ATR ( IC50 = 1 nM ); PI3Kδ ( IC50 = 6.8 μM ); DYRK ( IC50 = 10.8 μM )

体外活性：AZD6738 是一种口服的基于吗啉代嘧啶的选择性 ATR（共济失调毛细血管扩张和 rad3 相关）激酶抑制剂，IC50 为 1 nM。 ATR是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在多种癌细胞中表达上调，在DNA修复、细胞周期进程和生存中发挥关键作用；它是由 DNA 复制相关压力期间造成的 DNA 损伤激活的。 AZD6738 具有潜在的抗肿瘤活性。通过口服途径给药后，AZD6738 通过阻断丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 CHK1 的下游磷酸化来选择性抑制 ATR 活性，从而阻止 ATR 介导的信号传导，并导致 DNA 损伤检查点激活的抑制、DNA 损伤修复的破坏，以及诱导肿瘤细胞凋亡。在能够复制的体外模型中，开始 AZD6738 治疗后 70 小时以上，γH2AX 信号持续存在。复制叉停滞可能会破坏 DNA 双链断裂的形成和共济失调毛细血管扩张突变 (ATM) 激酶的激活。作为跨癌细胞系组的单一药物，AZD6738 具有活性。在缺乏 ATM 通路的细胞系中，AZD6738 的敏感性增强。激酶测定：AZD6738 是 ATR 激酶活性的有效抑制剂，对分离的酶的 IC50 为 0.001 μM，对细胞中 ATR 激酶依赖性 CHK1 磷酸化的 IC50 为 0.074 μM。细胞测定：AZD6738 以 30 mM 溶解在 DMSO 中，并在 DMSO 中稀释至所需的工作浓度。对于 AZD6738 剂量反应实验，所有条件和对照的培养基中最终 DMSO 浓度为 0.1%，对于 AZD6738 + 化疗活力实验为 0.05%，对于涉及 0.3 μM 和 1.0 μM 剂量 AZD6738 的所有实验为 0.025%。

在 ATM 缺乏但 ATM 不充分的体内模型中，单独使用 AZD6738 治疗可在等效的耐受剂量下显着抑制肿瘤的活性。电离辐射 (IR) 是一种 DNA 损伤诱导剂。当AZD6738和IR一起使用时，观察到消退或抗肿瘤生长抑制活性。在肿瘤组织中，AZD6738 与持续的 γH2AX 染色增加相关。在正常肠道组织或骨髓中，AZD6738 治疗仅短暂增加 γH2AX 染色。

AZD6738 是 ATR 激酶活性的有效抑制剂，对分离酶的 IC50 为 0.001 μM，对依赖 ATR 激酶的细胞中 CHK1 磷酸化的 IC50 为 0.074 μM。 ATR和ATM是DNA损伤信号激酶，可磷酸化数千种底物。ATR激酶活性在受损的复制叉和切除的DNA双链断裂（DSBs）处增加。在DSBs处ATM激酶活性增加。ATM已被广泛研究，因为不表达ATM蛋白的共济失调毛细血管扩张症患者是确定的最具放射敏感性的患者。由于ATM不是必需的蛋白质，人们普遍认为ATM激酶抑制剂在临床上会有很好的耐受性。ATR已经被广泛研究，但由于发现ATR是一种必需蛋白，并且人们普遍认为ATR激酶抑制剂在临床上是有毒的，因此进展变得复杂。

Ceralasertib (AZD6738) 溶解至 30 mM 浓度后，在 DMSO 中稀释至适当的工作浓度。对于 Ceralasertib (AZD6738) 剂量反应实验，所有条件和对照的培养基中最终 DMSO 浓度为 0.1%；对于 Ceralasertib (AZD6738) + 化疗活力实验，为 0.05%；对于所有涉及 0.3 μM 和 1.0 μM 剂量的 Ceralasertib (AZD6738) 的实验，该比例为 0.025%[1]。

小鼠：将Ceralasertib (AZD6738)溶于DMSO中，浓度为25 mg/mL或50 mg/mL，然后用丙二醇以1:5的比例稀释。Ceralasertib (AZD6738)以灌胃方式给药，连续14天，剂量为25 mg/kg (H23)或50 mg/kg (H460)。给药体积为10 mL/kg。[1] 雌性无胸腺裸鼠(Foxn1nu)，6-7周龄，购自Harlan Laboratories。将H23细胞(3 × 10⁶个细胞)或H460细胞(7 × 10⁵个细胞)以100 μL的体积（等量的1×PBS和Matrigel）皮下注射到小鼠右后侧腹部。接种前，对细胞进行支原体检测。当H23组小鼠肿瘤体积达到约220 mm³ (± 15%)或H460组小鼠肿瘤体积达到约180 mm³ (± 15%)时，开始接受治疗。肿瘤体积计算公式为(L × W²)/2。AZD6738采用灌胃法给药（每日一次，共14天），剂量分别为25 mg/kg (H23组)或50 mg/kg (H460组)。顺铂采用腹腔注射法给药（每7天一次，共2次），剂量为3 mg/kg。给药体积为10 mL/kg。生长曲线描绘了肿瘤体积随时间变化的平均值（± SEM）。平均肿瘤生长抑制率计算公式为TGI = (1–(Tf–T0)/(Cf–C0))*100，其中Tf和T0分别代表治疗组的最终和初始平均肿瘤体积，Cf和C0分别代表载体对照组的最终和初始平均肿瘤体积。平均肿瘤消退率计算公式为：消退率 % = ((T0–Tf)/T0)*100。对于 H460 异种移植瘤，实验终点定义为治疗组中任何单个肿瘤达到 2000 mm3 的日期。肿瘤生长延迟定义为给定治疗组达到终点所需天数与载体对照组的差值。[1]

吸收：口服后，Ceralasertib 可迅速吸收，患者血浆药物浓度达峰时间 (tmax) 中位数约为 1 小时。
生物利用度：小鼠临床前研究表明，Ceralasertib 的口服生物利用度呈剂量依赖性。随着剂量增加，药物暴露量增加的幅度大于剂量比例，导致在所研究的最低剂量和最高剂量之间，生物利用度大约增加两倍。这种非线性行为归因于可饱和的首过代谢。
分布：在小鼠体内，Ceralasertib 可迅速且广泛地分布于大多数组织，但脑和脊髓除外。
代谢：Ceralasertib 会经历显著的首过代谢。代谢分析显示，随着剂量增加，代谢比率降低，这进一步支持了首过代谢饱和的假设，该代谢涉及肠道和肠系膜代谢。一项正在进行的临床研究旨在鉴定和定量其在血浆和排泄物中的主要代谢物。
消除：患者体内的终末血浆半衰期 (t1/2) 约为 8 至 11 小时。一项临床 ADME 研究正在调查主要的排泄途径，该研究将测量尿液和粪便中放射性标记剂量的回收率。
线性：与生物利用度类似，Ceralasertib 表现出非线性药代动力学特征，在 20 至 320 mg 的剂量范围内，群体药代动力学模型观察到的暴露量增加并非与剂量成正比。使用随剂量增加线性下降的相对生物利用度参数来描述这种行为。

血液学毒性（临床）：Ceralasertib 的主要剂量限制性毒性 (DLT) 为血小板减少症（血小板计数低）。在一项 Ceralasertib 与卡铂联合用药的 I 期研究中，最常见的 ≥3 级不良事件为贫血 (39%)、血小板减少症 (36%) 和中性粒细胞减少症 (25%)。群体药代动力学-安全性模型显示，血小板和中性粒细胞恢复需要两周的停药期。停药期过短可能导致恢复不完全，并增加后续治疗周期中发生严重（≥3 级）不良事件的概率。单药治疗时，预计每日两次，每次 160 mg 或 240 mg，持续 14 天，可使严重血液学毒性的发生概率较低 (<20%)。 PATRIOT I期研究证实，间歇给药方案（例如，28天周期中的14天）比连续给药方案耐受性更好，因为其血液毒性更低。
心脏毒性（临床前）：一项小鼠体内毒理学比较研究发现，Ceralasertib具有独特的毒性特征。虽然没有其他ATR抑制剂（ATRi）会加剧全身照射（TBI）的毒性，但单次注射Ceralasertib后观察到了心脏毒性，而其他受试的ATRi（elimusertib或berzosertib）则未观察到。这种效应可能与Ceralasertib的高游离血浆药物浓度有关。
其他毒性（临床前）：同一项研究观察到，所有三种受试的ATRi，包括Ceralasertib，在给药后48小时内均引起小鼠中性粒细胞增多症（中性粒细胞增多）。

[1]. The orally active and bioavailable ATR kinase inhibitor AZD6738 potentiates the anti-tumor effects of CDDP to resolve ATM-deficient non-small cell lung cancer in vivo.Oncotarget. 2015 Dec 29;6(42):44289-305.

[2]. Anti-tumor activity of the ATR inhibitor AZD6738 in HER2 positive breast cancer cells. Int J Cancer. 2017 Jan 1;140(1):109-119.

[3]. Synthetic lethality in chronic lymphocytic leukaemia with DNA damage response defects by targeting the ATR pathway. Lancet.2015 Feb 26;385 Suppl 1:S58.
[4]. Bridging the gap between in vitro and in vivo: Dose and schedule predictions for the ATR inhibitor AZD6738. Sci Rep.2015 Aug 27;5:13545.

ATR 和 ATM 是 DNA 损伤信号激酶，可磷酸化数千种底物。ATR 激酶活性在受损的复制叉和切除的 DNA 双链断裂 (DSB) 处增强。ATM 激酶活性在 DSB 处增强。由于共济失调毛细血管扩张症 (ATM) 患者（不表达 ATM 蛋白）是已知的放射敏感性最高的患者群体，因此 ATM 得到了广泛的研究。由于 ATM 并非必需蛋白，人们普遍认为 ATM 激酶抑制剂在临床上具有良好的耐受性。ATR 也得到了广泛的研究，但由于发现 ATR 是一种必需蛋白，人们普遍认为 ATR 激酶抑制剂在临床上具有毒性，因此 ATR 的研究进展较为复杂。我们描述了一种口服活性高且生物利用度高的 ATR 激酶抑制剂 AZD6738。AZD6738 可诱导非小细胞肺癌 (NSCLC) 细胞系发生细胞死亡和衰老。 AZD6738 可增强顺铂和吉西他滨在 ATM 激酶信号通路完整的非小细胞肺癌 (NSCLC) 细胞系中的细胞毒性，并在 ATM 缺陷的 NSCLC 细胞中与顺铂产生显著的协同作用。与预期相反，小鼠连续 14 天每日服用 AZD6738 和 ATR 激酶抑制剂后耐受性良好，并且在异种移植模型中增强了顺铂的治疗效果。值得注意的是，顺铂和 AZD6738 的联合用药可治愈 ATM 缺陷的肺癌异种移植瘤。[1]

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共济失调毛细血管扩张症和 Rad3 相关蛋白 (ATR) 是 DNA 损伤的传感器，可诱导同源重组 (HR) 依赖性修复。ATR 是 DNA 损伤修复 (DDR) 的主要调节因子，通过信号传导控制 DNA 复制、DNA 修复和细胞凋亡。因此，ATR通路可能是一个极具吸引力的新药研发靶点。本研究旨在探讨ATR抑制剂AZD6738在人乳腺癌细胞中的抗肿瘤作用及其潜在机制。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物（MTT法）检测AZD6738对人乳腺癌细胞系的生长抑制作用。此外，还进行了细胞周期分析、蛋白质印迹、免疫荧光和彗星试验，以阐明AZD6738的作用机制。结果表明，AZD6738在人乳腺癌细胞系中具有抗增殖和DNA损伤反应（DDR）抑制作用。在13种细胞系中，MTT法测得的9种细胞系的IC50值均小于1 μmol/L。我们选择了两种细胞系SK-BR-3和BT-474进行进一步评估，重点关注人表皮生长因子受体2（HER2）阳性乳腺癌细胞。对药物敏感的SK-BR-3乳腺癌细胞（而非敏感性较低的BT-474乳腺癌细胞）表现出凋亡水平升高和S期阻滞，以及磷酸化检查点激酶1（CHK1）和其他修复标志物的表达水平降低。功能性CHK1表达降低导致同源重组（HR）失活，进而诱导DNA损伤积累。AZD6738与顺铂具有协同作用。了解AZD6738在HER2阳性乳腺癌细胞中的抗肿瘤活性和机制，为未来针对HER2阳性乳腺癌治疗中DNA损伤反应（DDR）的临床试验奠定了基础。[2]

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背景：DNA损伤反应（DDR）缺陷，特别是TP53和双等位基因共济失调毛细血管扩张症突变（ATM）异常，与慢性淋巴细胞白血病（CLL）的基因组不稳定性、克隆演化和化疗耐药性相关。目前尚缺乏能够长期控制DDR缺陷CLL患者病情的疗法。我们使用一种新型ATR抑制剂AZD6738，研究了ATR通路抑制作为一种合成致死策略，用于靶向治疗具有这些缺陷的CLL细胞。方法：通过蛋白质印迹和关键DDR蛋白的免疫荧光分析评估AZD6738的作用。采用 CellTiter-Gloluminescence 法（Promega，美国威斯康星州麦迪逊市）和碘化丙啶排除法评估细胞毒性。将双等位基因 TP53 或 ATM 失活的原代 CLL 细胞异种移植到 NOD/Shi-scid/IL-2Rγ 小鼠体内。用 AZD6738 或载体处理后，通过流式细胞术分析浸润脾脏中的肿瘤负荷，并通过荧光原位杂交检测 17p(TP53) 或 11q(ATM) 缺失来分析亚克隆组成。结果：在基因毒性应激存在的情况下，AZD6738 可有效且特异性地抑制 ATR 信号通路，并代偿性激活增殖期 CLL 细胞中的 ATM/p53 通路。在p53或ATM缺陷细胞中，AZD6738处理导致复制叉停滞和未修复DNA损伤的积累，表现为γH2AX和53BP1聚集灶的形成，这些损伤会延续到有丝分裂期，最终导致细胞因有丝分裂灾难而死亡。AZD6738对ATM或p53缺陷的CLL细胞表现出选择性细胞毒性，并且与细胞毒性化疗药物联合使用具有高度协同作用。这一发现已在DDR缺陷型CLL的原代异种移植模型中得到证实，AZD6738治疗可降低肿瘤负荷，并选择性地减少具有ATM或TP53改变的CLL亚克隆。结论：我们阐明了一种新型治疗方法的机制，并证实了其在体外和体内的疗效，该方法特异性靶向p53缺失或ATM缺失的CLL细胞。这种方法可能有助于避免克隆进化，而克隆进化是治疗耐药性和疾病复发的主要原因之一。[3] 了解药物剂量和给药方案的治疗效果对于指导临床试验的设计和实施至关重要。单药疗法，尤其是联合疗法的日益复杂化，给肿瘤药物研发的临床阶段带来了巨大挑战。我们采用系统药理学方法，扩展了现有的肿瘤生长PK-PD模型，并加入了细胞周期的机制模型，从而能够模拟ATR抑制剂AZD6738与电离辐射的单药和联合治疗。利用AZD6738，我们开发了多参数细胞检测方法，用于测量DNA损伤和细胞周期转换，从而提供适用于模型校准的定量数据。我们体外校准的细胞周期模型能够预测体内小鼠异种移植研究中观察到的肿瘤生长。该模型正被用于AZD6738的I期临床试验设计，旨在通过定量预测剂量和给药方案来改善患者治疗。[4]

458.1736245

C, 55.01; H, 5.72; N, 18.33; O, 13.96; S, 6.99

1352280-98-8

1352226-88-0;1352280-98-8 (formate);1352226-97-1 (racemic);

154701782

Typically exists as solid at room temperature

154Ų

3

9

4

32

734

2

JOKLXYXIZOXQHY-FQAMYIAXSA-N

InChI=1S/C20H24N6O2S.CH2O2/c1-13-12-28-10-9-26(13)17-11-16(20(5-6-20)29(2,21)27)24-19(25-17)15-4-8-23-18-14(15)3-7-22-182-1-3/h3-4,7-8,11,13,21H,5-6,9-10,12H2,1-2H3,(H,22,23)1H,(H,2,3)/t13-,29-/m1./s1

4-[4-[1-[[S(R)]-S-Methylsulfonimidoyl]cyclopropyl]-6-[(3R)-3-methyl-4-morpholinyl]-2-pyrimidinyl]-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine, formic acid

AZD-6738 formate; AZD6738; 1352280-98-8; Ceralasertib formate; AKOS040748106; AZD 6738

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。