β-lactamase

β-内酰胺酶测定[1]
表1显示了酶抑制活性的不同性质。AVE1330A对TEM-1的IC50比他唑巴坦和克拉维酸的活性高5倍和16倍。AVE1330A对P99的抑制作用强于他唑巴坦，IC50比他唑巴坦低60倍；克拉维酸无活性。
AVE1330A的Tn为2，而克拉维酸对TEM-1的Tn为214。所有AVE1330A/酶比（数据未显示）在10分钟时观察到最大的TEM-1抑制。AVE1330A完全灭活P99的比例为5，而他唑巴坦为55。另一方面，AVE1330A和他唑巴坦在60分钟后出现最大的P99抑制（数据未显示）。
对于TEM-1，在AVE1330A孵育7天内观察到50%的去酰化，而在克拉维酸孵育7分钟。以P99为例，该酶在7天内恢复了50%的活性，而他唑巴坦则为290分钟。

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体外对β-内酰胺酶过量产生者的抑菌活性[1]
表2显示了头孢他啶与头孢他啶联合AVE1330A或克拉维酸对三种被试菌株的mic比较。AVE1330A与克拉维酸单药mic≥16 mg/L。当L-阿拉伯糖诱导β-内酰胺酶产量增加时，头孢他啶对SHV-4和AmpC产生菌的mic明显从1-2 mg/L增加到0 - 32 mg/L。与克拉维酸不同，无论β-内酰胺酶诱导水平如何，AVE1330A在所有被测菌株（包括AmpC产生菌）中均将头孢他啶的mic维持在≤1 mg/L。

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头孢他啶与AVE1330A以4:1比的体外抗菌活性比较[1]
表3报道了头孢他啶单独、头孢他啶/AVE1330A和头孢他啶/克拉维酸在4:1比例下对已知β-内酰胺酶产生菌株的比较mic。AVE1330A和克拉维酸的mic均≥8 mg/L。大多数患者对头孢他啶缺乏敏感性。对于产生A类质粒编码酶的菌株，AVE1330A恢复了对头孢他啶的敏感性，克拉维酸也恢复了对头孢他啶的敏感性，这两种组合的活性都比单独使用头孢他啶高64倍。Ceftazidime/AVE1330A对C类质粒编码酶也有活性，mic范围为0.5 ~ 4mg /L。相反，克拉维酸对头孢他啶耐药菌株无协同作用。
表4报告了更多的扩展数据。4 mg/L头孢他啶/AVE1330A对分离的大肠杆菌均有抑制作用。没有其他比较国在减少中等收入国家方面如此积极。对头孢他啶耐药菌株，AVE1330A和克拉维酸存在时，头孢他啶的MIC90分别从664 mg/L降至4 mg/L和16 mg/L。两种抑制剂对A类酶产生物具有相似的行为。与克拉维酸相比，AVE1330A对C类酶产生物恢复了较高的头孢他啶活性（MIC90分别为16和2 mg/L）。与其他菌株不同，AVE1330A单独存在4 mg/L时，很少有大肠杆菌分离株被抑制，但MIC50和MIC90仍保持≥8 mg/L。
对于大多数产生A类酶的头孢他啶耐药克雷伯菌，头孢他啶/AVE1330A使MIC90从>64降低到2 mg/L，即与头孢他啶/克拉维酸相似。
Ceftazidime/AVE1330A对头孢他啶敏感肠杆菌的药效是ceftazime单用药效的2 ~ 4倍。在AVE1330A存在的情况下，所有头孢他啶耐药菌株均被重新归类为敏感菌株，头孢他啶/克拉维酸、共阿莫昔拉夫和哌拉西林-他唑巴坦无活性菌株。
对于吲哚阳性的Proteeae和Serratia代表，头孢他啶/AVE1330A的活性在最大MIC方面最为显著，因为没有头孢他啶耐药的分离物，除了Morganella morganii， AVE1330A存在时MIC90降低了16倍（1 mg/L）。与克拉维酸联用活性较低（MIC90为32 mg/L）。头孢他啶/AVE1330A对奇异变形杆菌的活性最高，在4 mg/L浓度下，所有分离株均被抑制。如最大MIC所示，克拉维酸对几株对头孢他啶敏感的阴沟肠杆菌、对头孢他啶敏感的柠檬酸杆菌和莫氏分枝杆菌具有明显的拮抗作用（头孢他啶的MIC至少增加8倍）。而AVE1330A则不产生这种拮抗作用。

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接种量的影响[1]
由表5可知，头孢他啶和头孢他啶/AVE1330A的MIC范围分别为0.25 ~ 256mg /L和0.25 ~ 8mg /L。仅对于头孢他啶/AVE1330A组合，当接种量从5.3增加到9.5 log10时，MIC增加了2至4倍。

β-内酰胺酶的分离[1]
从阴沟肠杆菌293HT6中提取的P99 β-内酰胺酶由法压裂解得到的粗提物制备，并采用苯基硼酸亲和层析纯化，如前所述37°C缓冲液（50 mM磷酸盐pH 7.0, 2%甘油和0.1 mg/mL牛血清白蛋白）稳定酶的活性。

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抑制[1]
预孵育5分钟后，在37°C下分光光度测定抑制作用，以100 μM硝基芬作为底物（消光系数：20 500 M−1 cm−1），最终体积为0.2 mL， 1 nM TEM-1或0.42 nM P99为底物。将底物初始水解速率降低50%所需的抑制剂浓度（IC50）记录为β-内酰胺酶在485 nm处的剩余活性。使用GraFit处理数据。

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Turnover[1]
周转数（Tn）是使一个酶分子失活所需的抑制剂分子数。TEM-1和P99分别在37°C、10和60 min时使用不同的摩尔酶/抑制剂比测定这些定义的时间对应于获得最大抑制所需的最短时间。以400 μM硝基为底物测定残留活性。Tn值是根据剩余活性与抑制剂/酶比值图中99%失活的外推值推导出来的。

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酰基酶中间体的去酰化[1]
酶（84 nM P99和200 nM TEM-1）被抑制剂以翻转浓度饱和，TEM-1和P99分别饱和10 min和60 min。采用Sephadex G-50微柱凝胶过滤去除游离抑制剂。在适当的酶稀释后，在37°C下，在485 nm处测量100 μM硝基芬存在下β-内酰胺酶活性的恢复，并表示在没有抑制剂的情况下，酶活性的百分比。

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体外对β-内酰胺酶调控产物的抑菌活性[1]
为了研究不同剂量β-内酰胺酶对AVE1330A抑制效果的影响，在可诱导的阿拉伯糖启动子下，在共同宿主XL-1 Blue菌株{基因型：recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 relA1 lac [F 'proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)]}中构建了产SHV-4-和ampc -产酶大肠杆菌等基因面板。表达载体为带ArabinosePBAD启动子的pBAD18-kan使用l -阿拉伯糖诱导剂浓度在0.02%至0.2%范围内调节pBAD的过表达。在1-2 × 107 cfu/mL细菌浓度的Luria-Bertani培养液中，37℃孵育18 h，微量稀释测定mic。

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药敏试验[1]
用两倍琼脂稀释法在Mueller-Hinton培养基中测定标准mic。在整个研究中，接种量为104 cfu/spot。37℃孵育24 h。MIC被定义为在琼脂板上检测不到明显生长的最低浓度。根据NCCLS断点，头孢他啶耐药株和敏感株的mic值分别为≥32和≤8 mg/L。

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接种量的影响[1]
采用两倍琼脂稀释法，在muller - hinton培养基中评价5种接种量（~ 5-9 log10 cfu/mL）对头孢他啶/AVE1330A 4:1组合对4种产生ESBL或AmpC酶的菌株的抑菌活性的影响。采用螺旋计数系统进行细菌计数，以确定接种量，从穆勒-辛顿肉汤过夜培养中适当稀释获得。

[1]. In vitro activity of AVE1330A, an innovative broad-spectrum non-beta-lactam beta-lactamase inhibitor. J Antimicrob Chemother. 2004 Aug;54(2):410-7.

阿维巴坦钠是一种有机钠盐，是阿维巴坦的单钠盐。它与头孢他啶五水合物联合用于治疗包括肾盂肾炎在内的复杂性尿路感染。它是一种EC 3.5.2.6（β-内酰胺酶）抑制剂，具有抗菌和抗微生物作用。它含有一个阿维巴坦(1-)结构域。头孢他啶已被证实能够诱导AmpC头孢菌素酶的表达，并筛选出一些稳定的去抑制细菌突变体，而头孢他啶对这些突变体无效。事实上，我们发现AVE1330A能够抑制这些酶的表达，阻止足够数量的酶被诱导，从而使头孢他啶能够发挥活性。此外，与头孢他啶/克拉维酸不同，在所有受试菌株（包括染色体诱导型AmpC酶产生菌柠檬酸杆菌、肠杆菌和沙雷氏菌）的MIC研究中，均未观察到头孢他啶/AVE1330A的拮抗作用。这种拮抗作用的缺失可能间接表明，该组合不太可能诱导或筛选出耐药突变体。这显然是AVE1330A非β-内酰胺结构的结果。目前正在进行更多专门设计的研究以证实这一观察结果。
目前尚无关于头孢菌素类药物与β-内酰胺酶抑制剂联合用药的广泛治疗经验发表。然而，AVE1330A可能作为一种替代单药碳青霉烯类药物的治疗策略具有一定的价值。总之，AVE1330A 代表了一类新型的β-内酰胺酶抑制剂，其本身不具有显著的抗菌活性，但对A类和C类β-内酰胺酶均有效，因此可将头孢他啶的抗菌谱扩展至大多数耐药菌。AVE1330A 与β-内酰胺类抗生素联合使用，有望成为我们抗菌药物库中一种极具潜力的药物，值得进一步研究。[1] 目标：β-内酰胺酶的产生是革兰氏阴性菌产生β-内酰胺类抗生素耐药性的主要机制。尽管目前已广泛使用克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦，但A类和C类酶的流行率在全球范围内仍在不断上升，因此亟需开发新的β-内酰胺酶抑制剂。本文报道了新型桥联双环[3.2.1]二氮杂双环辛酮类化合物AVE1330A与头孢他啶联用的抗菌活性。
材料与方法：采用IC50值和水解反应动力学参数表征AVE1330A对β-内酰胺酶的抑制作用。以4:1的固定比例，使用头孢他啶/AVE1330A组合测定了600余株菌株的MIC值。结果：AVE1330A 对 TEM-1 和 P99 酶的 IC50 值分别为 0.0023 mg/L (8 nM) 和 0.023 mg/L (80 nM)，而克拉维酸的 IC50 值分别为 0.027 mg/L (130 nM) 和 205.1 mg/L (1 × 10⁶ nM)，他唑巴坦的 IC50 值分别为 0.013 mg/L (40 nM) 和 1.6 mg/L (5000 nM)。高度稳定的共价复合物导致 AVE1330A 的周转率较低。头孢他啶/AVE1330A 对肠杆菌科细菌的 MIC 值至少比单独使用头孢他啶低 8 倍。所有大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、柠檬酸杆菌和奇异变形杆菌菌株，包括头孢他啶耐药菌株，在 4-8 mg/L 的浓度下均受到抑制。而其他变形杆菌科、肠杆菌科、沙门氏菌科和沙雷氏菌科细菌仅需 2 mg/L 的浓度即可受到抑制。
结论：头孢他啶与 AVE1330A 联用对产 Ambler A 类和 C 类肠杆菌科细菌具有广谱抗菌活性。[1]

C7H10N3NAO6S

287.22

287.018

C, 29.27; H, 3.51; N, 14.63; Na, 8.00; O, 33.42; S, 11.16

396731-20-7

1192491-61-4

24944097

Typically exists as solid at room temperature

141

1

6

3

18

462

2

S(=O)(=O)([O-])ON1C(N2[C@@H](C(N)=O)CC[C@H]1C2)=O.[Na+]

RTCIKUMODPANKX-UYXJWNHNSA-M

1S/C7H11N3O6S.Na/c8-6(11)5-2-1-4-3-9(5)7(12)10(4)16-17(13,14)15/h4-5H,1-3H2,(H2,8,11)(H,13,14,15)/q+1/p-1/t4-,5+/m0./s1

1,6-Diazabicyclo(3.2.1)octane-2-carboxamide, 7-oxo-6-(sulfooxy)-, monosodium salt, (1R,2S,5R)-rel-

ent-Avibactam sodium; Avibactam sodium; 1192491-61-4; Avibactam Sodium Salt; Avibactam sodium [USAN]; 9V824P8TAI; CHEBI:85982; AVIBACTAM SODIUM [JAN]; ...; 396731-20-7;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。