| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Notum (IC50 = 6.7 nM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
1,2,3-三唑 (ARUK3001185)的效力优于异构体1,3,4-三唑9a或1,2,3,4-四唑9b（表3）。这些效应似乎相当微妙，因为大多数关键抑制剂- notum相互作用可与这些可选的1-芳基唑进行，可能是由于8l与Trp128的电子相互作用更优，或者仅仅是N4原子是有害的8l (ARUK3001185)苯环对相应的吡啶9c的修饰是等效的，表明棕榈油酸袋中可以容纳一定的极性。8l在三唑的C4和C5位置的双重氘化使d2-8l成为研究母体分子代谢命运的工具。[1]
三唑8l (ARUK3001185)具有与类药物空间一致的理化和分子性质值得注意的是，8l (ARUK3001185)的实测分布系数（LogD7.4 1.3±0.05）远低于计算分配系数（clogP 3.9），尽管在生理相关的ph下未电离。这种分离可能归因于2-Cl， 3-CF3，和芳香环上的4-Cl取代基，当与它们各自的亲脂性片段常数（π）相加时，导致总体疏水表面积的减少。这些结果突出了生成与计算值相关的经验数据的重要性。使用生化试验（IC50 6.7 nM, pIC50 8.2）和测量的亲脂性（LogD7.4 1.3）的Notum抑制对8l (ARUK3001185)对标准设计指标进行评估，计算出8l (ARUK3001185)具有高LE (0.67)， LLE（6.9）和良好的脑穿透预测(CNS MPO 5.4/6.0；BBB评分5.6/6.0)。[1] 三唑8l (ARUK3001185)在磷酸盐缓冲盐水（PBS）中表现出令人满意的水溶性，在MLM和HLM中表现出良好的代谢稳定性，在MDCK-MDR1细胞转运试验中表现出高通透性，P-gp转运体识别和排出的证据很少（表3和支持信息）。相比之下，吡啶9c在渗透性测定中表现不佳，尽管这些结果与低化合物回收率相混淆。比较8l和d2-8l的MLM稳定性（Cli 3.2 vs 5.4 μL/min/mg蛋白），发现三氮唑的氘化作用没有改善，这表明cyp介导的三氮唑C-H键代谢不是该系统清除的主要途径。[1] 基于这些数据，我们从该系列中选择8l (ARUK3001185)作为候选候选药物进行进一步分析，因为它具有Notum活性和体外ADME特性（包括亲脂性）的最佳组合。[1] 然后在额外的体外药理学和ADME筛选中评估铅 (ARUK3001185)（表5）。三唑8l在Notum存在下恢复Wnt信号(EC50 110 nM；n = 4)，在基于细胞的TCF/LEF（荧光素酶）报告基因试验23,26,27中，给出了10 μM的标准s形浓度响应曲线（图S9）。在没有Notum的情况下进行这些实验显示，在所有测试浓度(高达10 μM；n = 4)。Wnt信号的激活是由于8l对Notum的直接靶向抑制，而不是由于实验干扰或细胞毒性（高达10 μM）。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠体内和随后在大鼠体内生成8l (ARUK3001185)的PK数据，以评估血浆和脑暴露（表4和支持信息）。小鼠单次静脉给予8l (ARUK3001185)后，血浆清除率低于肝血流，分布体积适中，消除半衰期为2.4 h（图S3，表S11）。小鼠单次口服后，8l (ARUK3001185)被迅速吸收，并表现出良好的口服生物利用度（66%）（图S4，表S12）。脑内药物水平与血浆中的药物水平相似，证实了良好的脑穿透性（Kp 1.1）。计算游离药物浓度时，脑血浆比为0.77 （Kp,uu）。口服剂量为10 mg/kg，脑内浓度为Cmax≈300 nM（游离药物），超过了基于细胞的TCF/LEF测定的Notum EC50，脑内浓度维持在100 nM以上约4小时。尽管令人鼓舞，但该剂量和由此产生的脑暴露水平可能不足以促进持续的药理学（PD）反应，其中Notum活性在较长时间内降低。这需要根据经验来确定。因此，我们随后探索了替代给药方案，以便在确定啮齿动物疾病模型所需的有效浓度（Ceff）及其与Notum药理学（EC50）的关系方面提供一定的灵活性，即建立PK-PD关系（vide infra）。[1]
8l (ARUK3001185)在大鼠体内的PK评价也显示出较低的血浆清除率和中等的体积分布，半衰期为3.3 h（表4）。大鼠口服吸收、药物水平和脑渗透良好（Kp 1.4）。口服生物利用度最高，Fo为140%。血浆（和脑）浓度-时间图清楚地显示双Cmax峰（图S7），这可能表明排泄药物从胃肠道重吸收和/或对胃排空时间有影响。综上所述，这些结果表明8l (ARUK3001185)具有与啮齿类动物疾病模型评估相一致的PK特性。[1] |
| 酶活实验 |
ADME测定[1]
使用ChemDraw Professional v16.0.1.4（77）计算分子性质。采用摇瓶法测定分布系数LogD7.4。 所选化合物在PBS （pH 7.4）中的水溶性、在MDCK-MDR1细胞系中的转运性能（通透性）以及在MLM和HLM中的代谢稳定性（清除率）进行常规筛选。还筛选了先导化合物8l (ARUK3001185)对代表性CYP450酶的抑制作用、Caco-2细胞单层的通透性以及肝微粒体和肝细胞的代谢稳定性。检测方案和附加数据在辅助信息中给出。在这项工作中报告的ADME研究是由CRO公司独立进行的。 Notum OPTS生化试验[1] 方法在其他地方有详细的描述，在辅助资料中提供了代表性的浓度-响应曲线。 激酶选择性面板[1] 激酶选择性筛选由赛默飞世尔科学公司的SelectScreen生化激酶分析服务进行。检测信息和数据在辅助信息中提供。 |
| 动物实验 |
PK 研究：小鼠和大鼠体内 PK 数据由 Charles River Laboratories（荷兰格罗宁根）、GVK Biosciences（印度海得拉巴）和药明康德（中国上海）独立生成。PK 研究通过开发适合给药途径的制剂，并测定血浆蛋白结合率 (PPB) 和脑组织结合率来计算这些隔室中的游离药物浓度。研究方案和其他数据见补充信息。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
使用助溶剂可显著提高化合物8l (ARUK3001185)的水溶性至1 mg/mL，从而为研究设计带来更大的灵活性。三唑类化合物8l (ARUK3001185)在小鼠、大鼠、犬和人的肝微粒体和肝细胞中均具有良好的稳定性，预示着其在这些物种中的清除率较低。在人肝微粒体中对包括八种细胞色素P450 (CYP450)酶标准底物在内的筛选显示，化合物对1A2 (IC50 0.96 μM)、2B6 (IC50 5.2 μM)、2C9 (IC50 15 μM)和2C19 (IC50 8.1 μM)具有中等/弱的抑制作用，但对2C8、2D6和3A4无抑制作用 (IC50 > 50 μM)。此外，在有或无 NADPH 的情况下，用 8l (ARUK3001185) 预孵育人肝微粒体 (HLM)，随后用离散标记底物孵育（IC50 值变化），结果表明未发现 CYP 时间依赖性失活 (TDI) 的证据。8l (ARUK3001185) 在 Caco-2 单层细胞中的细胞渗透性良好，与良好的肠道吸收一致。8l (ARUK3001185) 的肝细胞数据令人鼓舞，因为从 7y 中删除 -CH2OH 基团似乎消除了该代谢软点的缺陷。因此，8l (ARUK3001185) 被推进到啮齿动物药代动力学 (PK) 研究。[1]
在小鼠体内生成了 8l (ARUK3001185) 的 PK 数据，随后在大鼠体内生成了 PK 数据，以评估血浆和脑暴露量（表 4 和补充信息）。小鼠单次静脉注射8l (ARUK3001185)后，血浆清除率低于肝血流量，分布容积适中，消除半衰期为2.4小时（图S3，表S11）。小鼠单次口服8l (ARUK3001185)后，药物迅速吸收，口服生物利用度良好（66%）（图S4，表S12）。脑组织药物浓度与血浆药物浓度相近（Kp 1.1），证实了良好的脑渗透性。计算游离药物浓度时，脑血浆比为0.77（Kp,uu）。10 mg/kg的口服剂量使脑组织中游离药物浓度达到Cmax ≈ 300 nM，超过了基于细胞的TCF/LEF检测的Notum EC50值，并且脑组织药物浓度在100 nM以上维持约4小时。尽管结果令人鼓舞，但该剂量及其导致的脑暴露水平可能不足以促进持续的药效学 (PD) 反应，即在较长时间内降低 Notum 的活性。这需要通过实验确定。因此，我们随后探索了其他给药方案，以便在啮齿动物疾病模型中灵活确定所需的有效浓度 (Ceff) 及其与 Notum 药理学 (EC50) 的关系，即建立药代动力学-药效学关系（详见下文）。[1] 在大鼠中对8l (ARUK3001185)的药代动力学评估也显示，其血浆清除率低，分布容积中等，半衰期为 3.3 小时（表 4）。大鼠口服给药后，药物吸收良好，药物浓度和脑渗透性均良好 (Kp 1.4)。口服生物利用度超最大，Fo 为 140%。血浆（和脑组织）浓度-时间曲线清晰地显示出双峰Cmax（图S7），这可能表明部分排泄药物被胃肠道重吸收和/或对胃排空时间产生影响。总的来说，这些结果表明8l (ARUK3001185)具有适合在啮齿动物疾病模型中进行评估的药代动力学特性。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
对与Notum棕榈油酸酯口袋结合的芳环上的取代基进行探索，得到了高效的早期先导化合物7y（IC50 9.5 nM），进一步优化三唑基团得到了化合物8l（ARUK3001185）（IC50 6.7 nM）。值得注意的是，高级先导化合物8l可被描述为片段大小的分子（分子量282；HAC 17），具有高配体当量（LE）和配体配体当量（LLE），并且通过优化芳环上的取代基，其对Notum活性的抑制作用提高了15,000倍以上（8l vs 7a）。这些发现凸显了基于片段的药物发现（FBDD）在与合适的药物靶点结合时的优势。 Notum-8l 的 X 射线晶体结构清晰地表明，8l (ARUK3001185) 通过芳环上的 2-Cl-3-CF3-4-Cl 取代基几乎完全占据了棕榈油酸酯口袋。在基于细胞的 TCF/LEF 报告基因检测中，三唑 8l 在 Notum 存在的情况下恢复了 Wnt 信号通路（EC50 为 110 nM），证实了其功能活性。更广泛的脱靶和安全性药理学筛选表明，8l 对丝氨酸水解酶、激酶和代表性药物靶点具有选择性。在小鼠和大鼠中进行的药代动力学研究表明，8l 具有良好的血浆暴露量和脑渗透性，且耐受性良好。总之，三唑 8l (ARUK3001185) 是一种强效且选择性的 Notum 活性抑制剂，具有良好的脑渗透性，适用于啮齿动物疾病模型的口服给药。[1]
Notum 是一种羧酸酯酶，它通过脱酰化 Wnt 蛋白上必需的棕榈油酸酯基团来抑制 Wnt 信号通路。人们对 Notum 在人类疾病（例如结直肠癌和阿尔茨海默病）中的作用有了越来越深入的了解，因此亟需发现更有效的抑制剂，尤其是在神经退行性疾病模型中。本文描述了化合物 8l (ARUK3001185) 的发现及其特性，它是一种高效、选择性强且能穿透血脑屏障的 Notum 抑制剂，适用于啮齿动物疾病模型的口服给药。通过对 Diamond-SGC Poised 化合物库进行晶体学片段筛选，并结合生化酶活性测定对抑制活性进行排序，我们鉴定出化合物 6a 和 6b 为一对优秀的先导化合物。对化合物 6 进行片段开发，最终得到化合物 8l，该化合物在细胞报告基因检测中能够在 Notum 存在的情况下恢复 Wnt 信号通路。药理学筛选评估表明，8l 对丝氨酸水解酶、激酶和药物靶点具有选择性。 |
| 分子式 |
C9H4CL2F3N3
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|---|---|
| 分子量 |
282.049369812012
|
| 精确质量 |
280.973
|
| 元素分析 |
C, 38.33; H, 1.43; Cl, 25.14; F, 20.21; N, 14.90
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| CAS号 |
2411969-39-4
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| PubChem CID |
146438044
|
| 外观&性状 |
Off-white to pink solid powder
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| LogP |
3.5
|
| tPSA |
30.7
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
1
|
| 重原子数目 |
17
|
| 分子复杂度/Complexity |
277
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
N1(C2=CC=C(Cl)C(C(F)(F)F)=C2Cl)C=CN=N1
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| InChi Key |
XVFXHCLMGYJAQI-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C9H4Cl2F3N3/c10-5-1-2-6(17-4-3-15-16-17)8(11)7(5)9(12,13)14/h1-4H
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| 化学名 |
1-[2,4-dichloro-3-(trifluoromethyl)phenyl]triazole
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| 别名 |
ARUK3001185; 2411969-39-4; 1-[2,4-Dichloro-3-(trifluoromethyl)phenyl]triazole; 1-[2,4-bis(chloranyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl]-1,2,3-triazole; CHEMBL5178575; SCHEMBL21792325; XVFXHCLMGYJAQI-UHFFFAOYSA-N; BDBM601033;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~354.55 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.5455 mL | 17.7274 mL | 35.4547 mL | |
| 5 mM | 0.7091 mL | 3.5455 mL | 7.0909 mL | |
| 10 mM | 0.3545 mL | 1.7727 mL | 3.5455 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
AOH-1996
hMAO-B-IN-3
Flupyrimin
阿曲库铵
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