pAzFRS 或 0.5 mg/ml pPaFRS（制备方法如上所述）、100 μg/ml T7 RNA 聚合酶、6 nM sfGFP 质粒、0.2 mg/ml 线性化 o-tRNA 或 o-tRNAopt 质粒模板，以及 0.24 体积的标准 KC6 提取物或 0.28 体积的正交提取物。谷氨酸盐由 10 倍浓缩 (10×) 溶液稀释而成。类似地，10× NTMP Master Mix 溶液包含 ATP、三种 NMP、亚叶酸和大肠杆菌 tRNA，并用磷酸氢二钾调节 pH 至 7.3。天然氨基酸由浓度为 50 mM 的储备液稀释而成。该储备液的制备方法如下（以单字母代码表示）：R、V、W、F、I、L、C、M、A、N、D、E、G、Q、H、K、P、S、T、Y。制备过程中，除酪氨酸外，确保每种氨基酸在加入下一种氨基酸之前均已溶解；酪氨酸最后加入，并悬浮于溶液中。除非另有说明，反应均在 30°C 下孵育 16 小时。含有 pAzF 的 CFPS 反应在暗室中进行，盛放反应溶液的试管用铝箔包裹，以防止芳香叠氮化物发生光解离[1]。
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| 细胞实验 |
如前所述，正交S30细胞提取物由携带pDule-tRNA质粒的KC6细胞制备。均质化后裂解液未进行稀释。该KC6/o-tRNA培养物在分批培养中的比生长速率为0.57 h⁻¹。标准KC6提取物的制备方法如前所述。均质化后，每毫升裂解液加入0.2毫升S30缓冲液（14 mM乙酸镁、60 mM乙酸钾、10 mM Tris-乙酸，pH 8.2），并将稀释后的裂解液在4℃下用100倍体积的S30缓冲液透析4次，每次30分钟。最后，将S30细胞提取物在4℃下以10000 g离心20分钟，取上清液分装，速冻后储存于-80℃。在补料分批发酵过程中，KC6 培养物的比生长速率为 0.96 h−1[1].
无细胞蛋白质合成 (CFPS) 反应采用 PANOx SP 系统进行。反应溶液（25 μL）包含：10 mM 谷氨酸铵、20 mM 谷氨酸镁、175 mM 谷氨酸钾、1.2 mM ATP、0.86 mM CMP、0.86 mM GMP 和 0.86 mM UMP、10 mM 磷酸氢二钾、34 μg/mL 亚叶酸、171 μg/mL 大肠杆菌 tRNA、33 mM 磷酸烯醇式丙酮酸 (PEP)、1.5 mM 亚精胺、1 mM 腐胺、0.33 mM 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NAD)、0.27 mM 辅酶 A、2.7 mM 草酸钠、20 种天然氨基酸各 2 mM、5 μM [14C(U)]-亮氨酸、2 mM 对叠氮基-L-苯丙氨酸 (pAzF)。 0.3 mg/mL pAzFRS（pAzF 特异性合成酶）、100 μg/mL T7 RNA 聚合酶、6 nM sfGFP 质粒、0.2 mg/mL 线性化正交 tRNA（或 o-tRNAopt）质粒模板，以及 0.24 倍体积的标准 KC6 提取物或 0.28 倍体积的正交提取物。反应在 30°C 下孵育 16 小时。含有 pAzF 的 CFPS 反应在暗室中进行，试管用铝箔包裹以防止芳香叠氮化物发生光解离 [1]。 含有 pAzF 的修饰 sfGFP 蛋白通过 [14C]-亮氨酸放射性标记进行定量。总蛋白和可溶性蛋白浓度通过三氯乙酸沉淀和闪烁计数法测定。全长蛋白的含量通过SDS-PAGE放射自显影图的密度分析测定。抑制效率定义为修饰全长蛋白产量与天然sfGFP蛋白产量的比值[1]。 为了进行荧光表征，在无细胞蛋白合成系统（CFPS）中生产sfGFP蛋白（天然的或在各个位置用pAzF修饰），通过链霉亲和层析纯化，并进行透析。在485 nm激发波长下，测量523–548 nm范围内的荧光强度，并通过荧光强度除以蛋白浓度计算比活性（AU/ng）[1]。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
4-叠氮基-L-苯丙氨酸是一种具有L构型的4-叠氮基苯丙氨酸。它可用作生物正交点击化学试剂。它是4-叠氮基苯丙氨酸和L-苯丙氨酸的衍生物，也是4-叠氮基-D-苯丙氨酸的对映异构体。
对叠氮基-L-苯丙氨酸（pAzF）是一种含有叠氮基团的非天然氨基酸。它可以利用源自詹氏甲烷球菌（Methanocaldococcus jannaschii）的正交tRNA/氨酰tRNA合成酶对，定点掺入蛋白质中。含有 pAzF 的蛋白质可通过铜(I)催化的叠氮-炔环加成反应（点击化学）直接偶联[1]。 本研究开发了一种新型无细胞平台，利用锤头状核酶（转酶法）同时合成正交 tRNA 和修饰蛋白。该方法可高效合成含有 pAzF 或 pPaF 的 sfGFP（0.9–1.7 mg/mL），抑制效率达 50–88%。正交 tRNA 可由线性化质粒或粗 PCR 产物制备。该平台具有模块化设计，可用于引入 30 多种非天然氨基酸[1]。 |
| 分子式 |
C9H10N4O2
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|---|---|
| 分子量 |
206.205
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| 精确质量 |
206.08
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| 元素分析 |
C, 52.42; H, 4.89; N, 27.17; O, 15.52
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| CAS号 |
33173-53-4
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| 相关CAS号 |
4-Azido-L-phenylalanine hydrochloride;34670-43-4
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| PubChem CID |
3080772
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| 外观&性状 |
Typically exists as white to yellow solids at room temperature
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| LogP |
1.735
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| tPSA |
113.07
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
15
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| 分子复杂度/Complexity |
267
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
O([H])C([C@]([H])(C([H])([H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])N=[N+]=[N-])N([H])[H])=O
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| InChi Key |
NEMHIKRLROONTL-QMMMGPOBSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C9H10N4O2/c10-8(9(14)15)5-6-1-3-7(4-2-6)12-13-11/h1-4,8H,5,10H2,(H,14,15)/t8-/m0/s1
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| 化学名 |
p-Azido-L-phenylalanine
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| 别名 |
pAzF; H-4-Azido-Phe-OH; 4-Azido-L-phenylalanine; L-Phe(4-azido)-OH; 4-Azido-L-phenylalanine; 33173-53-4; H-P-AZIDO-PHE-OH; 4-Azidophenylalanine; (S)-2-Amino-3-(4-azidophenyl)propanoic acid; p-azidophenylalanine; p-azido-l-phenylalanine; (2S)-2-amino-3-(4-azidophenyl)propanoic acid;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O : ~25 mg/mL (~121.24 mM)
DMSO : ~5 mg/mL (~24.25 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 4.8494 mL | 24.2471 mL | 48.4943 mL | |
| 5 mM | 0.9699 mL | 4.8494 mL | 9.6989 mL | |
| 10 mM | 0.4849 mL | 2.4247 mL | 4.8494 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
奈莫雷生盐酸盐
E55888 HCL
FITC-Dextran (MW 110000)
FITC-Dextran (MW 2000000)
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COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
