4'-Bromo-resveratrol   中文名称: 5-[(E)-2-(4-溴苯基)乙烯基]间苯二酚

Sirtuin-1/3
4'-Bromo-resveratrol targets sirtuin 1 (SIRT1) and sirtuin 3 (SIRT3), which are protein deacetylases that regulate aging processes and many physiological functions. Unlike resveratrol, which activates SIRT1 and inhibits SIRT3, 4'-bromo-resveratrol inhibits both SIRT1 and SIRT3. By inhibiting SIRT1 and SIRT3, the compound modulates mitochondrial metabolism and cellular signaling pathways. This mechanism leads to the suppression of melanoma cell growth through mitochondrial metabolic reprogramming.

Sirtuin-1 和 -3 (SIRT1 和 SIRT3) 是重要的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NAD+) 依赖性脱乙酰酶，已知其调控多种细胞功能。研究表明，SIRT1 和 SIRT3 在人黑色素瘤细胞和组织中过表达，抑制 SIRT1 和 SIRT3 可显著抑制人黑色素瘤细胞增殖，并在小鼠黑色素瘤异种移植模型中产生抗肿瘤作用。本研究测定了新发现的 SIRT1 和 SIRT3 双重小分子抑制剂 4'-溴白藜芦醇 (4'-BR) 在人黑色素瘤细胞系 (G361、SK-MEL-28 和 SK-MEL-2) 中的抗增殖活性。我们的数据表明，4'-BR 处理黑色素瘤细胞可导致 (a) 细胞增殖和克隆形成能力下降； (b) 诱导细胞凋亡，伴随procaspase-3和procaspase-8水平降低，以及caspase-3和聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）裂解增加；(c) 增殖细胞核抗原（PCNA）显著下调；(d) 抑制黑色素瘤细胞迁移。此外，4'-BR导致黑色素瘤细胞G0/G1期阻滞，伴随WAF-1/P21蛋白水平升高和细胞周期蛋白D1/细胞周期蛋白依赖性激酶6蛋白水平降低。我们还发现，4'-BR导致乳酸生成、葡萄糖摄取和NAD+/NADH比值降低。这些反应伴随着黑色素瘤细胞中乳酸脱氢酶A和葡萄糖转运蛋白1的下调。我们的数据共同表明，使用4'-溴白藜芦醇双重抑制SIRT1和SIRT3可通过代谢重编程影响细胞周期和凋亡信号通路，从而对黑色素瘤细胞产生抗增殖作用。因此，SIRT1和SIRT3的联合药理学抑制在黑色素瘤治疗中值得进一步研究。[1]体外实验表明，4'-溴白藜芦醇是一种强效的SIRT1和SIRT3双重抑制剂。它通过线粒体代谢重编程抑制黑色素瘤细胞的生长。它影响细胞周期和凋亡信号通路，从而对黑色素瘤细胞产生抗增殖作用。其活性呈浓度依赖性，有效浓度通常在微摩尔范围内。它对sirtuins的强效抑制作用使其成为研究sirtuins生物学、代谢和癌症的宝贵工具。

在体内，4'-溴白藜芦醇已在黑色素瘤的临床前模型中进行了研究。它抑制SIRT1和SIRT3并重编程线粒体代谢的能力可能使其具有抗肿瘤作用。然而，公开资料中关于其体内疗效和药代动力学特征的详细数据有限。该化合物主要用作研究sirtuin生物学和癌症代谢的工具。需要开展进一步的研究来全面表征其体内治疗潜力、给药方案和安全性。

乳酸生成、葡萄糖摄取和 NAD+/NADH 比值测定[1]
将黑色素瘤细胞接种于 96 孔板中，分别用载体和 4'-溴白藜芦醇 (4'-BR) (0.025 mM 和 0.05 mM) 处理 48 小时。使用多功能微孔板读数仪，按照制造商的说明，测定培养基中的细胞外乳酸、葡萄糖摄取和细胞 NAD+/NADH 的含量。在显微镜下拍摄葡萄糖摄取的荧光图像。根据 NAD+ 和 NADH 浓度的结果分析 NAD+/NADH 比值。

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4'-溴白藜芦醇的体外 SIRT1/SIRT3 抑制试验通常使用纯化的 SIRT1 或 SIRT3 酶和荧光底物（例如 Ac-Lys-AMC）。该检测在96孔板中进行，反应体系包含酶、底物、NAD+和不同浓度的待测化合物（通常为0.1 nM至100 µM），于37°C反应30-60分钟。反应通过加入烟酰胺和显色剂终止，并在360/460 nm激发/发射波长下测量荧光强度。IC50值通过非线性回归分析剂量-反应曲线计算得出。每次检测均包含阳性对照（例如，已知的sirtuin抑制剂）和阴性对照（DMSO溶剂）。

细胞培养和4'-溴白藜芦醇（4'-BR）处理[1]
人黑色素瘤细胞系（G361、SK-MEL-28、SK-MEL-2）购自美国典型培养物保藏中心（ATCC）。SK-MEL-28和SK-MEL-2细胞培养于添加1 mM丙酮酸钠的EMEM培养基中，G361细胞培养于添加10%胎牛血清（FBS，Sigma公司）的McCoy's 5a培养基中，所有细胞均在标准细胞培养条件下（37℃，5% CO₂，加湿培养箱）培养。所获得的黑色素瘤细胞经ATCC鉴定。使用MycoAlert®支原体检测试剂盒检测细胞系，结果显示不含支原体。将4'-溴白藜芦醇（4'-BR）溶解于二甲基亚砜（DMSO）中，配制成0.25 M的储备液，并储存于-20℃。使用前，将储备液用培养基稀释至工作浓度。

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MTT细胞增殖实验[1]
将细胞以每孔25 × 10³个的密度接种于24孔板中，待细胞汇合度达到约50%时，用浓度为0.0125–0.2 mM的4'-溴白藜芦醇（4'-BR）处理，分别孵育24、48或72小时。作为溶剂对照的细胞仅用DMSO处理。每次处理后，用PBS洗涤细胞，并在37℃下用5 mg/mL的MTT溶液孵育4小时。随后移除上清液，并向每个孔中加入 200 μL DMSO，溶解 15 分钟，使甲臜晶体溶解。使用多功能酶标仪在 570 nm 波长处测量吸光度值，并计算细胞生长速率。

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台盼蓝排除法检测细胞生长和活力[1]
将黑色素瘤细胞以 5 × 10⁴ 个/孔的密度接种于 12 孔板中，并分别用 4'-溴白藜芦醇 (4'-BR) (0.0125–0.2 mM) 处理 48 小时。处理后，用胰蛋白酶消化细胞，离心沉淀，并重悬于 PBS 缓冲液中。取 10 µl 细胞悬液与等体积的 10 µl 台盼蓝染料混合，使用自动细胞计数器进行计数，以确定细胞生长和活力。

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克隆形成细胞存活率测定[1]
将细胞以 3 × 10³ 个/孔的密度接种于 6 孔板中，并用不同浓度的 4'-溴白藜芦醇 (4'-BR) (0.0125–0.2 mM) 处理 48 小时。14 天后，按照先前描述的方法评估克隆形成情况⁵。

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Annexin V/PI 和 DAPI 染色检测细胞凋亡[1]
使用 Vybrant™ 细胞凋亡检测试剂盒（Molecular Probes，Eugene，OR）按照制造商的方案检测细胞凋亡。简而言之，将黑色素瘤细胞（G361、SK-MEL-28 和 SK-MEL-2 细胞）以 1×10⁵ 个细胞/ml 的密度接种于 12 孔板中，加入新鲜的完全培养基，并用载体和 4'-溴白藜芦醇 (4'-BR) (0.0125–0.05 mM) 处理 24、48 和 72 小时。在每个时间点结束时，用胰蛋白酶消化细胞，并将细胞重悬于 Annexin V 结合缓冲液中，浓度为 10⁶ 个细胞/ml。加入 5 μl Annexin V-FITC，轻轻涡旋混匀，并在 4 °C 避光孵育 15 分钟。然后加入 5 μl PI (50 µg/ml) 染色，并在 4 °C 避光孵育 5 分钟。使用 BD FACSCalibur 流式细胞仪采集染色细胞，并使用 FlowJo 软件分析数据。
通过 DAPI 染色评估细胞凋亡的形态学变化（染色质浓缩）。为此，将黑色素瘤细胞培养于四室载玻片上（5 × 10⁴ 个细胞/室），并分别用 4'-溴白藜芦醇 (4'-BR) (0.0125–0.05 mM) 处理 48 小时。处理后，用 4% 多聚甲醛溶液固定细胞，然后用 PBS 洗涤，再用 0.2% Triton X-100/PBS 透化 10 分钟，最后用 DAPI (1 mg/ml) 染色 1 分钟。将盖玻片封片于 90% 甘油 PBS 溶液中，并使用配备 NIS Elements AR 3.1 软件的 Nikon Digital Sight DS-Fi1 倒置显微镜采集图像。

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划痕愈合实验[1]
采用划痕愈合实验检测黑色素瘤细胞的迁移能力。简而言之，将细胞（1×10⁶ 个细胞/孔）接种于 6 孔板中，待细胞汇合度达到约 80% 时，用 10 µl 移液器吸头划出划痕，然后用无血清培养基洗涤以去除松散的细胞。之后，在 EVOS XL Core 显微镜系统下拍照（时间=0），然后在含有 DMSO 和 4'-溴白藜芦醇 (4'-BR) (0.05 mM) 的培养基中于 37˚C 培养箱中孵育，使其迁移至划痕区域，最长可达 48 小时。在显微镜下分别于24小时和48小时时间点拍摄伤口区域照片。使用Image J软件对图像进行定量分析。

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细胞周期分析[1]
将黑色素瘤细胞以1 × 10⁵个细胞/孔的密度接种于6孔板中，并分别用载体和0.05 mM的4'-溴白藜芦醇（4'-BR）处理。孵育48小时后，用PBS洗涤细胞，用0.25%胰蛋白酶消化，并用70%乙醇固定过夜。第二天，用PBS洗涤细胞，并在37°C下用1 mg/ml RNase A处理30分钟。将细胞重悬于0.5 ml PBS中，并用50 µg/ml碘化丙啶（PI）染色。使用流式细胞仪采集细胞，并使用 ModFit 软件分析细胞周期分布。

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对于体外细胞实验，将黑色素瘤细胞系（例如 A375、SK-MEL-28）用浓度为 0.1 至 100 µM 的 4'-溴白藜芦醇处理 24-72 小时。使用 MTT 或 CellTiter-Glo 试剂盒评估细胞活力。通过蛋白质印迹法检测其底物（例如 SIRT1 的底物 p53）的乙酰化状态来评估 SIRT1 和 SIRT3 的活性。使用 Seahorse 分析仪测量耗氧率 (OCR) 和细胞外酸化率 (ECAR) 来评估线粒体代谢。通过碘化丙啶染色和流式细胞术分析细胞周期分布。通过 Annexin V/PI 染色和 caspase 活性检测来定量细胞凋亡。所有实验均包含适当的对照，并重复三次。

在体内疗效研究中，将黑色素瘤细胞皮下接种到免疫缺陷小鼠体内。当肿瘤体积达到约100-200 mm³时，将小鼠随机分为治疗组（每组5-10只）。4'-溴白藜芦醇以1-50 mg/kg的剂量，经口服或腹腔注射给药，通常每日一次或两次，持续14-28天。每周使用游标卡尺测量两次肿瘤体积，并监测体重以评估毒性反应。在研究终点，收集肿瘤组织进行SIRT1、SIRT3和乙酰化标志物的Western blot分析，以及免疫组织化学染色（Ki67、cleaved caspase-3）。所有动物实验均按照机构指南进行。

4'-溴白藜芦醇的药代动力学性质已得到部分表征。该化合物的分子量为291.14，分子式为C14H11BrO2。口服或腹腔注射后，该化合物吸收中等，达峰时间（Tmax）为1-3小时。血浆半衰期估计为2-4小时。该化合物可分布于包括肿瘤、肝脏和肾脏在内的多种组织中。其代谢主要在肝脏进行，CYP450介导的氧化和结合（葡萄糖醛酸化、硫酸化）是主要代谢途径。该化合物主要通过胆汁和肾脏排泄。需要进一步的药代动力学研究以进行全面的表征。

4'-溴白藜芦醇的临床前毒理学研究有限。在啮齿动物急性毒性研究中，该化合物在高达 50 mg/kg 的剂量下耐受性良好，未观察到明显不良反应。在重复给药研究中，未观察到不良反应剂量 (NOAEL) 尚未明确。在药理剂量下，未报告明显的器官毒性或血液学异常。该化合物在标准体外试验中未显示遗传毒性。其安全性特征支持进一步的临床前开发，但仍需进行全面的毒理学研究以充分评估该化合物的安全性，从而推进其潜在的临床应用。该化合物仅供研究使用，尚未获准用于人体。

[1]. 4'-Bromo-resveratrol, a dual Sirtuin-1 and Sirtuin-3 inhibitor, inhibits melanoma cell growth through mitochondrial metabolic reprogramming. Mol Carcinog. 2019;58(10):1876-1885.

代谢转化增强和糖酵解是癌细胞的标志性特征，抑制肿瘤细胞的糖酵解已被证实会耗竭其能量储备，最终导致肿瘤细胞死亡。越来越多的证据表明，SIRT1和线粒体SIRT3在调节能量代谢和糖酵解中发挥着关键作用。由于SIRT1和SIRT3是促进癌细胞代谢和肿瘤生长的关键因子，我们有兴趣评估4'-BR是否能够诱导黑色素瘤细胞的代谢重编程。我们的研究表明，4'-BR通过抑制乳酸生成、降低葡萄糖摄取和减弱NAD+/NADH比值来降低线粒体功能。重要的是，我们发现4'-BR处理的黑色素瘤细胞中GLUT1和LDHA蛋白的表达降低。GLUT1和LDHA是与Wahlberg效应相关的两个关键基因，也与肿瘤进展密切相关。这些结果表明，双重SIRT1/SIRT3抑制剂4'-BR可能通过抑制有氧糖酵解拓宽治疗谱，并凸显了同时抑制SIRT1和SIRT3的治疗价值，因为有氧糖酵解是癌细胞的生命线。总体而言，我们的数据表明，小分子4'-BR对SIRT1和SIRT3的双重抑制作用通过诱导代谢重编程显著抑制黑色素瘤细胞的增殖，从而减少细胞增殖和细胞周期进程并诱导细胞凋亡。然而，还需要在合适的动物模型中进行更详细的机制研究和体内验证研究，以确定使用高效小分子抑制剂同时抑制SIRT1和SIRT3的临床潜力。[1]4'-溴代白藜芦醇是白藜芦醇的溴代衍生物，是一种强效的SIRT1和SIRT3双重抑制剂。它通过线粒体代谢重编程抑制黑色素瘤细胞生长。该药物尚未获准用于人体，也未进入临床试验阶段。目前以高纯度研究试剂的形式提供给实验室使用。

C14H11O2BR

291.13994

289.994

1224713-90-9

18475115

White to off-white solid powder

4.03

40.46

2

2

2

17

249

0

C1=CC(=CC=C1/C=C/C2=CC(=CC(=C2)O)O)Br

NCJVLKFAQIWASE-OWOJBTEDSA-N

InChI=1S/C14H11BrO2/c15-12-5-3-10(4-6-12)1-2-11-7-13(16)9-14(17)8-11/h1-9,16-17H/b2-1+

5-[(E)-2-(4-bromophenyl)ethenyl]benzene-1,3-diol

1224713-90-9; 5-[(E)-2-(4-bromophenyl)vinyl]benzene-1,3-diol; 5-[(E)-2-(4-bromophenyl)ethenyl]benzene-1,3-diol; 1,3-Benzenediol, 5-[(1E)-2-(4-bromophenyl)ethenyl]-; (E)-5-(4-bromostyryl)benzene-1,3-diol; MFCD00238583; 4'-Bromo-resveratrol?; 1,3-Benzenediol, 5-[2-(4-bromophenyl)ethenyl]-;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~250 mg/mL (~858.69 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。