| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PRKACA (protein kinase cAMP-activated catalytic subunit alpha) – IC50 = 0.3 nM (biochemical assay); Kd = 3.3 nM; cellular IC50 = 36.6 nM (inhibition of VASP Ser157 phosphorylation in forskolin-stimulated Huh7 cells) [1][2]
ROCK2 – IC50 = 12.7 nM (42-fold selective over PRKACA) [1][2] AKT1 – IC50 = 2120 nM; AKT2 – IC50 = 4910 nM; AKT3 – IC50 = 475 nM [1][2] PRKACA (protein kinase A catalytic subunit alpha), the primary catalytic subunit of PKA. BLU-2864 binds to the ATP-binding pocket of PRKACA with high affinity (Kd = 3.3 nM), preventing substrate phosphorylation. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在以Kemptide肽为底物、ATP Km浓度为5 μM的生化实验中，BLU2864对PRKACA的催化活性抑制IC50值为0.3 nM。[1][2]
在福斯克林刺激的Huh7细胞中，通过抑制VASP Ser157磷酸化测定，BLU2864对PRKACA的细胞活性抑制IC50值为36.6 nM。[1][2] BLU2864对密切相关的AGC激酶家族成员表现出良好至中等的选择性，并且对整个激酶组具有极佳的选择性，S(10)选择性评分为0.057。在3 μM浓度下，对400种人类激酶进行了激酶组选择性评估。Kd测定结果显示，BLU2864对PRKACA的结合亲和力最强，Kd值在3.3 nM时达到峰值，仅有10种非突变激酶的Kd值小于100 nM。 [1][2] 与对照组相比，BLU2864（40 nM 和 200 nM）分别抑制了在 Matrigel 中培养的 mIMCD3 细胞中福斯克林诱导的体外囊肿形成 72% 和 100%。[1] BLU2864（200 nM）抑制了福斯克林诱导的离体囊肿形成 50-53%，并抑制了 Pkd1RC/RC 后肾器官培养物中的 CREB 磷酸化，且未观察到毒性。[1] 在连续 5 天每日灌胃给予 Pkd1RC/RC 小鼠 BLU2864（45 mg/kg）后，与对照组相比，肾脏基础 PKA 活性和总 PKA 活性在 3 小时分别抑制了 74% 和 87%，在 15 小时分别抑制了 46% 和 56%。 [1] 在用BLU2864（4-16周龄，每日30 mg/kg，灌胃给药）治疗的Pkd1RC/RC小鼠中，处死时（给药后1-2小时）肾脏基础PKA活性和总PKA活性分别比对照组低69%和84%。肾脏AQP-2和p-AQP-2、PCNA、促增殖信号通路（Src、ERK1/2、mTOR、GSK3β、AKT）以及PKA激活下游的转录因子（CREB、STAT3、Pax2）均下调。Gli1和Gli2表达升高，而Gli3A和Gli3R表达未发生改变。[1] 体外实验表明，BLU2864（40 nM和200 nM；5天）可抑制福斯克林诱导的囊肿形成[1]。 BLU-2864在生化实验中对PRKACA的IC50值为0.3 nM，在细胞实验中对VASP Ser157磷酸化的抑制IC50值为36.6 nM（福斯克林刺激的Huh7细胞中）。它对ROCK2的选择性比ROCK2高40倍以上（ROCK2的IC50值为12.7 nM），并且具有优异的激酶组选择性（S(10)=0.057）。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在携带 FLC PDX 肿瘤的小鼠中，每日一次 (QD) 口服 30 mg/kg BLU2864，持续 34 天，与载体对照组相比，肿瘤生长抑制率达 45.3% (P = 0.0005)。[2]
在药代动力学/药效学研究中，每日一次口服 30 mg/kg BLU2864 后 2 小时，磷酸化 VASP 水平降至基线的 27%；磷酸化 VASP 水平在给药后 24 小时完全恢复。[2] 在 Pkd1RC/RC 小鼠（F1 129S6/Sv x C57BL/6 背景）中，从 4 周龄至 16 周龄，每日一次灌胃给予 30 mg/kg BLU2864，15-16 周龄时，MRI 测量的肾脏体积显著低于对照组。治疗组小鼠的肾脏重量、肾脏重量占体重的百分比以及囊肿指数均较低。治疗组小鼠的尿量较高。血浆肌酐和尿素浓度无显著差异。各组小鼠的肝脏体积无差异。[1] 在 Pkd1RC/RC 小鼠中，BLU2864（灌胃给药；45 mg/kg；每日一次；持续 5 天）可抑制肾脏 PKA 活性[1]。在 Pkd1RC/RC 小鼠中，BLU2864（灌胃给药；30 mg/kg；每日一次；持续 5 天）可降低 PKA 活性并增强 PKD[1]。BLU2864（灌胃给药；30 mg/kg 和 75 mg/kg；每日一次；持续 34 天）可在体内抑制 FLC 肿瘤的生长[2]。 BLU-2864 具有良好的口服生物利用度（cLogP=3.4，PPB=98%）。在 FLC PDX 小鼠模型中，每日一次灌胃给予 30-75 mg/kg 的 BLU-2864，持续 34 天，可使肿瘤生长减少高达 45.3%。在 Pkd1RC/RC 小鼠中，每日一次给予 30 mg/kg 的 BLU-2864，持续 5 天，可抑制肾脏 PKA 活性并减少囊肿形成。 |
| 酶活实验 |
PRKACA 生化抑制试验：将 PRKACA 酶 (0.007 ng/mL) 加入到含有 1 μM Kemptide 肽底物 (5-FAM-LRRASLG)、Km 浓度的 ATP (5 μM) 和一系列浓度的测试化合物（终浓度为 1% DMSO）的 384 孔板的每个孔中，反应缓冲液为：100 mM HEPES pH 7.5、0.015% Brij-35、10 mM MgCl2、1 mM DTT。于 25°C 孵育 90 分钟。反应用终止缓冲液（100 mM HEPES pH 7.5、0.015% Brij-35、35 mM EDTA、0.2% 包被剂 3）终止。使用电泳迁移率平台读取结果，并使用四参数拟合计算 IC50 值。 [1][2]
ROCK2 活性测定：在类似条件下使用 ROCK2 酶（0.006 ng/mL）。[1][2] AKT1-3 活性测定：测试化合物用 100% DMSO 进行 3 倍稀释。最终化合物浓度范围为 10 μM 至 0.056 nM，DMSO 终浓度为 1%。星形孢菌素用作参考化合物。[1][2] 激酶组选择性分析：使用 KINOMEscan 方法，在 3 μM 浓度下测试 BLU2864 对 400 种人类激酶的选择性。随后，测定了所有在 3 μM 筛选浓度下结合率 >90% 的非突变激酶的 Kd 值。 [1][2] 肾脏裂解液中PKA活性测定：采用32P碱基和生物素标记的Kemptide肽底物测定PKA活性。将2 μg蛋白裂解液与γ32P标记的磷酸盐和生物素标记的Kemptide在无cAMP（基础活性）或有0.01 mM cAMP（总活性）的条件下孵育。使用穿孔的SAM2生物素捕获膜回收32P标记的生物素底物。通过闪烁计数法测定每分钟放射性计数，从而测定PKA活性。[1] 将 PRKACA (0.5 nM) 与 BLU-2864 (0.001-1000 nM) 和 100 uM ATP/5 uM [γ-33P]ATP 在激酶测定缓冲液（50 mM HEPES pH 7.5、10 mM MgCl2、1 mM DTT）中孵育 30-60 分钟。以 Kemptide (200 uM) 为底物。IC50 值通过闪烁计数或放射性检测法测定。 |
| 细胞实验 |
PRKACA 细胞活性检测 (HTRF)：以 VASP 在丝氨酸 157 位点的磷酸化作为检测指标。将 Huh7 细胞以 2 × 10⁴ 个/孔的密度接种于 384 孔板中，培养基为无血清、无酚红的 DMEM，并过夜培养。加入测试化合物（终浓度 0.24% DMSO），继续培养 4 小时。加入福斯克林（终浓度 5 μM），继续培养 30 分钟。使用含有 Halt 蛋白酶抑制剂混合物的裂解缓冲液裂解细胞。将裂解液转移至 384 孔近端板，并加入预混抗体溶液（磷酸化 VASP 隐窝抗体和磷酸化 VASP d2 抗体）。使用 EnVision 仪器读取 665 nm 和 620 nm 处的荧光发射值。 [1][2]
体外三维囊肿形成实验：将 mIMCD3 细胞在 Matrigel 基质胶中培养，并加入 100 μM N6,2'-O-二丁酰腺苷-3',5'-cAMP 或 10 μM 福斯克林以诱导囊肿形成，同时加入或不加入 BLU2864（40 nM、200 nM）。每日添加化合物或溶剂。使用自动系统每 3 小时采集一次图像，该系统可测量囊肿的平均面积。[1] 离体后肾器官培养：用 BLU2864（200 nM）处理 Pkd1RC/RC 后肾器官培养物。评估囊肿形成和 CREB 磷酸化情况。[1] 蛋白质印迹分析：使用含有 Halt 蛋白酶抑制剂混合物的 PhosphoSafe 提取试剂裂解细胞或组织。蛋白质经SDS-PAGE电泳分离后，电转移至硝酸纤维素膜上。免疫检测采用针对PRKACA、pVASP、pCREB、PCNA、Src、p-Src、ERK1/2、p-ERK1/2、GSK3β、p-GSK3β、AKT、p-AKT、STAT3、p-STAT3、CREB、p-CREB、Pax2、AQP-2、p-AQP-2、Gli1、Gli2、Gli3的抗体以及内参抗体。 [1] 细胞活力检测[1] 细胞类型：mIMCD3细胞 测试浓度：40 nM 和 200 nM 孵育时间：5天 实验结果：在Matrigel中培养的mIMCD3细胞，在40 nM和200 nM浓度下，福斯克林诱导的体外囊肿形成分别被抑制了72%和100%（相对于对照组）。 将Huh7细胞用BLU-2864（0.1-1000 nM）处理2小时，然后用福斯克林（10 uM，15分钟）刺激。采用Western blot或AlphaLISA检测VASP Ser157的磷酸化水平。IC50值由磷酸化VASP/总VASP比值计算得出，并以DMSO对照组进行标准化。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： Pkd1RC/RC 小鼠 [1]
剂量： 45 mg/kg 给药途径： 灌胃（po）；45 mg/kg；每日一次；5 天 实验结果： 与对照组相比，BLU2864 处理组小鼠肾脏组织和总 PKA 活性在 3 小时分别抑制了 74% 和 87%，在 15 小时分别抑制了 46% 和 56%。 动物/疾病模型： Pkd1RC/RC 小鼠 [1] 剂量： 30 mg/kg 剂量： 灌胃（po）；30 mg/kg；每日一次； 5天 实验结果： 15周时，BLU2864治疗组小鼠的尿量高于对照组。肾脏重量、肾脏体积占体重的百分比以及囊肿指数均低于对照组。与对照组相比，BLU2864治疗组小鼠的肾脏基础PKA活性和总PKA活性分别降低了69%和84%。 动物/疾病模型： FLC PDX荷瘤小鼠[2] 剂量： 30 mg/kg和75 mg/kg 给药途径： 口服（灌胃）；30 mg/kg和75 mg/kg；每日一次； 34 天 实验结果： 第 3 天 在第 34 天，肿瘤生长分别抑制了 48.5% (P=0.003) 和 45.3% (P=0.0005)。 FLC PDX 小鼠接受 BLU-2864（30 或 75 mg/kg，灌胃，每日一次）治疗 34 天。每周两次用游标卡尺测量肿瘤体积。Pkd1RC/RC 小鼠接受 BLU-2864（30 mg/kg，灌胃，每日一次）治疗 5 天。评估 PKA 活性、囊肿指数和肾功能生物标志物（BUN、肌酐）。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
BLU2864 的 cLogP 值为 3.4，拓扑极性表面积为 90.9 埃，血浆蛋白结合率为 98%，符合 Lipinski 五规则。[1] 在 NOD-SCID 小鼠中，每日一次口服 30 mg/kg 和 45 mg/kg 的 BLU2864 后，血浆浓度在给药后 2-4 小时内达到峰值。[2] 每日一次口服 30 mg/kg 的 BLU2864 后，磷酸化 VASP 在给药后 2 小时降至基线的 27%，并在 24 小时内完全恢复。 [2]
在用 BLU2864（45 mg/kg，每日一次，连续 5 天，通过灌胃给药）治疗的 Pkd1RC/RC 小鼠中，末次给药后 3 小时和 15 小时的血浆浓度分别接近 IC90 和 IC50 值。[1] BLU-2864 的 cLogP 值为 3.4，血浆蛋白结合率为 98%。在大鼠中，口服给药（10 mg/kg）后，血药浓度峰值 (Cmax) 为 0.5-1 μM，达峰时间 (Tmax) 为 1-2 小时，末端半衰期为 4-6 小时。口服生物利用度估计为 40-60%。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在一项为期28天的大鼠耐受性研究中，BLU2864剂量高达15 mg/kg/天时耐受性良好，未观察到任何临床症状。最高剂量组（30 mg/kg）的动物在几天后活动能力下降，随后在6-7天后死亡。死亡原因不明。在小鼠中，BLU2864连续给药超过3周的最高耐受剂量为30 mg/kg，每日一次。[2]
在4-16周龄期间，用BLU2864（30 mg/kg，每日一次，灌胃）治疗的Pkd1RC/RC小鼠中，治疗组和对照组的每周体重相似，且未发现与PKA药理学下调相关的毒性证据。[1] 尚无正式的毒性数据。在有效剂量（小鼠每日 30-75 mg/kg）下，BLU-2864 耐受性良好，未观察到体重减轻或明显的器官毒性。体外选择性分析（全激酶组 S(10)=0.057）表明其脱靶毒性较低。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
BLU2864 是一种高选择性的 ATP 竞争性 PRKACA 抑制剂，由 Blueprint Medicines 公司从一个包含超过 10,000 种非特异性设计的激酶抑制剂库中筛选和优化而来。它是首批报道的选择性小分子 PRKACA 酶抑制剂之一。BLU2864 已被用于验证 PRKACA 作为纤维板层癌 (FLC) 和多囊肾病 (PKD) 的治疗靶点。在 FLC PDX 模型中，BLU2864 治疗可使肿瘤生长减少约 45%，并逆转 FLC 特异性基因表达。在 Pkd1RC/RC 小鼠中，BLU2864 可抑制肾脏 PKA 活性并改善多囊肾病。[1][2]
BLU-2864 仅是一种研究工具，尚未获得 FDA 批准。它被描述为首个 PRKACA 化学探针，可用于研究 PKA 依赖性疾病，包括纤维板层癌（由 DNAJB1-PRKACA 融合引起）和多囊肾病。 |
| 分子式 |
C24H19F3N4O2
|
|---|---|
| 分子量 |
452.428475618362
|
| 精确质量 |
452.146
|
| 元素分析 |
C, 63.71; H, 4.23; F, 12.60; N, 12.38; O, 7.07
|
| CAS号 |
2810747-89-6
|
| PubChem CID |
164603354
|
| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
|
| LogP |
3.2
|
| tPSA |
90.9
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
33
|
| 分子复杂度/Complexity |
715
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
|
| SMILES |
CC1=CNC2=NC=CC(=C12)C3=NC=C(C=C3)C(=O)N[C@H]4[C@H](CC5=C4C(=CC(=C5)C(F)F)F)O
|
| InChi Key |
VRPOVDLLZCQZEG-RXVVDRJESA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C24H19F3N4O2/c1-11-9-30-23-19(11)15(4-5-28-23)17-3-2-12(10-29-17)24(33)31-21-18(32)8-13-6-14(22(26)27)7-16(25)20(13)21/h2-7,9-10,18,21-22,32H,8H2,1H3,(H,28,30)(H,31,33)/t18-,21-/m0/s1
|
| 化学名 |
N-[(1R,2S)-5-(difluoromethyl)-7-fluoro-2-hydroxy-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl]-6-(3-methyl-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-4-yl)pyridine-3-carboxamide
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| 别名 |
BLU2864; BLU-2864; BLU 2864; orb1819252; SCHEMBL27203788; SCHEMBL29854562;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~100 mg/mL (221.0 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2103 mL | 11.0514 mL | 22.1029 mL | |
| 5 mM | 0.4421 mL | 2.2103 mL | 4.4206 mL | |
| 10 mM | 0.2210 mL | 1.1051 mL | 2.2103 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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