| 规格 | 价格 | |
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| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
KRAS(G12D)[DC50 = 37 nM]; Von Hippel-Lindau(VHL
Setidegrasib (Example 8) is a PROTAC-type KRAS degrader targeting the G12D-mutated KRAS protein with a DC50 of 37 nM. The compound recruits the VHL E3 ubiquitin ligase to induce proteasomal degradation of mutant KRAS. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
- ASP3082 能有效诱导KRAS(G12D)蛋白降解,具有显著的选择性。在AsPC-1细胞(KRAS(G12D)突变)中,其降解KRAS(G12D)的DC50为38 nM(95% CI, 14-108 nM)。[2]
- ASP3082 在AsPC-1细胞中抑制ERK磷酸化的IC50为14 nM(95% CI, 8-23 nM),抑制细胞增殖的IC50为19 nM(95% CI, 13-30 nM)。[2] - 选择性分析显示,ASP3082 在携带KRAS(G12D)突变的癌细胞(AsPC-1, HPAC, PK-59)中降解KRAS(G12D),而在A375细胞(KRAS野生型)中仅在较高浓度(1 µM)下观察到部分野生型KRAS降解。[2] - 在3D细胞活力测定中,ASP3082 对多种KRAS(G12D)突变癌细胞系(PK-59, HPAC, GP2d, GP5d)显示出生长抑制作用,IC50值范围为3.6至29 nM。相比之下,其对KRAS野生型癌细胞系(A375, HT-29, BxPC-3, COLO-320)的抑制作用仅在较高浓度下观察到(IC50 > 10 µM)。对不同KRAS突变的响应顺序为:12D > 12C, 12V > 13D > 12R,野生型。[2] - 在AsPC-1细胞中进行的蛋白质组学分析显示,ASP3082 处理后,KRAS(G12D)和MAPK依赖基因DUSP4选择性减少,而超过9000种其他非KRAS蛋白未见显著减少。[2] - 机制研究证实,ASP3082 诱导的KRAS(G12D)降解由蛋白酶体介导(因为降解可被蛋白酶体抑制剂MG-132挽救),并由E3连接酶VHL介导(因为不结合VHL的epi-ASP3082阻断了降解,且在VHL敲低条件下降解被部分抑制)。[2] - 与GDP结合的KRAS(G12D)抑制剂(化合物6)的比较显示,ASP3082 对GTP结合的KRAS、p-ERK、p-AKT和p-S6的抑制作用随时间推移更为持久,并且在单次添加化合物后1-3天内,细胞系中的总KRAS(G12D)蛋白几乎完全降解。[2] Setidegrasib具有诱导G12D突变KRAS蛋白降解的优异活性和抑制G12D突变的KRAS的活性,可以用作癌症的治疗剂。 在转移性胰腺癌细胞系AsPC-1中,Setidegrasib表现出优异的降解活性,多数化合物DC50与IC50值低于10 nM。细胞实验显示其对G12D突变KRAS的选择性显著高于野生型KRAS。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
- 在PK-59胰腺癌异种移植模型(KRAS(G12D)突变)中,单次静脉注射ASP3082导致肿瘤中剂量依赖性的KRAS(G12D)降解。最大降解在给药后24小时观察到(10 mg/kg剂量下降解82%,30 mg/kg剂量下降解93%),降解效果持续至少48小时。[2]
- 在同一模型中,ASP3082 以10和30 mg/kg的剂量每周一次静脉给药,诱导了显著的肿瘤消退(第21天分别消退18%和63%)。该化合物耐受性良好,在最高剂量(30 mg/kg)下未观察到体重减轻或其他明显毒性。[2] - 在多种其他携带KRAS(G12D)突变的胰腺癌(AsPC-1, HPAC, PK-1)、结直肠癌(GP2d, GP5d)和肺癌(NCI-H358)的CDX模型,以及肺癌的PDX模型(LXFA 1125, LXFA 2204)中,ASP3082 以每周一次或两次的频率给药,均显示出强效的抗肿瘤活性并诱导肿瘤消退。[2] 在胰腺癌PK-59细胞株皮下荷瘤小鼠模型中,静脉注射Setidegrasib两次后(具体给药方案未公开),肿瘤抑制率达到98% |
| 酶活实验 |
- 表面等离子体共振(SPR)生物传感器分析:
- 与KRAS(G12D)的二元结合: 将生物素化的Avi-KRAS(G12D)蛋白固定在传感器芯片上。将递增浓度的待测化合物以单循环或多循环模式注入芯片表面。计算结合速率常数(ka)、解离速率常数(kd)和解离常数(KD)。对于ASP3082,其与KRAS(G12D)的二元结合KD为56 nM(95% CI, 39-81 nM)。[2]
- 与VHL的二元结合: 将带His标签的VHL/ElonginC/ElonginB(VCB)复合物固定在NTA传感器芯片上。注入待测化合物以评估结合。对于ASP3082,其与VHL的二元结合KD为7.5 nM(95% CI, 3.5-16 nM),解离速率常数(kd)为2.1 × 10⁻³ s⁻¹(95% CI, 1.6-2.7 × 10⁻³ s⁻¹)。[2] - 三元复合物形成: 将一系列待测化合物稀释液与VCB预混合,然后以单循环模式注入固定有KRAS(G12D)的芯片上。这允许测量三元复合物的亲和力(KD)。对于ASP3082,其三元结合KD为0.95 nM(95% CI, 0.61-1.5 nM),kd为4.4 × 10⁻⁴ s⁻¹(95% CI, 1.6-12 × 10⁻⁴ s⁻¹)。[2] - 无细胞TR-FRET试验(KRAS-RAF PPI抑制): 使用时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)试验来测量KRAS(G12D)与cRAF之间蛋白-蛋白相互作用的抑制。该试验包括将GDP结合的KRAS(G12D)与SOS孵育以加载GTP,然后加入带GST标签的cRAF、ULight-anti-GST抗体和LANCE Eu-W1024 Streptavidin。测量TR-FRET比值以确定待测化合物的抑制活性。[2] |
| 细胞实验 |
- 细胞ELISA KRAS(G12D)降解试验: 将AsPC-1细胞接种于384孔板中,用不同浓度的待测化合物处理24小时。固定细胞,透化处理后,用抗RAS(G12D)和抗β-肌动蛋白抗体染色,随后用荧光二抗染色。定量荧光信号,并将KRAS(G12D)信号归一化至β-肌动蛋白。从浓度-反应曲线计算DC50值。[2]
- 细胞ELISA ERK1/2磷酸化(p-ERK)试验: 用待测化合物处理AsPC-1细胞2或24小时。固定细胞,透化处理后,用抗p-ERK1/2抗体染色。定量荧光信号,并相对于MEK抑制剂(曲美替尼)对照计算抑制率。计算IC50值。[2] - 体外细胞生长试验: 将细胞接种于低吸附96孔或384孔圆底白板中,次日加入待测化合物。孵育6天后,加入CellTiter-Glo 2.0试剂测量发光值,发光值与细胞活力成正比。计算生长抑制的IC50值。该试验以3D形式进行,以评估非贴壁依赖性生长。[2] - 免疫印迹分析(体外): 用待测化合物处理细胞指定时间。制备细胞裂解液,通过SDS-PAGE分离,并转移至PVDF膜。用一抗(如抗KRAS(G12D)、抗p-ERK、抗总ERK、抗p-AKT、抗p-S6)孵育膜,然后用HRP偶联的二抗孵育。检测化学发光信号以评估蛋白水平。[2] - RAF-RBD下拉试验: 为了检测活性GTP结合的KRAS形式,将细胞裂解液与GST标记的Raf-RBD蛋白和谷胱甘肽颗粒孵育。洗涤后,洗脱结合的蛋白并进行免疫印迹分析以检测KRAS-GTP。[2] - 蛋白质组学分析: 用DMSO或1 µM ASP3082处理AsPC-1细胞4和24小时。收集细胞沉淀,制备蛋白样品用于LC-MS/MS分析。定量蛋白丰度,并计算ASP3082处理样品相对于DMSO对照样品的蛋白丰度百分比,以评估降解选择性。[2] - 使用siRNA的VHL敲低试验: 使用脂质体将抗人VHL siRNA或对照siRNA转染至PK-59细胞。2-3天后,用ASP3082处理细胞24小时。通过细胞ELISA评估KRAS(G12D)降解,以确定降解对VHL的依赖性。[2] |
| 动物实验 |
制剂和给药:ASP3082被配制成溶剂溶液,溶剂由5%葡萄糖溶液、4%乙醇、0.5% (2-羟丙基)-β-环糊精 (HP-β-CD) 和9%氢化蓖麻油40 (HCO 40) 组成。该化合物以不同剂量进行静脉注射 (iv),给药方案包括每周一次或每周两次。[2]
- PK-59异种移植模型中的药代动力学/药效学研究:将PK-59细胞皮下植入雄性裸鼠体内。当肿瘤达到合适大小后,小鼠分别接受单次静脉注射,注射的溶剂、10 mg/kg或30 mg/kg的ASP3082。分别于给药后 2、6、24、48、72 和 144 小时,从每组三只小鼠中采集血液、肿瘤和胰腺组织,用于药代动力学和药效学分析。[2] - CDX 模型中的抗肿瘤疗效研究:将多种癌细胞系(例如 PK-59、AsPC-1、HPAC、GP2d)皮下植入雄性裸鼠体内。根据肿瘤体积将小鼠随机分组,并每周一次(例如,第 1、8、15 天)或两次静脉注射载体或 ASP3082。每周两次测量肿瘤体积和体重,以评估疗效和耐受性。 [2] - PDX模型中的抗肿瘤疗效研究:将患者来源的异种移植(PDX)肿瘤(例如,LXFA 1125、LXFA 2204)皮下植入裸鼠体内。小鼠每周静脉注射一次载体或ASP3082。评估肿瘤生长抑制和消退情况,并收集肿瘤样本进行KRAS(G12D)蛋白水平的免疫组织化学分析。[2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
由安斯泰来制药公司开发的Setidegrasib是一种喹唑啉连接的(4R)-4-羟基-L-脯氨酰胺PROTAC化合物。其化学结构由三个模块化部分组成:KRAS G12D靶向活性基团(蓝色)、连接基团(黑色)和VHL募集基团(粉色)。该专利强调,分子红色方框区域的细微变化(图8与图39)会显著影响体内疗效,这可能是由于药代动力学差异所致。
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| 分子式 |
C60H65FN12O7S
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|---|---|
| 分子量 |
1117.30
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| 精确质量 |
1116.48
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| 元素分析 |
C, 64.50; H, 5.86; F, 1.70; N, 15.04; O, 10.02; S, 2.87
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| CAS号 |
2821793-99-9
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| 相关CAS号 |
2821793-99-9
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| PubChem CID |
164875418
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| 外观&性状 |
White to off-white solid
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| LogP |
7.7
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| tPSA |
259
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| 氢键供体(HBD)数目 |
5
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| 氢键受体(HBA)数目 |
17
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| 可旋转键数目(RBC) |
17
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| 重原子数目 |
81
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| 分子复杂度/Complexity |
2130
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| 定义原子立体中心数目 |
6
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| SMILES |
O(C1C2N=C(N=C(N3C[C@@]4([H])NC[C@]3([H])C4)C=2C=C(C2CC2)C=1C1C(=C(C=C2NN=CC=12)F)C)OC1CCOCC1)CC1C=CC(C2N=NN(C=2)[C@@H](C(C)C)C(N2C[C@@H](C[C@H]2C(=O)N[C@H](C2C=CC(C3SC=NC=3C)=CC=2)CO)O)=O)=CC=1
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| InChi Key |
XXWMEQMGQNHRAF-WFJRNIGCSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C60H65FN12O7S/c1-31(2)54(59(77)72-26-41(75)20-50(72)58(76)65-49(28-74)37-11-13-38(14-12-37)56-33(4)63-30-81-56)73-27-48(69-70-73)36-7-5-34(6-8-36)29-79-55-52(51-32(3)46(61)22-47-45(51)24-64-68-47)43(35-9-10-35)21-44-53(55)66-60(80-42-15-17-78-18-16-42)67-57(44)71-25-39-19-40(71)23-62-39/h5-8,11-14,21-22,24,27,30-31,35,39-42,49-50,54,62,74-75H,9-10,15-20,23,25-26,28-29H2,1-4H3,(H,64,68)(H,65,76)/t39-,40-,41+,49-,50-,54-/m0/s1
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| 化学名 |
(2S,4R)-1-((2S)-2-(4-(4-(((4-((1S,4S)-2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptan-2-yl)-6-cyclopropyl-7-(6-fluoro-5-methyl-1H-indazol-4-yl)-2-((tetrahydro-2H-pyran-4-yl)oxy)quinazolin-8-yl)oxy)methyl)phenyl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-3-methylbutanoyl)-4-hydroxy-N-((R)-2-hydroxy-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide
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| 别名 |
KRAS G12D inhibitor 17; ASP-3082;
Setidegrasib; 2821793-99-9; ASP3082; 3NQ4ME292X; RefChem:1098491; setidegrasib [INN]; SCHEMBL26963151;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~125 mg/mL (112 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.8950 mL | 4.4751 mL | 8.9501 mL | |
| 5 mM | 0.1790 mL | 0.8950 mL | 1.7900 mL | |
| 10 mM | 0.0895 mL | 0.4475 mL | 0.8950 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。