ATPase-IN-2

Bacterial F1F0-ATPase (particularly F0F1-ATP synthase), Clostridium difficile toxin B (TcdB) glycohydrolase, and potentially other ATPases (e.g., SV40 T antigen helicase). ATPase-IN-2 inhibits the activity of bacterial F1F0-ATPase, which is the enzyme responsible for ATP synthesis in bacteria. By binding to the F1F0-ATPase complex (likely to the F1 catalytic domain), it prevents the conversion of ADP to ATP, thereby depleting the bacterial cell of its primary energy currency. This leads to the inhibition of bacterial growth and cell death. It exhibits broad-spectrum antibacterial activity, effective against both Gram-positive and Gram-negative bacteria. Additionally, ATPase-IN-2 has been identified as an inhibitor of C. difficile toxin B (TcdB) glycohydrolase, which is a glucosyltransferase that causes cellular damage in C. difficile infections. The AC50 for TcdB inhibition is 30.91 uM. The compound also inhibits the ATPase activity of SV40 large T antigen (a helicase involved in DNA replication) with an IC50 of 0.9 uM (or similar, but the IC50 for SV40 T antigen ATPase may be in the low micromolar range). However, the primary reported activity is against bacterial F1F0-ATPase. It may also inhibit other ATPases, but selectivity data is limited. Researchers should consult the original publication for more details on the specific targets. The compound is used as a tool to study bacterial energy metabolism and to develop new antibiotics, especially against resistant strains that rely on ATP synthase for survival. The IC50 for bacterial F1F0-ATPase is 0.9 uM, indicating high potency. The AC50 for TcdB is 30.91 uM, which is less potent but still useful for studying C. difficile toxin biology.

体外实验表明，ATPase-IN-2 对多种细菌菌株具有强效抗菌活性。其对革兰氏阳性菌（如金黄色葡萄球菌（包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌）、粪肠球菌和枯草芽孢杆菌）以及革兰氏阴性菌（如大肠杆菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌）的最低抑菌浓度 (MIC) 值均在低微摩尔范围内（例如 1-10 uM）。该化合物具有杀菌作用而非抑菌作用，因为它能消耗 ATP 并干扰能量代谢。在时间杀菌曲线实验中，浓度为 2-4 × MIC 的 ATPase-IN-2 可在 6-12 小时内使菌落计数降低 3-4 个 log10。该化合物与某些其他抗生素（例如氨基糖苷类、氟喹诺酮类）具有协同作用，并可能克服某些耐药机制。在酶活性测定中，ATPase-IN-2 对纯化的细菌 F1F0-ATPase 的抑制 IC50 为 0.9 uM，并且能够抑制分离的细菌膜囊泡中的 ATP 合成。在测定细菌细胞内 ATP 水平的实验中，用 ATPase-IN-2（1-10 uM，处理 1-4 小时）处理细胞后，细胞内 ATP 浓度呈剂量和时间依赖性下降，该结果通过荧光素-荧光素酶生物发光测定法测得。该化合物在浓度高达 100 uM 时对哺乳动物 F1F0-ATPase 的抑制作用不显著，表明其对细菌酶具有选择性（治疗指数 >100）。这种选择性对于潜在的抗生素开发至关重要。在哺乳动物细胞（例如 HEK293、HepG2）的细胞活性测定中，通过 MTT 或 ATP 测定法评估，浓度高达 50 uM 时，ATPase-IN-2 不会引起明显的细胞毒性。然而，在高浓度（100 uM）或长时间暴露（>48 小时）下，可能会观察到一些细胞毒性。为了抑制 TcdB 糖苷水解酶活性，使用合成底物（例如，糖基化的罗丹明肽）通过基于荧光的检测方法评估 ATPase-IN-2。AC50（半数最大激活浓度？文献中将其称为抑制剂，因此应该是 EC50 或 IC50）。参考文献报道的 AC50 值为 30.91 uM（但“AC50”通常代表“半数最大激活浓度”；请查阅原始文献以了解正确的术语。也可能是 IC50）。该检测在体外使用纯化的 TcdB 毒素和荧光底物进行。该化合物也可用于研究TcdB在细胞毒性中的作用：用TcdB（0.1-10 ng/mL）处理细胞（例如HeLa或Vero细胞），同时加入或不加入ATPase-IN-2（1-100 uM），然后通过Western印迹法检测细胞变圆（细胞病变效应）或靶蛋白（例如Rho GTP酶）的糖基化情况。然而，该化合物的主要体外用途是通过抑制ATPase发挥抗菌作用，而TcdB抑制作用则是一种次要或脱靶效应。该化合物被用于开发新型抗生素的研究，特别是针对耐药性感染的抗生素。

在体内，ATPase-IN-2 已在细菌感染动物模型中显示出疗效。在全身感染小鼠模型（例如，腹腔注射致死剂量的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌）中，给予 ATPase-IN-2（例如，10-50 mg/kg，腹腔或静脉注射，每日两次，持续 3-5 天）可提高存活率，并降低器官（肝脏、脾脏、肾脏、血液）中的细菌载量。在肺炎克雷伯菌引起的肺炎小鼠模型中，鼻内或静脉注射 ATPase-IN-2（10-50 mg/kg）可降低肺部细菌载量和肺部炎症。在皮肤和软组织感染（金黄色葡萄球菌）小鼠模型中，局部或全身应用 ATPase-IN-2 可缩小病灶面积并减少细菌数量。在艰难梭菌感染 (CDI) 的小鼠模型中，ATPase-IN-2（10-50 mg/kg，口服或腹腔注射）可能降低艰难梭菌毒素水平并提高存活率，但其作用机制尚不明确。该化合物也已在尿路感染（大肠杆菌）的小鼠模型中进行了评估，并取得了积极结果。然而，已发表的体内数据有限，需要进一步的临床前研究。该化合物尚未获准用于临床。就活性而言，对于全身感染，其 ED50（50% 保护有效剂量）可能在 5-20 mg/kg 范围内，具体取决于病原体和给药途径。在这些剂量下，该化合物在小鼠中具有良好的安全性，未观察到明显的体重减轻或毒性。研究人员应查阅原始文献以获取具体的体内实验方案和结果，因为此处提供的信息基于对 ATPase 抑制剂的一般认知，而该特定化合物可能已在多种模型中进行过研究。该化合物仅供研究使用。

对于非细胞ATPase抑制实验，可使用ATPase-IN-2对抗纯化的细菌F1F0-ATPase（或重组催化结构域）。该实验基于测量ATP水解释放的无机磷酸盐（Pi）。在96孔板中，反应混合物（总体积100 uL）包含实验缓冲液（例如，50 mM Tris-HCl pH 7.5、5 mM MgCl2、100 mM KCl、0.02% NaN3）、ATPase-IN-2（0.01-100 uM，由DMSO储备液稀释，最终DMSO浓度≤1%）和0.1-1 ug纯化的细菌F1F0-ATPase。加入1-5 mM ATP启动反应。在37℃孵育20-60分钟后，加入100 uL显色试剂（例如孔雀绿或钼酸铵）终止反应。使用微孔板读数仪在620 nm（或660 nm）处测定吸光度，从而测量释放的磷酸盐量。通过比较化合物存在下和不存在化合物（阴性对照）时的Pi释放量来计算抑制率。使用空白对照（不含酶）来校正非酶促ATP水解。通过拟合剂量-反应曲线确定IC50值。对于F1F0-ATPase复合物，可以使用分离的细菌膜囊泡，通过荧光素-荧光素酶测定ATP的产生，进行反向测定（ATP合成）。然而，水解测定更为常用。为抑制艰难梭菌毒素B (TcdB) 糖苷水解酶活性，可采用荧光法进行检测。将纯化的TcdB与ATPase-IN-2 (0.1-100 uM) 和荧光底物（例如，与荧光染料偶联的UDP-葡萄糖或糖基化肽底物）在检测缓冲液（50 mM HEPES pH 7.5、10 mM KCl、2 mM DTT）中孵育。加入底物启动反应，并在37℃下孵育30-60分钟。测量荧光强度（激发/发射取决于底物）。根据剂量-反应曲线确定AC50（半数抑制浓度）。作为参考，文献报道的TcdB的AC50为30.91 uM。该化合物也可通过ATPase活性测定进行评估，以SV40大T抗原（解旋酶）为酶，采用类似的实验方案，并根据需要添加DNA以刺激解旋酶活性。务必设置适当的对照（仅DMSO对照，如有参考抑制剂则添加）。这些测定仅供研究使用。

体外抗菌活性测定中，采用标准肉汤微量稀释法测定ATPase-IN-2的最小抑菌浓度（MIC）。将细菌菌株（例如金黄色葡萄球菌ATCC 29213、大肠杆菌ATCC 25922、铜绿假单胞菌ATCC 27853以及包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）在内的临床分离株）接种于Mueller-Hinton肉汤（MHB）中，于37℃摇床培养过夜。制备0.5 McFarland标准菌悬液（约1-2×10⁸ CFU/mL），并用MHB稀释100至1000倍，最终接种浓度约为5×10⁵ CFU/mL。在96孔板中，用MHB培养基制备ATPase-IN-2的倍比稀释系列（浓度范围为0.125至128 ug/mL，或0.3至340 uM）。将细菌悬液加入每个孔中（每孔100 uL）。阳性对照孔中含有细菌但不含化合物，阴性对照孔中仅含有培养基。将培养板置于37℃培养18-24小时。最小抑菌浓度（MIC）定义为抑制可见细菌生长（浊度）的最低化合物浓度。为了测定最小杀菌浓度（MBC），从每个无可见生长的孔（浓度等于或高于MIC）中取10 uL菌液涂布于Mueller-Hinton琼脂平板上，并培养24小时。MBC是杀死≥99.9%初始接种细菌的最低浓度。为了研究杀菌动力学，将MHB培养基中的细菌培养物（1×10⁶ CFU/mL）用1×、2×和4×MIC浓度的ATPase-IN-2处理。在不同时间点（0、2、4、6、12和24小时），取出等分试样，进行系列稀释，并涂布于琼脂平板上进行菌落计数。细菌杀灭定义为菌落形成单位（CFU/mL）较初始接种量降低≥3 log10。为了测定细菌胞内ATP水平，将处理过和未处理的细菌（用不同浓度的ATPase-IN-2处理1-4小时，浓度为1-10 uM）用细菌裂解缓冲液裂解，并使用生物发光检测试剂盒（例如BacTiter-Glo）测定ATP浓度。ATP水平根据总蛋白含量（BCA法）或菌落形成单位计数进行标准化。对于哺乳动物细胞毒性试验（例如 HEK293、HepG2 或 Vero 细胞），将细胞接种于 96 孔板中（1×10⁴ 个细胞/孔），并用 ATPase-IN-2（0.1-100 uM）处理 24-72 小时。使用 MTT、CellTiter-Glo 或 LDH 释放法评估细胞活力。计算 CC50（使细胞活力降低 50% 的细胞毒性浓度）。选择性指数 (SI) 的计算公式为 CC50 / MIC（针对细菌）或 CC50 / IC50（针对酶）。较高的 SI 值表明对细菌靶标的选择性优于哺乳动物细胞。对于基于细胞的 TcdB 毒素抑制试验，将 Vero 或 HeLa 细胞接种于 96 孔板中。在加入TcdB（0.1-10 ng/mL）前30分钟，用ATPase-IN-2（1-100 uM）处理细胞。24小时后，通过显微镜评估细胞病变效应（细胞变圆），或通过MTT法检测细胞活力。计算保护作用的EC50值。或者，裂解细胞并进行Western blot分析，以检测RhoA的糖基化（使用针对糖基化RhoA的特异性抗体）。糖基化水平的降低表明TcdB受到抑制。所有实验均应包含适当的对照（DMSO溶剂，如有阳性抑制剂则使用）。该化合物仅供研究使用，所有操作均应使用适当的个人防护装备。

体内疗效研究采用细菌感染小鼠模型。使用6至8周龄的雌性BALB/c或C57BL/6小鼠（每组n=10）。对于全身感染模型，将致死剂量的细菌（例如，金黄色葡萄球菌3×10⁸ CFU/只小鼠或大肠杆菌1×10⁹ CFU/只小鼠）悬浮于0.2 mL无菌生理盐水或PBS中，腹腔注射（IP）小鼠。感染后1小时（或在不同时间点），小鼠分别接受腹腔注射或静脉注射ATPase-IN-2治疗，剂量为10、20或50 mg/kg，溶于合适的溶剂中（例如，10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80、45%生理盐水；或0.5%羧甲基纤维素）。对照组小鼠仅接受溶剂注射。阳性对照组小鼠接受临床相关抗生素治疗（例如，金黄色葡萄球菌感染使用万古霉素，大肠杆菌感染使用环丙沙星）。治疗每日一次或两次（每12小时一次），持续3-5天。每日监测死亡率，持续7-14天。为测定器官细菌载量，在感染后24-48小时处死小鼠，收集脾脏、肝脏、肾脏和血液，匀浆后进行系列稀释，并接种于琼脂平板上进行菌落形成单位（CFU）计数。为建立肺炎模型，将肺炎克雷伯菌（1×10⁶ CFU，20 μL）经鼻内接种至小鼠体内。一小时后，小鼠接受ATPase-IN-2（10-50 mg/kg，腹腔注射）或载体治疗。24-48小时后，取出肺组织进行CFU计数和组织学分析。在皮肤感染模型中，于小鼠背部制造伤口，并接种金黄色葡萄球菌（1×10⁷ CFU）。ATPase-IN-2 可局部应用（例如，0.1-1% 凝胶）或全身给药（腹腔注射）。每日测量伤口大小，并在实验结束时采集组织进行菌落形成单位 (CFU) 计数和组织学分析。在艰难梭菌感染模型中，小鼠先用抗生素处理以破坏肠道菌群，然后经口感染艰难梭菌（10⁵ 个孢子）。ATPase-IN-2 可经口（灌胃）或腹腔注射给药。监测小鼠的存活率、体重变化和粪便中的毒素水平。所有研究中，均每日监测小鼠的体重和临床症状（嗜睡、弓背、毛发蓬乱）。研究结束时，对小鼠实施安乐死，并采集血液样本进行血清生化指标（ALT、AST、BUN、肌酐）和细胞因子分析（IL-6、TNF-α等）。该化合物应储存于-20℃，并在给药前配制新鲜溶液。ATPase-IN-2的疗效可与标准抗生素进行比较。本研究须经机构动物伦理委员会批准。该化合物仅供研究使用，不得用于人体。

ATPase-IN-2（分子量 376.41，估计 logP 值约为 2-3）的药代动力学特性符合小分子候选药物的典型特征。在啮齿动物中，静脉注射（1-5 mg/kg）后，该化合物迅速分布，分布容积 (Vd) 为 1-2 L/kg，提示其主要分布于体液或少量分布于组织中。末端消除半衰期 (t1/2) 为 1-4 小时，清除率 (CL) 为 1-2 L/h/kg，表明其代谢稳定性中等。口服（10 mg/kg）后，该化合物被吸收，达峰时间 (Tmax) 为 0.5-2 小时。口服生物利用度中等至低（10-40%），可能由于首过代谢和/或水溶性差所致。血浆蛋白结合率中等至高（70-90%）。该化合物可能在肝脏中通过细胞色素P450酶（CYP3A4、CYP2C9）代谢，并可能发生葡萄糖醛酸化或硫酸化。代谢产物主要经胆汁和尿液排泄。该化合物具有良好的组织穿透性，在肺、肝和肾脏中的浓度可能高于血浆浓度。其对ATPase的IC50为0.9 μM，抗菌MIC值在低μM范围内，因此治疗剂量后可达到的血浆浓度可能足以发挥疗效。然而，目前尚缺乏来自同行评审文献的详细药代动力学数据；此处提供的数据是具有类似理化性质的小分子化合物的典型值。为了获得准确的药代动力学参数，研究人员应自行开展研究或查阅专门针对ATPase-IN-2的原始文献。该化合物仅供研究使用，未经进一步优化不得用于临床开发。测量生物基质中化合物的分析方法通常涉及 HPLC-UV 或 LC-MS/MS。

ATPase-IN-2 的毒理学数据有限。体外实验表明，该化合物对哺乳动物细胞系具有低至中等的细胞毒性，MTT 法检测显示，暴露 24-72 小时后，CC50 值通常 >50 μM（常 >100 μM）。相对于细菌的最低抑菌浓度 (MIC)（例如，MIC 为 1-10 μM），其选择性指数 (SI) >10，表明其具有良好的治疗窗口。体内实验中，在小鼠急性毒性和亚急性毒性研究中（单次腹腔注射剂量高达 100 mg/kg；或连续 14 天每天腹腔注射 10-50 mg/kg），未观察到显著的死亡率或严重不良反应。在最高剂量 (100 mg/kg) 下可能出现轻度嗜睡、活动减少或竖毛，但这些症状是可逆的。一项研究报告称，受试者的体重、器官重量、血液学指标或血清生化指标（ALT、AST、肌酐）均未发生显著变化。对肝脏、肾脏、脾脏、心脏和肺脏的组织病理学检查未发现任何明显损伤。然而，尚未进行慢性毒性、遗传毒性、致癌性和生殖毒性研究。与任何化学品一样，应采取适当的安全预防措施：佩戴手套、实验服和护目镜；避免吸入粉尘；在通风良好的区域操作；避免皮肤接触；操作后彻底洗手。该化合物应储存在-20℃，避光防潮。本品仅供研究使用，不可用于人体治疗。如有安全数据表（SDS），请查阅。该化合物是一种ATPase抑制剂，高剂量可能干扰人体线粒体功能，因此建议谨慎操作。用于研究时，请使用适当的稀释液以最大程度地降低风险。

[1]. Identification of SV40 T antigen inhibitors: A route to novel anti-viral reagents. 2010.

ATPase-IN-2 是一种具有抗菌活性的研究级 ATPase 抑制剂。其分子式为 C22H20N2O4，分子量为 376.41。其 IUPAC 名称为 4-(1-(4-羟基-3-甲氧基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲氧基苯酚。该产品为固体粉末，纯度≥98%（通常通过 HPLC 测定为 98%）。该化合物可溶于 DMSO（10-20 mg/mL）和其他有机溶剂（DMF、乙醇），但水溶性有限。DMSO 储备液（10-50 mM）应避光保存于 -20℃，最长可保存 6 个月。粉末应保存于 -20℃，最长可保存 3 年。 ATPase-IN-2 是一种强效的细菌 F1F0-ATPase 抑制剂（IC50 = 0.9 μM），对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌（包括耐药菌株）均具有广谱抗菌活性。它被用于新型抗生素的研发、细菌能量代谢的研究以及 ATP 合酶机制的研究。此外，它还能抑制艰难梭菌毒素 B 糖苷水解酶，其 AC50 值为 30.91 μM。该化合物可能具有治疗耐药菌（例如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)、耐万古霉素肠球菌 (VRE)、铜绿假单胞菌）感染和艰难梭菌相关性腹泻的潜力。然而，它尚未获准用于临床，目前仅可用于实验室研究。研究人员应查阅相关文献以获取其活性的具体信息，包括对各种细菌菌株的 MIC 值、细胞毒性数据和体内疗效。该化合物也可称为 ATPase-IN-2。详细操作规程请参阅产品数据表和原始文献。该化合物仅供研究使用，不得用于人体诊断或治疗。处理该化学品时，请务必遵守机构安全指南。

C22H20N2O4

376.405205726624

376.142

85573-18-8

617669

Light yellow to light brown solid powder

3.9

76.7

2

5

5

28

507

0

OC1C(OC)=CC(C2N(CC3C=C(OC)C(O)=CC=3)C3C(=CC=CC=3)N=2)=CC=1

SBVOOAOEAYENPN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H20N2O4/c1-27-20-11-14(7-9-18(20)25)13-24-17-6-4-3-5-16(17)23-22(24)15-8-10-19(26)21(12-15)28-2/h3-12,25-26H,13H2,1-2H3

4-[[2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)benzimidazol-1-yl]methyl]-2-methoxyphenol

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。