hNav1.7 (IC50 = 907 nM); mNav1.7 (IC50 = 387 nM)

电压门控钠通道NaV1.7的强效和选择性拮抗剂为开发新的慢性疼痛疗法提供了一条有前景的途径。我们制备了一种小分子阻转异构体喹诺酮磺酰胺拮抗剂AMG8379和一种活性较低的对映异构体AMG8380。在这里，我们发现AMG8379在全细胞膜片钳电生理学分析中，使用在部分失活状态下询问通道的电压方案，以8.5 nM的IC50有效阻断人类NaV1.7通道，以3.1 nM的IC50有效阻断背根神经节（DRG）神经元中的内源性河豚毒素（TTX）敏感钠通道。AMG8379比其他NaV家族成员具有100至1000倍的选择性，包括肌肉中表达的NaV1.4和心脏中表达的Na V1.5，以及DRG神经元中的TTX抗性NaV通道。使用离体小鼠皮肤神经制剂，AMG8379以时间依赖和剂量依赖的方式阻断了C纤维中机械诱导的动作电位放电。AMG8379同样降低了热诱导C纤维尖峰的频率，而AMG8380既不影响机械响应也不影响热响应[1]。

AMG8379（30-100mg/kg；口服）可减少辣椒素诱导的伤害性反应[1]。在多个NaV1.7依赖性行为终点中评估了AMG8379在小鼠体内的靶向参与。AMG8379剂量依赖性地抑制组胺诱导的皮内抓挠和辣椒素诱导的足底舔舐，并逆转UVB辐射皮肤烧伤诱导的热痛觉过敏；值得注意的是，在相似的血浆暴露水平下，AMG8380没有观察到行为效应[1]。

AMG8379和AMG8380拮抗剂活性[1] AMG8379和AMG8380代表了我们在鉴定亚型选择性NaV1.7抑制剂的过程中发现的一对阻转异构体喹诺酮磺胺类药物（图1A）。另一份报告（Graceffa等人，2017）描述了这类化学物质类药物特性的发现和优化。当在PatchXpress上通过自动膜片钳电生理学进行评估时，AMG8379有效地抑制了重组人和小鼠（但不是大鼠）在异源HEK293细胞中表达的NaV1.7通道。。。

动物/疾病模型： C57Bl/6 雄性小鼠 [1]
剂量： 100 mg/kg
给药途径： 口服
实验结果： 未能证明对抓挠行为有统计学意义上的显著影响。

[1]. Pharmacologic Characterization of AMG8379, a Potent and Selective Small Molecule Sulfonamide Antagonist of the Voltage-Gated Sodium Channel NaV1.7. J Pharmacol Exp Ther. 2017 Jul;362(1):146-160.

慢性疼痛是一项亟待满足的重大医疗需求，影响着超过1亿美国人，造成超过5000亿美元的经济损失（美国医学研究所，2011；Holmes，2016）。尽管美国、欧洲和日本等主要市场的疼痛治疗市场规模达数十亿美元，但目前可用的疗法疗效不佳，存在显著的滥用风险，且/或耐受性和安全性低；治疗所需人数（即为使一名患者达到50%或以上疼痛缓解所需的治疗人数）在4到10之间（Nightingale，2012；Finnerup等，2015）。 2009年至2014年间，33种治疗神经性疼痛（一种由躯体感觉系统损伤引起的慢性疼痛，尤其难以治疗）的潜在药物在临床试验中被终止，这凸显了迫切需要寻找新的靶点以及开发新的治疗药物来治疗疼痛（Knezevic等人，2015）。
NaV1.7是一种对河豚毒素（TTX）敏感的电压门控钠离子通道，它调节周围神经系统中伤害感受器神经元的动作电位发放（Klugbauer等人，1995；Cummins等人，1998；Black等人，2012；Dib-Hajj等人，2013）。钠离子通过NaV1.7通道内流产生斜坡电流，该电流能够增强阈下去极化刺激，使其达到触发感觉神经元动作电位所需的阈值。此外，NaV1.7还参与伤害感受器动作电位的上升支（Cummins et al., 1998; Rush et al., 2007; Alexandrou et al., 2016）。除了其表达谱和在动作电位起始中的作用外，由于其在人类遗传学上的充分验证，NaV1.7也是开发慢性疼痛疗法的一个极具吸引力的靶点。功能丧失突变导致先天性痛觉缺失（Cox 等，2006；Goldberg 等，2007），而功能获得突变导致原发性红斑肢痛症、阵发性剧烈疼痛障碍和小纤维神经病变中的疼痛（Yang 等，2004；Fertleman 等，2006；Faber 等，2012）。此外，在小鼠中，特定神经元群中NaV1.7的基因敲除可减轻炎症和神经损伤后的疼痛行为（Nassar等人，2004；Minett等人，2012），而出生时即进行NaV1.7的全身性敲除则会重现人类先天性痛觉缺失的表型（Gingras等人，2014）。NaV1.7一直是研究的重点，旨在寻找用于治疗慢性疼痛的抑制剂（Bagal等人，2014；Sun等人，2014a；de Lera Ruiz和Kraus，2015；Emery等人，2016；Vetter等人，2017）。在这些研究中，磺酰胺类小分子拮抗剂脱颖而出，成为高效且选择性强的化合物，能够阻断NaV1.7，而对同源钠通道（包括心脏中表达的NaV1.5）的阻断效力则显著降低。其机制是通过与位于第四电压传感器结构域内的新型结合口袋结合，使NaV1.7稳定在失活构象，从而阻止通道有效地循环至静息/关闭状态，并降低其后续开放的可能性（McCormack et al., 2013; Sun et al., 2014b; Ahuja et al., 2015; Alexandrou et al., 2016; Focken et al., 2016; Theile et al., 2016）。该化学型对大鼠NaV1.7通道抑制作用较弱，归因于该区域的氨基酸序列差异（McCormack等，2013；Alexandrou等，2016；Focken等，2016）。磺酰胺类化合物与第四电压传感器结构域的特异性相互作用，使其结合位点区别于先前报道的毒素衍生肽、局部麻醉剂和TTX的NaV结合位点（de Lera Ruiz和Kraus，2015）。本文详细描述了新型磺酰胺类NaV1.7拮抗剂AMG8379及其活性显著降低的对映体AMG8380（作为阴性对照）的广泛的体外、离体和体内临床前药理学表征。 AMG8379 是一种强效且选择性的 NaV1.7 抑制剂，可阻断周围神经纤维的动作电位发放，并在可转化的小鼠瘙痒和疼痛模型中显示出疗效，而活性较低的对映体 AMG8380 在相似的血浆浓度下则不具有这些生物学效应。[1]

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AMG8379 是一种强效且选择性的小分子磺酰胺类拮抗剂，可拮抗异源细胞中人源和鼠源（而非大鼠源）的重组 NaV1.7 通道以及小鼠背根神经节 (DRG) 神经元中的天然 NaV1.7 通道。AMG8379 可抑制小鼠皮肤-神经标本中机械和热诱导的 C 纤维动作电位发放，并阻断多种 NaV1.7 依赖性行为，包括组胺诱导的抓挠、辣椒素诱导的舔舐和 UVB 诱导的热痛觉过敏。活性显著降低的对映体 AMG8380……[1]

C25H16CLF2N3O5S

543.93

543.046

C, 55.21; H, 2.97; Cl, 6.52; F, 6.99; N, 7.73; O, 14.71; S, 5.89

1642112-32-0

AMG8379;1642112-31-9;(Rac)-AMG8379;1641574-26-6

117737142

Typically exists as solid at room temperature

4.8

110

1

9

6

37

969

0

COC1=C(C=C(C(=C1)C2=CC(=CC(=C2)Cl)F)F)N3C4=C(C=CC3=O)C=C(C=C4)S(=O)(=O)NC5=NOC=C5

HXQNEKJQBGXFAG-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H16ClF2N3O5S/c1-35-23-12-19(15-8-16(26)11-17(27)9-15)20(28)13-22(23)31-21-4-3-18(10-14(21)2-5-25(31)32)37(33,34)30-24-6-7-36-29-24/h2-13H,1H3,(H,29,30)

1-[4-(3-chloro-5-fluorophenyl)-5-fluoro-2-methoxyphenyl]-N-(1,2-oxazol-3-yl)-2-oxoquinoline-6-sulfonamide

AMG-8380; AMG8380; (Rac)-AMG8379; 1642112-31-9; 1641574-26-6; 1-[4-(3-chloro-5-fluorophenyl)-5-fluoro-2-methoxyphenyl]-N-(1,2-oxazol-3-yl)-2-oxoquinoline-6-sulfonamide; 1642112-32-0; AMG 8380; AMG8,380

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。