| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PRKACA (protein kinase cAMP-activated catalytic subunit alpha) – IC50 = 0.3 nM (biochemical assay); Kd = 3.3 nM; cellular IC50 = 36.6 nM (inhibition of VASP Ser157 phosphorylation in forskolin-stimulated Huh7 cells) [1][2]
ROCK2 – IC50 = 12.7 nM (42-fold selective over PRKACA) [1][2] AKT1 – IC50 = 2120 nM; AKT2 – IC50 = 4910 nM; AKT3 – IC50 = 475 nM [1][2] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
BLU2864在生化测定中使用Kemptide肽底物和Km浓度ATP（5 μM）抑制PRKACA催化活性，IC50为0.3 nM。[1][2]
BLU2864抑制PRKACA细胞活性，IC50为36.6 nM，通过抑制佛司可林刺激的Huh7细胞中VASP Ser157磷酸化测定。[1][2] BLU2864对密切相关的AGC激酶家族成员表现出良好至中等的选择性，并具有优异的整体激酶组选择性，S(10)选择性评分为0.057。在3 μM浓度下对400个人类激酶面板进行激酶组-wide选择性评估。Kd测量显示对PRKACA的结合亲和力最强，为3.3 nM，仅对10种非突变激酶的Kd < 100 nM。[1][2] BLU2864（40 nM和200 nM）抑制Matrigel中培养的mIMCD3细胞的佛司可林诱导的体外囊肿形成，与对照组相比分别抑制72%和100%。[1] BLU2864（200 nM）抑制佛司可林诱导的离体囊肿形成50-53%，并抑制Pkd1RC/RC后肾器官培养中的CREB磷酸化，无毒性证据。[1] 在每日口服BLU2864（45 mg/kg）治疗5天的Pkd1RC/RC小鼠中，与对照组相比，3小时时肾脏基础和总PKA活性分别被抑制74%和87%，15小时时分别被抑制46%和56%。[1] 在BLU2864治疗的Pkd1RC/RC小鼠（4-16周龄每日口服30 mg/kg）中，处死时（给药后1-2小时）肾脏基础和总PKA活性比对照组低69%和84%。PKA激活下游的肾脏AQP-2和p-AQP-2、PCNA、促增殖信号通路（Src、ERK1/2、mTOR、GSK3β、AKT）和转录因子（CREB、STAT3、Pax2）均下调。Gli1和Gli2增加，而Gli3A和Gli3R不变。[1] 在体外，BLU2864（40 nM 和 200 nM；5 天）抑制毛喉素引起的囊肿形成 [1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在携带FLC PDX肿瘤的小鼠中，口服BLU2864 30 mg/kg每日一次，持续34天，与溶媒对照相比肿瘤生长抑制45.3%（P = 0.0005）。[2]
在药代动力学/药效动力学研究中，BLU2864 30 mg/kg每日一次给药后2小时，磷酸化VASP降至基线水平的27%；给药后24小时磷酸化VASP水平完全恢复。[2] 在Pkd1RC/RC小鼠（F1 129S6/Sv x C57BL/6背景）中，BLU2864治疗组（4-16周龄每日口服30 mg/kg）在15-16周时的肾脏体积显著低于对照组。治疗组的肾脏重量、肾脏重量/体重百分比和囊肿指数也较低。治疗组尿量较高。血浆肌酐和尿素浓度无显著差异。两组间肝脏体积无差异。[1] 在 Pkd1RC/RC 小鼠中，BLU2864（口服灌胃；45 mg/kg；每天一次；5 天）抑制肾 PKA 活性 [1]。在 Pkd1RC/RC 小鼠中，BLU2864（口服灌胃；30 mg/kg；每天一次；5 天）可降低 PKA 活性并增强 PKD [1]。 BLU2864 在体内抑制 FLC 肿瘤生长（口服管饲；30 mg/kg 和 75 mg/kg；每天一次；34 天）[2]。 |
| 酶活实验 |
PRKACA生化抑制实验：将PRKACA酶（0.007 ng/mL）加入到384孔板的每个孔中，孔中含有1 μM Kemptide肽底物（5-FAM-LRRASLG）、Km浓度ATP（5 μM）和系列浓度的测试化合物（终浓度1% DMSO），缓冲液为100 mM HEPES pH 7.5、0.015% Brij-35、10 mM MgCl2、1 mM DTT，在25°C孵育90分钟。加入终止缓冲液终止反应。使用电泳迁移率变动平台读取结果，使用4参数拟合计算IC50。[1][2]
ROCK2实验：使用ROCK2酶（0.006 ng/mL），条件类似。[1][2] AKT1-3实验：测试化合物在100% DMSO中用3倍稀释步骤稀释。最终化合物浓度范围为10 μM至0.056 nM，终DMSO浓度为1%。以星形孢菌素作为参考化合物。[1][2] 激酶组-wide选择性分析：使用KINOMEscan方法在3 μM浓度下测试BLU2864对400个人类激酶面板的结合。对于在3 μM筛选浓度下结合率>90%的所有非突变激酶，测定Kd值。[1][2] 肾脏裂解液中PKA活性测定：使用32P碱基和生物素化Kemptide肽底物测定PKA活性。2 μg蛋白裂解液与γ32P标记的磷酸盐和生物素化Kemptide在无cAMP（基础活性）或有0.01 mM cAMP（总活性）存在下孵育。使用穿孔SAM2生物素捕获膜回收32P标记的生物素化底物。通过闪烁计数测定放射性计数/分钟来测量PKA活性。[1] |
| 细胞实验 |
PRKACA细胞活性测定（HTRF）：使用VASP Ser157磷酸化作为读数。将Huh7细胞以每孔2 × 10⁴个细胞接种于384孔板的无血清无酚红DMEM中，过夜培养。加入测试化合物（终浓度0.24% DMSO），细胞孵育4小时。加入佛司可林（终浓度5 μM），板孵育30分钟。用含Halt蛋白酶抑制剂混合物的裂解缓冲液裂解细胞。将裂解液转移至384孔proxi板，加入预混合的抗体溶液（磷酸化VASP隐蔽抗体和磷酸化VASP d2抗体）。在EnVision仪器上读取665 nm和620 nm的荧光发射。[1][2]
体外三维囊肿形成实验：mIMCD3细胞在Matrigel中培养，存在100 μM N6,2'-O-二丁酰腺苷-3',5'-cAMP或10 μM佛司可林以诱导囊肿形成，同时存在或不存在BLU2864（40 nM、200 nM）。每日加入化合物或溶媒。使用自动测量平均囊肿面积的系统每3小时采集图像。[1] 离体后肾器官培养：Pkd1RC/RC后肾器官培养用BLU2864（200 nM）处理。评估囊肿形成和CREB磷酸化。[1] Western blot分析：细胞或组织在含Halt蛋白酶抑制剂混合物的PhosphoSafe提取试剂中裂解。蛋白通过SDS-PAGE分离，电转移至硝酸纤维素膜。使用抗PRKACA、pVASP、pCREB、PCNA、Src、p-Src、ERK1/2、p-ERK1/2、GSK3β、p-GSK3β、AKT、p-AKT、STAT3、p-STAT3、CREB、p-CREB、Pax2、AQP-2、p-AQP-2、Gli1、Gli2、Gli3和上样对照的抗体进行免疫检测。[1] 细胞活力测定 [1] 细胞类型： mIMCD3 细胞 测试浓度： 40 nM 和 200 nM 孵育时间： 5 天 实验结果： Forskolin 诱导的在 Matrigel 中培养的 mIMCD3 细胞的体外囊肿形成分别在 40 和 200 nM 浓度下受到抑制。相对于对照分别为 72% 和 100%。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： Pkd1RC/RC 小鼠 [1]
剂量： 45 mg/kg 给药途径： 灌胃（po）；45 mg/kg；每日一次；5 天 实验结果： 与对照组相比，BLU2864 处理组小鼠肾脏组织和总 PKA 活性在 3 小时分别抑制了 74% 和 87%，在 15 小时分别抑制了 46% 和 56%。 动物/疾病模型： Pkd1RC/RC 小鼠 [1] 剂量： 30 mg/kg 剂量： 灌胃（po）；30 mg/kg；每日一次； 5天 实验结果： 15周时，BLU2864治疗组小鼠的尿量高于对照组。肾脏重量、肾脏体积占体重的百分比以及囊肿指数均低于对照组。与对照组相比，BLU2864治疗组小鼠的肾脏基础PKA活性和总PKA活性分别降低了69%和84%。 动物/疾病模型： FLC PDX荷瘤小鼠[2] 剂量： 30 mg/kg和75 mg/kg 给药途径： 口服（灌胃）；30 mg/kg和75 mg/kg；每日一次； 34 天 实验结果： 第 3 天 在第 34 天，肿瘤生长分别抑制了 48.5% (P=0.003) 和 45.3% (P=0.0005)。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
BLU2864的cLogP值为3.4，拓扑极性表面积为90.9平方埃，血浆蛋白结合率为98%，符合Lipinski五规则。[1]
在NOD-SCID小鼠中口服BLU2864 30 mg/kg和45 mg/kg每日一次后，血浆浓度在给药后2-4小时内达到峰值。[2] BLU2864 30 mg/kg每日一次给药后2小时，磷酸化VASP降至基线水平的27%，24小时内完全恢复。[2] 在BLU2864治疗的Pkd1RC/RC小鼠（每日45 mg/kg口服灌胃，持续5天）中，最后一次给药后3小时和15小时的血浆浓度分别接近IC90和IC50值。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在28天大鼠耐受性研究中，BLU2864剂量水平高达15 mg/kg/天耐受良好，未观察到临床症状。最高剂量组（30 mg/kg）的动物在几天后活动减少，随后在6-7天后死亡。死亡原因未确定。BLU2864在连续给药超过3周的小鼠中的最高耐受剂量确定为30 mg/kg每日一次。[2]
在BLU2864治疗的Pkd1RC/RC小鼠（4-16周龄每日口服30 mg/kg）中，治疗组和对照组的每周体重相似，未观察到与药物性PKA下调相关的毒性证据。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
BLU2864是一种高选择性的PRKACA ATP竞争性抑制剂，由Blueprint Medicines从超过10,000个非预设设计的激酶抑制剂库中筛选并优化得到。它是最早报道的选择性小分子PRKACA酶抑制剂之一。BLU2864已被用于验证PRKACA作为纤维板层样肝细胞癌（FLC）和多囊肾病（PKD）的治疗靶点。在FLC PDX模型中，BLU2864治疗使肿瘤生长减少约45%，并逆转了FLC特异性基因特征。在Pkd1RC/RC小鼠中，BLU2864抑制肾脏PKA活性并改善多囊肾病。[1][2]
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| 分子式 |
C24H19F3N4O2
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|---|---|
| 分子量 |
452.428475618362
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| 精确质量 |
452.146
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| 元素分析 |
C, 63.71; H, 4.23; F, 12.60; N, 12.38; O, 7.07
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| CAS号 |
2810747-89-6
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| PubChem CID |
164603354
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| LogP |
3.2
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| tPSA |
90.9
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
33
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| 分子复杂度/Complexity |
715
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
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| SMILES |
CC1=CNC2=NC=CC(=C12)C3=NC=C(C=C3)C(=O)N[C@H]4[C@H](CC5=C4C(=CC(=C5)C(F)F)F)O
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| InChi Key |
VRPOVDLLZCQZEG-RXVVDRJESA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H19F3N4O2/c1-11-9-30-23-19(11)15(4-5-28-23)17-3-2-12(10-29-17)24(33)31-21-18(32)8-13-6-14(22(26)27)7-16(25)20(13)21/h2-7,9-10,18,21-22,32H,8H2,1H3,(H,28,30)(H,31,33)/t18-,21-/m0/s1
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| 化学名 |
N-[(1R,2S)-5-(difluoromethyl)-7-fluoro-2-hydroxy-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl]-6-(3-methyl-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-4-yl)pyridine-3-carboxamide
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| 别名 |
BLU2864; BLU-2864; BLU 2864; orb1819252; SCHEMBL27203788; SCHEMBL29854562;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~100 mg/mL (221.0 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2103 mL | 11.0514 mL | 22.1029 mL | |
| 5 mM | 0.4421 mL | 2.2103 mL | 4.4206 mL | |
| 10 mM | 0.2210 mL | 1.1051 mL | 2.2103 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
AOH-1996
hMAO-B-IN-3
Flupyrimin
阿曲库铵
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